RecombinantTaqDNA聚合酶使用说明书

RecombinantTaqDNA聚合酶使用说明书制品货号DP1001包装剂量250U/50pL制品保存-20℃制品说明本品为重组TaqDNA聚合酶，来源于Thermusaquaticus大肠杆菌发酵表达、经分离、纯化而获得它与野生型TaqDNA聚合酶具有相同的基因扩增功能，但突变消除了99%的9-3外切酶活性，提高了扩增效率用本制品扩增获得的PCR产物的3端有一个〃A〃碱基凸出因此可直接用于〃T-A〃克隆过程制品内容PangorT叫5U/pl50pLlOxPCRBufferMg2+Plus1mLdNTPMixture各

2.5mM800pL6xLoadingBuffer*1mL*电泳时，PCR反应液与6xLoadingBuffer的比例为5:1lOxPCRBufferMg2+Plus的组成Tris-HCIpH

8.8100mMKCI500mMMgCI215mMNP

400.8%V/VdNTPMixture:dATP、dCTP、dGTP、dTTP各

2.5mM混合物，不用稀释可直接用于PCR反应活性定义用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/弓物，在74T30分钟内，摄入10nmol的全核甘酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）制品纯度）10U的本酶和

0.6Jjg的人-HindHI在74（下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化）10U的本酶和

0.6用的SupercoiledpBR322DNA在74（下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化制品用途）PCR法扩增DNA）DNA序歹I」测定PCR反应性能1）以入DNA为模板可以很好地扩增8kb的DNA片段2）以人基因组DNA为模板，可很好地扩增

3.0kb（p53基因的DNA片段应用例L按下列组份配制PCR反应液PangorTaq5U/pl

0.25pLlOxPCRBufferMg2+Plus5pLdNTPMixture各

2.5mM4pLTemplateDNA1-5ngForwardPrimer10pM2pLReversePrimer10pM2pL灭菌蒸储水加至50pl

2.PCR反应参数预变性（95（3min.）是常规步骤，PCR循环中的变性通常9430秒，复性温度根据引物的Tm值调整，通常比引物Tm低2~4℃延伸通常72（扩增片段2kb以下每1分钟/kb大于2kb2分钟/kbPCR最佳扩增在25循环时到达现在的PCR结束前都有一个补全延伸72金5〜10分钟，最后是短时保存温度:4~25℃.注）PCR反应条件视模板、引物等构成条件不同而各异在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况设定最佳的反应条件（温度、时间等\注意事项PCR的反应液请在冰上配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应这种冷启动法可增强PCR扩增的特异性，减少非特异性扩增，取得更好的PCR结果。