厌氧性细菌及检验

厌氧性细菌及检验•考点＞概念及分类＞分布与临床意义＞厌氧菌标本的采集与送检＞分离与鉴定＞常见厌氧性细菌【内容讲解】

一、厌氧菌概述概念一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌分类L有芽胞氏氧笛一A梭芮园能否形成芽胞—LG•无芽胞杆的G.无芽胞杆菌一无芽胞庆卓笛一G货氧球菌«一G•厌氧杆菌

二、厌氧菌感染（-）厌氧菌在正常人体的分布及感染类型.厌氧菌在正常人体的分布＞正常人的肠道、口腔、阴道等处均有大量的厌氧菌寄居＞厌氧菌与需氧菌和兼性厌氧菌共同组成人体的正常菌群，其中绝大多数为无芽胞厌氧菌＞其中肠道中的厌氧菌数量是大肠埃希菌的1000〜10000倍表5-22-2重要的厌氧菌种类及其在正常人体内的分布厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道

一、芽胞菌革兰阳性杆菌梭状芽胞杆菌属00土++土土

二、无芽胞菌

（一）革兰阳性杆菌【正确答案】D【例题】破伤风的紧急预防应注射A、破伤风减毒活疫苗B、破伤风类毒素C、百白破三联疫苗D、破伤风抗毒素E、丙种球蛋白【正确答案】D【例题】在人体肠道正常菌群中占绝对优势的有A、双歧杆菌B、伤寒沙门菌C、大肠杆菌D、变形杆菌E、无芽胞厌氧菌【正确答案】E【例题】引起牙周脓肿常见的病原菌A、铜绿假单胞菌B、表皮葡萄球菌C、大肠埃希菌D、消化链球菌E、甲型溶血性链球菌【正确答案】D【例题】肉毒梭菌引起的食物中毒是以A、消化系统症状为主B、呼吸系统症状为主C、泌尿系统症状为主D、神经系统症状为主E、循环系统症状为主【例题】无芽胞厌氧菌可致疾病有A、败血症B、盆腔炎C、腹部脓肿D、牙周脓肿E、心内膜炎【正确答案】ABCDE【例题】女性，44岁，因肛裂引起直肠与会阴部瘦管，取瘦管脓性分泌物直接涂片检查为革兰阴性杆菌，但未分离出病原菌1应做进一步的细菌学检查是A、标本用厌氧方法培养B、标本用普通方法培养C、标本用高渗培养基培养D、标本在5%〜10%二氧化碳中培养E、标本用SS琼脂平板培养【正确答案】A2采集与送检标本时应注意A、室温放置一段时间后再接种培养基B、冰箱放置一段时间后再接种培养基C、立即放入厌氧标本收集瓶中，迅速送检D、37℃放置一段时间后再接种厌氧培养基E、22℃放置一段时间后再接种厌氧培养基【正确答案】C3标本最适合接种的培养基是A、巧克力琼脂平板B、含牛心脑浸液的血平板C、沙保弱培养基D、碱性蛋白陈水培养基E、尿素培养基【正确答案】B4该患者感染的细菌最有可能的是A、肠道无芽胞厌氧菌B、破伤风梭菌C、大肠埃希菌D、产气荚膜梭菌E、艰难梭菌【正确答案】A本章小结

一、分类

二、分布与临床意义

三、厌氧菌标本的采集与送检的注意事项

四、分离与鉴定

五、常见厌氧性细菌.外源性感染梭状芽胞杆菌属引起的感染，其细菌及芽胞来源于土壤、粪便和其他外界环境.内源性感染无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播

（二）临床意义.厌氧菌感染的危险因素1）组织缺氧或氧化还原电势降低2）机体免疫功能下降3）某些手术及创伤4）长期应用某些抗菌药物5）深部需氧菌感染.厌氧菌感染的临床及细胞学指征1）感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发感，是产气荚膜梭菌所引起感染的特征2）发生在口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等处的感染，易发生厌氧感染3）深部外伤如枪伤后，以及动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染4）分泌物有恶臭或呈暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染分泌物或脓肿有硫黄样颗粒，为放线菌感染5）分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌，而培养阴性者，或在液体及半固体培养基深部生长的细菌，均可能为厌氧菌感染6）长期应用氨基糖昔类抗生素无效的病例，可能是厌氧菌感染7）胃肠道手术后发生的感染

三、厌氧菌标本的采集与送检注意＞标本绝对不能被正常菌群所污染;＞应尽量避免接触空气

1.采集表5-22-2不同部位标本采集法标本来源收集方法针管抽取后穹窿穿刺抽取肺穿刺术胸腔穿刺术用静脉注射的塑料导管穿入感染部位抽吸无菌外科切开膀胱穿刺术＞标本送到实验室，应在20〜30分钟内处理完毕，不超过2h＞如不能及时接种，可将标本置室温保存1针筒运送；2无菌小瓶运送；3棉拭子运送；4厌氧罐或厌氧袋运送

四、厌氧菌的分离与鉴定临床标本.

（二）分离培养主要分初代培养和次代培养两个阶段，初代培养的一般原则是

（1）先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择；

（2）及量边冒/E用在菌U:HQ的小选择性用性居；

（3）最好多选1〜2种覆盖面不同的选择性培养基；

（4）尽量保证培养基新鲜；

（5）要考虑到微需氧菌存在的可能.选用适当的培养基接种培养基的使用，应注意下列各点＞尽量使用新鲜培养基，2〜4h内用完；＞应使用预还原培养基，预还原24〜48h更好；＞可采用预还原灭菌法制作的培养基；＞液体培养基应煮沸lOmin以驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种；＞培养厌氧菌的培养基均应营养丰富，并加有还原剂与生长刺激因子培养基的选择初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基＞非选择培养基本培养基使分离的厌氧菌不被抑制，几乎能培养出所有的厌氧菌u常使用心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆豚肝粉琼脂（GAM）、胰豚酵母琼脂（EG）、CDC厌氧血琼脂等＞选择培养基为有目的选择常见厌氧菌株，以便尽快确定厌氧的种类选择培养基.每份标本至少接种3个血平板，分别置于有氧，无氧及5%〜10%C02环境中培养===.厌氧培养法厌氧罐培养法；气袋法；气体喷射法；厌氧手套箱培养法（迄今厌氧菌培养的最佳仪器之一）；平板焦性没食子酸法；生物耗氧法；高层琼脂培养法.厌氧状态的指示美蓝和刃天青无氧时均呈白色，有氧时美蓝呈蓝色，刃天青呈粉红色分离培养厌氧菌失败的原因

①培养前未直接涂片和染色镜检；

②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长；

③未用新鲜配制的培养基；

④未用选择培养基；

⑤培养基未加必要的补充物质；

⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为唯一厌氧菌培养基；

⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气；

⑧催化剂失活；

⑨培养时间不足；⑩厌氧菌的鉴定材料有问题

（三）鉴定试验

（1）形态与染色可为厌氧菌的鉴定提供参考依据

（2）菌落性状不同的厌氧菌其菌落形态和性质不同

（3）抗生素敏感性鉴定试验卡那霉素可用于梭杆菌属与类杆菌属的区分，甲硝陛用于厌氧菌与非厌氧菌的区分

（4）生化特性主要包括多种糖发酵试验、吗I□朵试验、硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂肪酸酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验、胆汁肉汤生长试验以及硫化氢试验等

（5）气液相色谱可以利用该技术来分析厌氧菌的终末代谢产物，已成为鉴定厌氧菌及其分类的比较可靠的方法

五、常见厌氧菌（-）破伤风杆菌.生物学性状

（1）形态与染色G+细长，有周鞭毛，无荚膜芽胞在菌体顶端，呈圆形，使整个细菌体呈鼓槌状

（2）培养特性专性厌氧菌，在普通培养基上不易生长血平板扁平、灰白色、半透明、边缘不齐的菌落

（3）生化反应本菌一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，多数菌株吧口朵阳性，不还原硝酸盐对蛋白质有微弱的消化作用

（4）抗原构造本菌有菌体

（0）抗原和鞭毛（H）抗原

（5）抵抗力繁殖体的抵抗力与其他细菌相似，但芽胞体抵抗力非常强，在干燥的土壤和尘埃中可存活数十年微生物学检查破伤风的临床表现典型，根据临床症状即可作出诊断，所以一般不做细菌学检查

（1）特殊需要时，可从病灶处取标本涂片，革兰染色镜检

（2）需要培养口寸，将标本接种疱肉培养基培养

（3）也可进行动物试验.临床意义＞引起人类破伤风，对人的致病因素主要是它产生的外毒素＞毒素对中枢神经系统有特殊的亲和力＞主要症状为骨骼肌痉挛典型的临床症状为咀嚼肌痉挛造成的牙关紧闭、呈苦笑面容，以及颈部、躯干及四肢肌肉持续强直性痉挛导致的角弓反张，呼吸困难，终因窒息死亡.治疗原则J1）正确处理创口，包括清刨、扩创等，防止厌氧微环境J2）可以尽早注射破伤风抗毒素，也可同时给予类毒素在注射抗毒素前应做皮试J3）采用四环素、红霉素等进行抗感染治疗

（二）产气荚膜梭菌.生物学性状

（1）形态与染色革兰阳性粗大杆菌，芽胞呈椭圆型，次极端在机体内可形成明显的荚膜

（2）培养特性厌氧但不十分严格最适温度为45℃血平板双层溶血环疱肉培养基产生大量气体牛乳培养基分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时产生大量气体，出现“汹涌发酵”现象

（3）生化反应本菌代谢活跃，可分解多种糖类，产酸产气，能液化明胶

（4）分型根据其产生的毒素，大体可将产气荚膜梭菌分成5个型别（A、B、C、D、E）对人类致病的主要为A型.微生物学检查

（1）直接涂片镜检:在创口深部取材涂片，革兰染色镜检，这是极有价值的快速诊断方法

（2）分离培养及鉴定可取坏死组织制成悬液，接种血平板或疱肉培养基中，厌氧培养，取培养物涂片镜检，利用生化反应进行鉴定.临床意义致病物质外毒素及多种侵袭酶类，外毒素以工毒素为主，本质为卵磷脂酶；还可产生透明质酸酶、DNA酶等所致疾病可引起气性坏疽及食物中毒也可见于工伤造成的大面积开放性骨折及软组织损伤等表现为局部组织剧烈胀痛，局部严重水肿，水气夹杂，触摸有捻发感，并产生恶臭某些A型菌株产生的肠毒素，可引起食物中毒，病人表现为腹痛、腹泻，1〜2天可自愈.治疗原则对感染局部应及时处理，包括扩创，冲洗，切除坏死组织尽早使用多价抗毒素血清，同时用大剂量青霉素杀灭病原菌青霉素为首选抗生素，万古霉素为次选抗生素

（三）肉毒梭菌.生物学性状＞G+短粗杆菌，芽胞呈椭圆型，粗于菌体，位于次极端，使细菌呈汤匙状或网球拍状＞严格厌氧可在普通琼脂平板和血平板上生长＞根据所产生毒素的抗原性不同，肉毒梭菌可分为8个型，引起人类疾病的以A、B型最为常见＞肉毒梭菌芽胞体抵抗力很强＞肉毒毒素对酸的抵抗力比较强，但不耐热，煮沸1分钟即可被破坏肉毒毒素的毒性是已知最剧烈的毒素.微生物学检查

（1）分离培养与鉴定怀疑为婴儿肉毒病的粪便中检出本菌，并证实其是否产生毒素，诊断意义较大

（2）毒素检测可取培养滤液或悬液上清注射小鼠腹腔，观察动物出现的中毒证状.临床意义＞主要可引起食物中毒，属单纯性毒性中毒并非细菌感染＞胃肠症状很少见，主要表现为某些部位的肌肉麻痹重者可死于呼吸困难与衰竭.治疗原则尽早诊断，迅速注射A、B、E三型多价抗毒素，同时进行对症治疗

（四）艰难梭菌.生物学性状粗长杆菌，有鞭毛，次极端有卵圆形芽胞.微生物检验分离培养困难所以在临床上一般不采用分离培养病原菌的方法，可通过临床表现及细胞毒素试验阳性检测来进行诊断CCFA平板上形成黄色，粗糙型的菌落脂酶，卵磷脂酶阴性在紫外线照射下呈黄绿色荧光.临床意义＞产生A、B两种毒素，毒素A为肠毒素，可使肠壁出现炎症，细胞浸润，肠壁通透性增加，出血及坏死毒素B为细胞毒素，损害细胞骨架，致细胞固缩坏死，直接损伤肠壁细胞，因而导致腹泻及假膜形成＞本菌感染与大量使用抗生素有关.治疗原则及时调整或停止相关抗生素的使用，尤其是那些广谱抗生素可以用万古霉素加甲硝哇进行抗感染治疗

六、无芽胞厌氧菌

（一）主要种类.G一厌氧杆菌有8个属，类杆菌属中的脆弱类杆菌最为重要，形态呈多形性，有荚膜，生长迅速.G一厌氧球菌有3个属，其中以韦荣菌属最重要，为咽喉部主要厌氧菌.仁厌氧球菌有5个属，其中有临床意义的是消化链球菌属，主要寄居在阴道，生长缓慢，培养需5〜7天.仁厌氧杆菌有7个属，其中以下列3个属为主

（1）丙酸杆菌属小杆菌，无鞭毛，能在普通培养基上生长，需要2〜5天，以座疮丙酸杆菌最为常见

（2）双歧杆菌呈多形性，有分枝，无动力，严格厌氧，耐酸齿双歧杆菌与齿雷齿和牙周炎有关

（3）优杆菌属单一形态或多形态，动力不定，严格厌氧，生化反应活泼，生长缓慢，最常见的是迟钝真杆菌

（二）微生物检验要从感染灶深部采取标本，立即送检L直接涂片镜检观察细菌形态、染色及菌量.分离培养与鉴定分离培养是鉴定无芽胞厌氧菌感染的关键步骤最常用的培养基是以牛心脑浸液为基础的血平板证实为专性厌氧菌后，再经生化反应进行鉴定

（三）临床意义均为内源性感染，所致疾病有.败血症主要由脆弱类杆菌引起，其次为G+厌氧球菌.中枢神经系统感染主要由G一厌氧杆菌引起，常见脑脓肿.口腔与牙齿感染主要由消化链球菌、产黑素类杆菌等引起.呼吸道感染主要由普雷沃菌属、坏死梭杆菌、核梭杆菌、消化链球菌和脆弱类杆菌引起腹部和会阴部感染主要由脆弱类杆菌引起.女性生殖道感染主要由消化链球菌属、普雷沃菌属和口卜咻单胞菌等引起.无芽胞厌氧菌尚可引起皮肤和软组织感染、心内膜炎等

（四）治疗原则L正确处理感染灶，包括清洗伤口，去除坏死组织和异物、引流等.合理使用抗生素进行抗感染治疗

七、厌氧球菌在临床标本中检出的厌氧菌约有1/4为厌氧球菌其中与临床有关的有革兰阳性黑色消化球菌和消化链球菌属及革兰阴性的韦荣球菌属（-）黑色消化球菌临床意义黑色消化球菌通常寄生在人的体表及与外界相通的腔道中，是人体正常菌群的成员之一本菌可引起人体各部组织和器官的感染（肺部、腹腔、胸膜、口腔、颅内、阴道、盆腔、皮肤和软组织等）常与其他细菌混合感染，也可从阑尾炎、膀胱炎、腹膜炎以及产后败血症的血中分离出来（-）消化链球菌属临床意义在《伯杰氏系统细菌学手册》1986年第2卷中把消化链球菌属分成厌氧消化链球菌、不解糖消化链球菌、口弓I噪消化链球菌、大消化链球菌、微小消化链球菌等共9个菌种本菌在临床标本中以厌氧消化链球菌最常见产生消化链球菌则很少见消化链球菌可引起人体各部组织和器官的感染，又以混合感染多见

（三）韦荣球菌属临床意义韦荣球菌属有小韦荣球菌和产碱韦荣球菌两个种它们都是口腔、咽部、胃肠道及女性生殖道的正常菌群大多见于混合感染，致病力不强，小韦荣氏球菌常见于上呼吸道感染中，而产碱韦荣球菌则多见于肠道感染

八、厌氧环境的指示L化学法亚甲蓝指示剂或刃天青指示剂.微生物法专性需氧菌【例题】哪些标本不符合厌氧菌检验要求A、血B、咽拭子C、深部脓肿穿刺液D、牙周脓肿穿刺液E、膀胱穿刺液【正确答案】B【例题】分离培养厌氧菌失败的原因可能是A、厌氧装置的催化剂失活B、标本在空气中放置过久C、培养基不是新鲜配置D、培养基成分不合适E、以上均是【正确答案】E【例题】下列细菌除哪种外，均能产生肠毒素A、白喉棒状杆菌B、霍乱弧菌C、大肠埃希菌D、产气荚膜梭菌E、金黄色葡萄球菌【正确答案】A【例题】汹涌发酵现象可鉴定A、炭疽芽胞杆菌B、艰难梭菌C、肉毒梭菌D、产气荚膜梭菌E、破伤风梭菌乳杆菌属00++++++双歧杆菌属00+++0±优杆菌属土±+++0±丙酸杆菌属++++++*±放线菌属0±+++00

（二）革兰阴性杆菌类杆菌属0+++++梭杆菌属0+++++±普雷沃菌属0+++++++紫单胞菌属0+++++++

（三）革兰阳性球菌消化球菌属++++++±++消化链球菌属++++++±++

（四）革兰阴性球菌韦荣菌属0+++±+泡，长短不一产黑素普雷沃菌G-b多形性，长短不一，有浓染和空泡，无鞭毛和芽胞标本有恶臭，琥珀味，紫外线照射发红色荧光具核梭杆菌G-b菌体细长，两头尖，紫色颗粒菌体长轴成双排列，标本有J酸味坏死梭杆菌G-b高度多形性，长短不一，菌体中部膨胀呈圆球形韦荣球菌G-c极小的革兰阴性球菌消化链球菌G+c革兰阳性呈链状的小球菌乳酸杆菌G+b细长，有时多形性，呈单、双、短链或栅状排列座疮丙酸杆菌G+b排列特殊呈X、丫、V或栅状，标本有丙酸气味双歧杆菌G+b多形性，有分支呈丫、V形成棒状，标本有醋酸气味放线菌G+b分支呈棒状、X、丫、V或栅状，脓汁中得黄色颗粒，有琥珀酸味破伤风杆菌G+b细长、梭形或鼓槌形，有芽胞，有周鞭毛产气荚膜梭菌G+b粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞，有荚膜艰难梭菌G+b粗长杆菌，有芽胞，有粼史毛，近来发现有荚膜培养基细菌KVLB血平板产黑素类杆菌早期产生黑色素七叶昔胆汁平板（BBE）脆弱类杆菌延培养基（梭杆菌选择培养基）梭杆菌臣培养基（优杆菌选择培养基）优杆菌臣培养基（双歧杆菌选择培养基）双歧杆菌卵黄（EYA）及兔血平板（RBA）产气荚膜梭菌CCFA培养基（艰难梭菌选择培养基）艰难梭菌臣培养基韦荣球菌。