病原性球菌及检验

病原性球菌及检验球菌种类许多，依据革兰氏染色的不同，分为G，G两类球菌不有:葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌G有脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌

一、葡萄球菌属

（一）形态与染色葡萄球菌呈不规章堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列为甲性球菌，直径

0.5-

1.5um（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力

（二）分类1965年按血浆凝固酶分为血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括表皮、腐生葡萄球菌.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括金黄色、中间型、家畜葡萄球菌

（三）抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原.蛋白抗原是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白.多糖抗原是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原有型特异性，分A、B、C三型

（四）标本接种.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37°C24-48h培育，可见直径2-3mm产生不同色素的菌落.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培育可形成细小菌落，48h后形成典型菌落.疑为败血症者，抽取静脉血5ml注入50ml葡萄糖肉汤培育基中

（五）培育特性需氧或兼性厌氧，对养分要求不高在20%C（）2环境中，有利于毒力产生最适温度37℃最适PH

7.4DNA中G+C含量30-39%o.在一般琼脂平板上，经37℃、24-48h培育，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、潮湿、有光泽、不透亮、脂溶性色素的菌落，直径一般为但大者也有4-5mm的菌落.在高盐甘露醇血平板上，致病性的的葡萄球菌能分解甘露醇，其菌落呈淡橙黄色.在卵黄高盐琼脂平板上，由于致病性的的葡萄球菌能产生卵磷脂酶，因此在培育基其菌落四周形成白色沉淀圈.在血平板上，几乎全部的葡萄球菌可产生a、§、丫和6溶血素.在肉汤（液体）培育基中，其生长快速呈匀称混浊状，并有部分细菌沉淀于管底，摇动易消散

（六）生化反应.葡萄球菌触酶（3%H202）试验阳性（+）操作方法挑取培育基上的菌落，置于干净的玻片上，然后滴加3%比2溶液1-2滴，静置之观看结果1min内产生大量气泡为阳性，反之不产生气泡为阴性.葡萄球菌氧化酶试验阴性（-）.多数葡萄球能分解葡萄糖、麦芽糖及庶糖，产酸不产气.多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇、液化明胶和产生血浆凝固酶但并不以次作为有无致病性的依据.葡萄球菌凝固酶试验操作方法取生理盐水4倍稀释的血浆

0.5ml然后挑取3-5个菌落于稀释血浆中作成菌悬液，置37℃水浴观看结果3-4h后消失凝固者为阳性应见到明显的纤维蛋白块，消失羊毛状或纤维状沉淀状物并非真正凝固，应判为阴性.葡萄球0F试验此试脸应使用葡萄球菌专用0F管，不行与非发酵菌用的0F管混用操作方法挑取被检菌落，接种于2支0-F管中，发酵管加灭菌液体石蜡约1cm深，氧化管不加石蜡观看结果35℃孵育24h后观看，产酸即变黄色结果判定见表17表1T0F试验鉴定表

（七）致病性葡萄球菌鉴定依据.涂片镜检为G.性葡萄状排列的球菌2产生脂溶性金黄色色素.平板上菌落有透亮溶血环.血浆凝固酶试验阳性（+）.发酵甘露醇（+）

（八）鉴别诊断.葡萄球菌属的鉴别

（1）葡萄球菌属内27个种的鉴别，祥见（其次版）§476-477页其中27个种的诊断性药物鉴别见表1-2表1-2葡萄球菌属27中细菌药物敏感性鉴别自制

（2）葡萄球菌属内的三个种的鉴别见表1-3表1-3葡萄球菌三个种的鉴别3有临床意义的8种常见葡萄球菌关键性鉴定祥见§478页.微球菌科内的鉴别1葡萄球菌与微球菌鉴别见表1-4表1-4葡萄球菌与微球菌鉴别葡萄球菌属球形、葡萄状发酵葡萄糖产酸+溶葡萄球菌素200ug/ml敏感+甘油-红霉素

0.4ug/ml培育基产酸+夫喃喳酮dooug/片S15mm杆菌肽

0.04U/片RW9mm2葡萄球菌与其它G球菌的鉴别祥见§475页.葡萄球菌与链球菌球菌的鉴别1形态2触酶试验，链球菌阴性九致病性葡萄球菌的致病力的强弱与其产生的毒素和酶有关.溶血毒素可分为a、

3、丫、

6、£五种，对人类有致病作用的主要是a溶血毒素a溶血毒素为蛋白质，对白细胞、血小板几多种组织细胞有毒性作用，能使局部小血管收缩，导致局部缺血坏死p溶血毒素有称“冷热溶血素”丫、6溶血素对人和动物红细胞均能溶血.肠毒素肠毒素是一种可溶性蛋白质，重要作用于肠壁，并通过传入神经到达呕吐中枢而引起呕吐金黄色葡萄球菌的某些溶血菌株产生的一种引起急性胃肠炎的肠毒素，此种菌株可污染食物，入食后可引起中毒葡萄球菌肠毒素分为A、B、G、C

2、C

3、D、E、F等8个血清型除F型与中毒性休克综合征有关外，均能引起食物中毒，以A、D型多见.血浆凝固酶血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的一种与其致病性有关的侵袭性酶，其作用是使血浆中的纤维蛋白原在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬大多数致病性葡萄球菌能产生此酶，因此血浆凝固酶是鉴定葡萄球菌有无致病性的重要指标，但有些血浆凝固酶试脸阴性的菌株也可致病.还有杀白细胞素、.剥脱性毒素、.中毒性休克综合征毒素等

（十）所致疾病本菌感染部位的特点是组织化脓、坏死和脓肿的形成.金黄色葡萄球菌是引起感染最常见的葡萄球菌.表皮葡萄球菌是存在皮肤的正常栖居菌，该菌已成为医院感染的重要病原菌，是导致血培育污染的的常见细菌之一.腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一

（十一）反抗力耐热、耐干燥、耐高盐，是反抗力最强的无芽胞的细菌湿度80℃30-60分钟才能被杀死；在含1075%Nacl培育基中依能生长对万古霉素、替考拉宁、大蒜素、吠喃喳酮较敏感；对青霉素G耐药的菌株据统计1946年仅占14%1966年已高达97%

（十二）药敏须知纸片法检测甲氧西林对葡萄球菌敏感性是用1ug/片的苯喳西林纸片检测的，由于常消失假阳性现象，因此，2004年美国临床试验室标准化委员会（NCCLS）建议.用30ug/片的头抱西丁代替苯喳西林检测mecA介导的葡萄球菌耐药结果应报苯喳西林耐药，而不是头抱西丁耐药.头抱西丁抑菌环直径推断标准

（1）金黄色葡萄球菌，R^19mm;S^20mmo

（2）凝固酶阴性的葡萄球菌，RW24mm;S225mm.报■告.葡萄球菌属药敏纸片选择A、苯喳西林\青霉素）B、万古霉素、复方新诺明、克林霉素、（红霉素:阿齐霉素一克拉霉素b）、LinezolidC、庆大霉素、氯霉素\四环素C、利福平、奎奴普汀/达福普汀I、（环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、加替沙星）

二、链球菌属.形态与染色链球菌呈圆形或椭圆形，直径

0.5-

2.0um成对或长短不一的链状排列为C性球菌，无芽胞、鞭毛、动力；多数菌株在含有血清肉汤的培育基中培育2~4h易见有荚膜，以后又渐渐消逝.分类链球菌分类方法许多，常用的有以下两种1依据链球菌在血平板上溶血状况分成三大类1甲型⑸溶血性链球菌通称甲型链球菌或草绿色链球菌，菌落呈灰色针尖状，在菌落四周有宽广2mm的草绿色溶血环a-型溶血2乙型⑹溶血性链球菌通称溶血性链球菌，菌落较小、灰白色、在四周有宽2~4mm的透亮溶血环§-型溶血3丙型丫链球菌通称不溶血性链球菌，呈灰白色小菌落，在菌落四周无溶血环2依据链球菌细胞壁C抗原抗原构造分类.抗原链球菌含有多种抗原且构造简单，如乙型溶血性链球菌菌体抗原可分为三种1群特异性抗原简称C抗原，常用Lancefield血清分解法，将乙型溶血性链球菌分为A、B、C、D……T等18个群其中缺I、J近年来又增加了U、V群，目前已进展到20个群2型特异性抗原简称表面抗原，是链球菌细胞壁的蛋白质抗原，位于C抗原的外层，其又分为M、T、R、S四种抗原M抗原与链球菌致病性有关依据M抗原的不同，可将A群链球菌分成80个型3非特异性抗原简称P抗原，无特异性，不能用作分类.标本接种1血液标本，以无菌操作取两份血液各2~3ml分别置需氧和厌氧环境中增菌，然后分别接种于两个血平板，置需氧和厌氧环境中培育2脓汁和咽拭标本接可直接种血平板.培育特性本菌大多数为需氧或兼性厌氧，少数为专性厌氧对养分要求较高，在含有葡萄糖、血清、血液、腹水的培育基中生长良好生长温度范围为25〜45℃最适温度为37℃最适PH

7.4-

7.6在5%CO2环境下生长更好DNA中G+C含量34-46%o1在液体培育基如血清肉汤中，溶血性菌株在管底呈絮状或颗粒状沉淀生长，且链较长；不溶血的菌株则呈匀称生长2在血琼脂平板上，经37°C18-24h培育，可形成灰白色、圆形、凸起、直径为

0.1-

0.75um的细小菌落在菌落的四周由于链球菌种类的不同可见不同类型的溶血环如草绿色、透亮或无溶血环.生化反应1链球菌触酶试验阴性-2链球菌能分解葡萄糖产酸乳酸不产气3杆菌肽敏感试验A群链球菌，此试验敏感So操作方法挑取大量被检菌落，密涂于血平板上，以免消失假阳性贴上含

0.04U/片的杆菌肽纸片，35℃孵育过夜观看结果形成抑菌环为敏感A群链球菌的敏感率约占97%CAMP试验B群链球菌，此试验阳性+操作方法在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条直线，再将被检菌距金黄色葡萄球菌3mm处垂直种一条短线同样方法接种阴阳性对比菌35℃孵育过夜观看结果阳性+在被检菌接种线与金黄色葡萄菌接种线之间有一个失形半月形、箭头状的加强溶血区即CAMP试验阳性SXT敏感试验A、B群链球菌耐药R其他群敏感So6七叶昔试验G群链球菌此试验阳性+操作方法接种生化管，35℃孵育18-24h观看结果阳性+棕黑色；阴性-不变色7胆汁七叶昔试验D群链球菌非D群阳球菌此试验阳性+因能在40%胆汁中生长，所以此试验阳性方法，结果同七叶苔试脸8Optocian敏感试验操作方法挑取被检菌落，密涂于平板上，贴Optocian纸片于接种处，35℃烛缸孵育18ho观看结果抑菌环直径214mm为敏感，推断为肺炎链球菌

7.鉴定依据首先确认链球菌后，再作属内鉴定为了鉴定便利，依据溶血性急胆汁七叶苔试验将链球菌初步分群1乙型溶血性链球菌群鉴定本群与临床有关的是A、B、C、D、F、G血清群，其中F、C群主要依据抗血清鉴定鉴定如下，祥见其次版§481页表5-3-51血平板上呈P（透亮）型溶血2A群，杆菌肽试验（S）SXT试验（R）o3B群，CAMP试验（+）SXT试验（R）马尿酸钠水解（+）〈4〉G群，七叶苔试验（+）可与B群相鉴别

（2）甲型链球菌群鉴定鉴定如下，祥见课本§77页表8-61血平板上呈口（草绿色）型溶血2胆汁七叶甘试验阴性（-）3庶糖阳性（+）4万古霉素敏感（S）8鉴别诊断属间鉴别，关键是在形态、染色和触酶试验的区分在临床标本检查的G二触酶阴性的球菌，除链球菌属外，尚有6个菌属与链球菌相鉴别祥见祥（其次版）§480-483页，表5-3-

48、

9、

109.致病物质致病物质主要有链球菌溶血素、致热外毒素、透亮质酸酶、链激酶、链道酶及M蛋白等

（1）溶血素具有溶解红细胞、破坏白细胞和损坏心肌的作用包括有

0、S、D及胞内溶血素四种，其中主要是0及S两种1溶血素0（SL0）耐热，为含-SH基的蛋白质体内可产生抗链球菌溶血素0抗体（简称抗0抗体，AS0）抗“0”试验测定，可作为风湿性关节炎、急性肾小球肾炎的帮助诊断2溶血素S（SLS）血平板所见透亮溶血环是由SLS所引起的

（2）致热外毒素曾称红疹毒素，是由A群链球菌产生的一种外毒素，可引起发热、红疹、全身不适等猩红热消失的皮疹是由该毒素引起的

10.药敏须知除肺炎链球菌外的其他链球菌A、红霉素*、（青霉素皿”、氯芋西林B、氯霉素°、克林霉素°、万古霉素C、（头把毗肪、头匏他咤、头花曲松）、（左氧氟沙星二氧氟沙星”）、奎奴普汀/达福普汀%反抗力本属细菌对外界反抗力不强，一般加热60°C30min即可杀死，在干燥的痰中能存活数周A群链球菌感染者对青霉素G较敏感，被列为首选；B群链球菌经常用青霉素G和一种氨基糖首类合用治疗

12.临床意义对人体致病的90%属A群化脓性链球菌，B、C、D、G群感染较少A群链球菌〈1〉是引起急性化脓性感染的重要致病菌之一，致病力最强可引起丹毒、痈、蜂窝组织炎、淋巴管炎、扁桃体炎、产褥热及败血症等2产生致热外毒素的溶血性链球菌可引起猩红热3可引起变态反应性疾病如风湿热和急性肾小球肾炎，前者表现为关节炎和心脏病B群链球菌又称无乳链球菌，是上呼吸道、和女性泌尿生殖道的正常菌群是新生儿肺炎、脑膜炎、败血症的主要病原菌其他草绿色链球菌是条件致病菌，常与亚急性心内膜炎有关代谢型加石蜡不加石蜡发酵型产酸变黄色产酸变黄色氧化型不变色产酸变黄色诊断药物标准敏感性葡萄球菌属细菌名称新/S多/S人、头、耳、表皮、肌肉、溶血、中间、解、仿照、华纳、施莱福新生霉素50ug/片R16mm新/S多/R金黄色、产色、猪葡萄球菌新/S多/ND金厌氧亚种、头解腺亚种、解糖、海豚、里昂葡萄球菌多粘菌素BR10mm新/R多/S腐生、孔氏、孔氏麻亚种、木糖、柯氏、松鼠、缓慢、鸡葡萄球菌300ug/片新/R多/ND马葡萄球菌、阿来特葡萄球菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌血浆凝固酶甘露醇发酵A蛋白新生霉素+--+-+--SSR。