活毒污水处理装置消毒效果评价方法

活毒污水处理装置消毒效果评价方法A.1范围本附录旨在为活毒污水装置的消毒效果评价提供参考引用文件《消毒技术规范》2002年版RB/T199-2015《实验室设备生物安全性能评价技术规范》第

4.

4.

3.2A项A.2指示微生物通常选用枯草杆菌黑色变种ATCC9372芽抱或嗜热脂肪杆菌ATCC7953芽的作为指示微生物如需杀灭特定微生物时，可选用抗力相似的微生物作为消毒指示微生物A.3试验器材菌悬液按照《消毒技术规范》2002版

2.

1.

1.2制备细菌芽泡悬液及菌片水抽滤系统，无菌器材，营养琼脂培养基、PAS、稀释液、大豆营养肉汤等A.4验证方法A.

4.1连续式污水处理系统的抽滤式消毒验证方法A.

4.

1.1试验菌水样配制:将嗜热脂肪杆菌ATCC7953芽泡悬液混入生物指示物罐或污水收集罐的污水中使其含菌量达到5x104cfu/100ml-5x105cfu/l00ml.待罐内污水经过高温灭菌开始排放后，根据灭菌管道体积及污水流速确定取样时间，从灭菌段后面的取样口取样，每间隔一段时间取样一次，采集次数不少于2次，每次采集水样约200mloA.

4.

1.2试验菌模拟污染水样中活菌的培养计数采用无菌操作，100ml模拟污水样本进行抽滤，滤膜接种于培养皿，56c恒温培养箱内培养48〜72h另取

1.00ml水样接种平皿，然后将平皿倒置，放入56℃恒温培养箱内培养72h观察结果和计数计数滤膜上生长的嗜热脂肪杆菌芽抱数，并按下式计算染菌水样中含有的嗜热脂肪杆菌芽胞数cfu/100ml结果判定嗜热脂肪杆菌芽抱浓度以cfu/100ml计，不得检出试验重复三次A.

4.2连续式污水处理系统的离心式消毒验证方法当污水灌内液体的体枳到达指定量时加入制备的嗜热脂肪杆菌ATCC7953芽泡悬液，使罐体内芽抱浓度达到5xlcfu/100ml〜SxIOcfu/lOOmI以上根据灭菌管道体积及污水流速确定取样时间，确保含有指示芽胞的污水流过灭菌管道后，从灭菌段后面的取样□取样，采集次数不少于2次，每次采集水样约200ml总菌数

21.0x10将收取的样本采用12000rpm离心15min弃去上清液用

0.01MPAS洗脱后加入澳甲酚紫葡萄糖培养基中培养，洗脱液和培养基体积比W1:10阳性对照为培养基内加入浓度为LOxlOcfu/ml的嗜热脂肪杆菌芽抱样本将实验组和阳性对照组于56c培养48-72小时，观察结果，继续培养至7天观察结果结果判定阳性对照培养基变黄色；试验组培养基颜色均未变色，为消毒结果合格试验重复三次A.

4.3序批式污水处理装置消毒效果验证方法菌片放置灭菌前，将3个装有嗜热脂肪杆菌ATCC7953芽泡菌片的采样器从检测预留口放入罐体内，分别置于上、中、下三个采样点待污水灭菌罐液位达到75%后，设备自动启动灭菌程序，运行一个灭菌周期后取出采样器，在生物安全柜内采用无菌操作方式将菌片取出放入澳甲酚紫蛋白陈培养液中同时设阳性对照组和阴性对照组，一起放入56c培养箱培养7d观察培养基颜色变化阳性对照进行活菌计数，菌落数范围为

5.0X10-

5.OX106cfu/Jt结果判定阳性对照培养基变黄色；试验组培养基颜色均未变色，为消毒结果合格试验重复三次A.

4.4化学污水处理装置消毒效果验证方法消毒池内添加适当的消毒剂，达到作用浓度枯草杆菌黑色变种芽泡ATCC9372菌片

5.0X105-

5.0X1Mu〃t作为试验用样片放入专用容器内，分别放置于消毒池内上部、中部、下部三个位点，使菌片充分浸没于消毒液中消毒作用至规定时间后，按无菌操作方式取出枯草杆菌黑色变种芽泡ATCC9372菌片放入含相应中和剂的营养肉汤中同时设阳性对照和阴性对照，放入37℃培养7d同时设阳性对照组和阴性对照组，一起放入37℃培养箱培养7d结果判定样本组肉汤未出现浑浊及菌膜可判定为阴性结果，阳性对照同时进行活菌计数菌落数范围为

5.0XKJ5〜MOxiCfcfu/片试验重复3次A.5验证周期每12个月至少进行一次灭菌效果验证A.6注意事项A.

6.1试验过程中应使用无菌操作A.

6.2不同类型活毒污水消毒处置设备选用不同验证方法。