《分子诊断第4章》课件

《分子诊断第章》4PPT课件这份课件将介绍分子诊断中的各类技术和方法从常用的技术到最新的PCR芯片技术，本课程包含了丰富的知识和实践DNA技术PCR原理1PCR通过不断的循环使目标序列在特定DNA引物的引导下扩增为一大批相同序列的反应条件PCR2片段DNA温度循环，聚合酶，引物，原模板DNA，核苷酸DNA反应步骤3PCR变性，回流，延伸扩增产物分析PCR4包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、SYBR染色、探针等Green TaqMan电泳技术凝胶电泳电泳PAGE将分子通过电泳变成带状的，可通过不同长常用于分离和鉴定蛋白质，在聚丙烯酰胺凝胶中对DNA度的带子来判断不同的分子蛋白分子按照分子量大小进行分离DNA双向电泳组合凝胶电泳和技术，可用于分析复杂的蛋PAGE白质混合物质技术Southern blotting原理步骤Southern blottingSouthern blotting利用限制性内切酶将分子切割成一系列不的电泳分离、转移、固定和检测DNA DNA同大小的片段，然后通过电泳分离不同带的片段DNA分子探针制备分子探针检测获得目标的一部分序列，制作探针，利用的杂交检测到定量在我们DNA RNA DNA DNA DNA通过杂交的方式来检测目标所选择的物种样品中的存在情况DNA技术Northern blotting原理1Northern blotting用的分子量大小来将分子分离，RNA RNA再转移到膜上用分子探针检测步骤Northern blotting2的分离、转移、固定和探针检测RNA探针制备3RNA获得目标的一部分序列，制作mRNA探针，通过杂交的方式来检测目标DNA探针检测RNA4mRNA利用与的杂交检测样品中RNA DNA的存在情况RNA技术Western blotting蛋白质分离方法抗体制备方法利用电泳技术将不同分子量大小的蛋可以通过多种方式制备发生特异性反应的抗体，比SDS-PAGE白质分离开来如免疫动物制备抗体，单克隆抗体等步骤蛋白质检测Western blotting蛋白印迹、转移、固定、探针检测除了标准的西方印迹，也可以应用荧光标记的抗体来检测蛋白质逆转录技术PCR逆转录原理逆转录反应步骤1PCR2PCR用逆转录酶将转化成，并将的逆转录，的扩增，扩增产物分RNADNA DNA RNA cDNA扩增，以分析表达的特定功能基因析RNA特异性引物设计逆转录扩增产物分析34PCR选择合适的引物、检测合成合格的基因，并可以采用凝胶电泳等多种方法进行扩增反应，纯化扩增产物进行测序、鉴定产物可信性实时定量技术PCR实时定量原理1PCR测量实时反应过程中耗用的荧光探针，并根据荧光的强度来计量反应的进程PCR PCR实时定量反应步骤2PCR包括荧光探针制备、反应物的加入和荧光检测荧光探针设计3荧光探针通常由一个荧光信号基团、一个荧光熄灭基团和一个引物分子组成实时定量数据分析4PCR使用专业的软件分析曲线，从而计算检测样品中的和数量PCR DNA RNA芯片技术DNA芯片原理芯片制备DNA DNA将数万甚至上百万个探针固定在芯片上，构建含有各种基因信息的探针芯片，检测DNADNA用于高通量分析、和蛋白质等芯片的精确度和灵敏度DNARNA芯片检测芯片分析方法DNADNA用预先标记的或与芯片上的探可运用统计学方法和计算机算法对芯片数据进行RNAcDNADNA针杂交，通过检测信号来分析样品中基因的表达分析，获得更全面的生物信息学数据情况。