实验10 几种常用培养基的制备及高压蒸气灭菌和干热灭菌

实验十几种常用培养基的制备及高压蒸汽灭菌和干热灭菌杨明轩生物

一、实验目的

1111102040128、学习并掌握常用培养基的制备方法

1、学习并掌握高压蒸气灭菌和干热灭菌的原理及方法2

二、实验原理培养基是一种人工配制的适合微生物生长繁殖并积累代谢产物的混合养料，通常包含碳源、氮源、无机盐、生长因子和水六大类营养成分就其营养物而言，可分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基就用途而言，可分为基础培养基、加富培养基、鉴别培养基以及选择培养基其中，牛肉膏蛋白月东培养基、马铃薯培养基及高氏一号培养基是几种常用的培养基，它们分别用来培养细菌、真菌以及放线菌前两者属于天然培养基，后者是合成培养基牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，可提供碳源、氮源及多种维生素；蛋白豚是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉蛋白酶水解后的中间产物，富含营养；马铃薯浸液同样也是丰富的氮源物质以及多种维生素高压蒸汽灭菌是实验室常用的灭菌方法，适用于培养基、生理盐水、各种缓冲液以及玻璃器皿的灭菌常用高压蒸汽锅进行灭菌，原理是通过提高灭菌锅内的蒸汽温度以达到灭菌的目的当蒸汽压为

1.05kg/cm2时，锅内温度达到在该温度下保持即可杀灭所有微生物及芽胞灭菌所需时间和温度取决于被灭培养基

121.3℃,20-30min中营养物的耐热性、容器体积大小及装物量等因素干热灭菌常用于玻璃器皿的灭菌，常用电热烘箱进行干热灭菌主要是利用高温使微生物细胞内的蛋白凝固变性而达到灭菌的作用细胞内蛋白质凝固性与自身含水率有关，当菌体受热时，环境和细胞含水率越大，蛋白凝固越快常在条件下维持即可进行彻底灭菌160-170℃2h

三、实验材料、试剂牛肉膏、蛋白陈、蔗糖、可溶性淀粉、马铃薯、、、、1NaCI KNO3K2HPO4・3H2MgSO-7H OFeSO424琼脂、无菌水；•7H Olmol/LNaOH lmol/LHCL

2、器皿台式天平、搪瓷锅、烧杯、三角瓶、量筒、漏斗、玻璃棒、22000ml500ml500ml500mL1000ml15X150mm试管、、吸管、滴管；1ml10ml、仪器立式高压蒸汽灭菌锅、手提式高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱；

3、其它试纸、药勺、滤纸、防潮纸、纱布、棉花、线绳4pH

四、实验方法制备牛肉膏蛋白陈培养基1按照下表称量各药品用量筒取蒸馈水与搪瓷锅中，加入各药品至全部溶解，补水定容至1900ml1000ml然后用调到」趁热分装,个三角瓶，每瓶并力口琼脂粉加塞，包扎，Imol/LNaOH pH75500ml300mL

3.4g做好标记，准备灭菌制备马铃薯培养基2按照下表称量各药品将洗净去皮的马铃薯切成的小块置于搪瓷锅中，加入蒸储水煮沸1lcrr900ml15min,然后用层纱布过滤，加入蔗糖至全部溶解，补水定容至然后用调到趁热分装，41000ml lmol/L HCIpH

6.55个三角瓶，每瓶并加琼脂粉加塞，包孔，做好标记，准备灭菌500ml300ml,

3.4g制备高氏号培养基31按照下表称量各药品先用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少量沸水并加热使淀粉充分溶解，加入1900ml蒸储水,加入其他药品至全部溶解，补水定容至然后用调到趁热分装，个1000ml lmol/L NaOHpH

7.35500ml三角瓶，每瓶并加琼脂粉加塞，包扎，做好标记，准备灭菌300ml,

3.4g无菌水的制备4将蒸储水分装于三角瓶中，每瓶内含粒玻璃珠，每瓶义试管中装蒸储水，200ml

20.3090ml5150mm9ml支一捆，包好后准备灭菌7表三种培养基的成分1牛肉膏蛋白陈培养基马铃薯培养基高氏号培养基1牛肉膏去皮马铃薯可溶性淀粉3g200g20g蛋白陈蔗糖10g20g NaCI

0.5g琼脂NaCI5g17g KNOlg3琼脂蒸储水17g1000ml K2HPO4•3H O

0.5g2蒸储水1000ml pH

6.5MgSO•7H O

0.5g42PH

7.0-

7.2FeSO•7H O

0.01g42琼脂17g蒸储水1000mlpH

7.2-

7.4）高压蒸气灭菌（

5、加水向灭菌锅夹层加蒸储水至适当水位刻度；

1、装料放入需灭菌的物品；注意装量适当，使瓶口或试管口向中心摆放，不要紧贴锅内壁，以防冷凝水沾2湿棉塞、加盖盖好灭菌锅，对称拧好螺栓；

3、灭菌通电加热，待灭菌锅排出大股水蒸汽时记时分钟后，关闭排气阀继续加热至所需条件，如压力415达即维持分钟；

1.05kg/cm

2121.3C,20・

30、降压灭菌后立即关闭电源，待压力降至时，打开排气阀，放空剩余蒸汽再打开锅盖，取出灭菌物品；

50、后处理灭菌完毕，放空夹层内的水，保持锅内干净6）干热灭菌（

6、装料打开烘箱门，放入需灭菌的物品，关好烘箱门；（注意勿使纸包物品紧靠烘箱壁，以免引起火灾！）；

1、灭菌打开排气孔，接通电源，加热升温至关闭排气孔，维持小时；（注意灭菌温度绝对不可以2160°C,2超过）180℃、降温灭菌后，立即关闭电源，将温度旋钮转至待温度降至以下时，打开烘箱门，取出灭菌物品3020℃

六、思考题、制好培养基后为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？1答新配制的培养基中营养物质丰富，适合微生物的生长配制培养基时可能会带入杂菌，如果灭菌不及时，会导致培养基被杂菌消耗；同时杂菌的生长也会干扰正常应接种微生物的生长导致培养基无法使用检测灭菌培养基是否无菌，可以将培养基在适宜条件下放置，如果没有杂菌生长则证明该培养基无菌，否则说明培养基灭菌不够彻底、为什么干热灭菌比高压蒸汽灭菌所需的时间长、温度高？2答高温灭菌的原理是通过高温使微生物中的蛋白质等大分子变性一方面，高压蒸汽灭菌以高压高温的水蒸气为导热介质，而干热灭菌以高温空气为导热介质显然由于水的热容大于空气，水蒸气对热的传导能力强于空气，更易导热另一方面，菌体受热时，环境和细胞内含水量越大，蛋白质凝固越快在高压蒸汽灭菌的体系中，水分含量明显更高所以，只考虑灭菌能力，高压蒸汽灭菌更强因此，要达到同样的灭菌效果，干热灭菌比高压蒸汽灭菌所需的时间长、温度高。