洁净室无菌室的使用和管理方案

洁净室（无菌室）的使用和管理方案洁净室（无菌室）是微生物检测的重要场所与最基本的设施它是微生物检测质量保证的重要物质基础因此它的设计要按国家标准《洁净厂房设计规范》、国家药品监督管理局颁发的《药品检验所实验室质量管理规范（试行）》中第十八条规定执行微生物实验室洁净室的施工、安装、一验收应按国家行业标准《洁净室的施工及验收规范》执行对于微生物检测工作者和使用管理者来讲，更大量的工作是进行正常管理到日常的使用洁净室（无菌室）的标准要符合GMP洁净度标准要求洁净室（无菌室）的使用管理要做到以下工作—、洁净室（无菌室）要符合规范要求根据空气洁净度的不同，无菌室可分为哪几个级别一般情况下，无菌室的等级有百级，千级，万级，十万级，百万级等等净化等级一般分为100级、1000级、10000级、100000级，现在2010年版的GMP净化车间已经不用这个叫法了，分为ABCD级别，分别相对应于98版的几个级别，通过检测区域内的尘埃粒子数、浮游菌数、沉降均数评价净化级别，各个级别有不同的要求，净化等级分静态、动态两种无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区面积一■般不超过10m2＞不小于5m2；度不超过

2.4m由1—2个缓冲间、操作IWJ间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间和缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角操作间内不应安装下水道无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18—26℃,相对湿度45%—65%o缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa,洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa0无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀,光照度不低于3001X缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（2—

2.5w/m3）,应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40uw/m2不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换二建立使用登记制度在登记册中可设置以下项目内容如使用日期、时间、使用人、设备运行状况、温度、湿度、洁净度状态（沉降菌数、浮游菌数、尘埃粒子数）、报修原因、报修结果、清洁工作（台面、地面、墙面、天花板、传递窗、门把手）、消毒液名称等

三、建立使用标准操作规范（）并严格管理SOPSOP内容至少要有以下几点（）规定净化系统使运转时间1要求每次实验前应开启净化系统使运转至少lh以上，同时开启净化台和紫外灯（）物品进入洁净室（无菌室）基本要求2凡进入洁净室（无菌室）的物品必须先在第一缓冲间内对外部表面用消毒剂消毒灭菌，再经物流缓冲间、传递窗lh以上，及无菌空气吹干后送入无菌室注意带纤维、易发尘物品不得带进净化实验室无菌室内固定物品不得任意搬出（）人员进入洁净室（无菌室）要求3实验人员进入洁净室无菌室不得化妆、带手表、戒指等首饰；不得吃东西、嚼口香糖应清洁手后进入第一缓冲间更衣，同时换上消毒隔离拖鞋，脱去外衣，用消毒液消毒双手后戴上无菌手套，换上无菌连衣帽不得让头发、衣等暴露在外面，戴上无菌口罩然后，换或是再戴上第二副无菌手套，在进入第二缓冲间时换第二双消毒隔离拖鞋再经风淋室30s风淋后进入无菌室温湿度观察要求4观察温度计、湿度计上显示的温湿度是否在规定的范围内，并作为实验原始数据记录在案如发现问题应及时寻找原因，及时报修和及时报告实验室主管，并将报修原因和结果记录归档沉降菌落计数与浮游菌测定要求5在每次实验同时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上每周1次，或在无菌检查等必要时，在每次实验同时对操作室和净化台进行浮游菌测定，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上消毒要求6无菌室每周和每次操作前用

0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液（常用消毒齐IJ的品种有5—20倍稀释的碘伏水溶液、

0.1%新洁尔灭溶液、150的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（来苏儿）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（处方对羟基苯甲酸甲酯

21.5g；对羟基苯甲酸丙酯8,6g,75%乙醇10ml）等，所用的消毒剂品种与使用要进行有效性验证方可使用，并定期更换消毒剂的品种）擦拭操作台及可能污染的死角，方法是用无菌纱布浸渍消毒溶液清洁超净台的整个内表面、顶面、及无菌室、人流、物流、缓冲间的地板、传递窗、门把手清洁消毒程序应从内向外，从高洁净区到低洁净区逐步向外退出洁净区域然后开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌l-2h,以杀灭存留微生物在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌30min（）其他要求7如遇停电，应立即停止实验，离开无菌室关闭所有电闸重新进入无菌室前至少开启机房运转lh以上

四、洁净度检查的要求与方法无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数，以此来判断无菌室是否达到规定的洁净度，常有沉降菌和浮游菌测定方法沉降菌检测方法及标准1以无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区台面左、中、右各放1个；打开平板盖，在空气中暴露30min后将平板盖好，置

32.5℃土

2.5°培养48h，取出检查，3个平板上生长的菌落数平均小于1个浮游菌检测方法及标准2用专门的采样器，宜采用撞击法机制的采样器，一般采用狭缝式或离心式采样器，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定时校检，采样器和培养皿进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其他培养基使用时，先开动真空泵抽气，时间不少于5min，调节流量、转盘、转速关闭真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度置采样口采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间全部采样结束后，将培养皿置

32.5℃土

2.5培养48h,取出检查，浮游菌落数平均不得超过5个/nP每批培养基应选定3只培养皿做对照培养无菌操作台面或超净工作台还应定期检测其悬浮粒子，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测，并根据无菌状况必要时置换过滤器

五、定期进行洁净度再验证定期（每季度、半年、一年）或当洁净室设施发生重大改变时，要按国家标准GB/T16292-16294-2010《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》进行洁净度再验证，以确保洁净度符合规定，保存验证原始记录，定期归档保存，并将验证结果记录在无菌室使用登记册上，作为实验环境原始依据及趋势分析资料并定期对洁净室的环境检测数据进行趋势分析和评估，根据评估结果，了解洁净室设施环境质量的稳定状况及变化趋势，决定是否有必要修订相应的警戒和纠偏限度六定期更换新的紫外灯管更换净化系统的初效中效高效头定期（至少每年1次）更换新的紫外灯管，以确保紫外灯管灭菌持续有效并同时在使用登记本上做好更换记录，定期。