细菌革兰氏染色考核评分标准

富顺县人民医院细菌革兰氏染色考核评分标准科室姓名得分:项目考核内容及分值扣分要点得分目的了解细菌形态特征，检验革兰氏染色的准确性2分不清楚扣2分待检细菌菌液、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌标准菌株菌液、灭菌玻片、接实验准准备不充分酌种环、移液器、酒精灯、计时器、显微镜、香柏油、革兰氏染色液等5分备情扣1-2分

1、涂片取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液器吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用移液器分别吸取10ul金黄色葡萄球菌菌液和大肠埃希菌涂布均匀5菌液位于待检品的两侧（浓度适宜，中间要有足够的空间），作为阴阳性分，每次涂布对照用无菌接种环将液滴涂布成均匀的薄层，涂布面不宜过大，每次充后烧灼5分分烧灼后接种另一种细菌，防污染10分

2、干燥将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯火焰高处干燥合理，防微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯烤枯5分而变形5分

3、固定固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及固定合理5分皮肤，不觉得烫为宜（不超过60℃）,放置待冷后，进行染色5分

4、分类初染在涂片薄膜上滴加革兰氏结晶紫试剂1-2滴，使染色液覆盖操作步染液、时间适涂片，染色约lmin斜置载玻片，用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色骤宜，冲洗得当为止（10分，未执行此步骤直接为操作不合格）

5、媒染取「2滴革兰氏碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约染液、时间适Imino斜置载玻片，用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止（10分，未宜，冲洗得当执行此步骤直接为操作不合格）

6、脱色斜置载玻片，滴加革兰氏脱色剂脱色，至流出的脱色剂不现紫色为脱色得当止，大约需时20-30S,随即水洗（10分，未执行此步骤为操作不合格）

7、复染在涂片薄膜上滴加革兰氏番红精复染剂「2滴，使染色液覆盖涂片，染液、时间适染色约lmin斜置载玻片，用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止（10宜，冲洗得当分，未执行此步骤直接为操作不合格）

8、干燥用吸水纸吸掉水滴，待标本干后置显微镜下观察用低倍镜观察，干燥得当，用发现目标物滴一滴香柏油在玻片上，用油镜观察细菌的形态及颜色10分油镜观察显微镜观察由金黄色葡萄球菌制成的标本显示葡萄球状蓝紫色，大肠埃希菌对照染成相应制成的标本显示杆状红色，则实验过程有效（5分）此时，如果样品在显结果判颜色，样本染微镜下呈蓝紫色，则判定样品菌株为革兰氏阳性菌；如果样品在显微镜下定色正确呈红色，则判定样品菌株为革兰氏阴性菌（样本判定止确10分）实验结关闭和清洁显微镜（4分）实验中用到的玻片使用后灭菌，按锐器废弃物处处理适当束理程序处理（4分）总分100考核者考核日期年月。