细胞质RNA提取实验

细胞质提取实验RNA材料与仪器RNA细胞裂解液蛋白酶酚氯仿异戊醇无水乙醇PBS SDSK离心机培养箱步骤对于单层培养细胞

1.每培养皿培养的细胞，用冰冷洗涤次110cm PBS3每次然后用小体积刮下细胞，转移至冰浴的离心管中21ml PBS离心弃上清,继续冰浴3300g5min,对于悬浮培养细胞

2.离心弃上请1300g5min,细胞以原体积的冰冷重悬，再离心后弃上清21/2重悬细胞于冰冷的细胞裂解缓冲液，并置冰浴

3.37535min于在微量离心机中离心将上清移至一个洁净的已加有的

4.4℃2min,51120%SDS管中，立即在旋涡混合器上振荡力口入蛋白酶温育

5.

2.5m20mg/ml K,37℃15min加入酚/氯仿/异戊醇抽提，在旋涡混合器上振荡用微量离心机离心，上清

6.400M移至干净的离心管中，重复抽提遍1再以氯仿/异戊醇抽梗，上层水相转移至干净的离心管中

7.400m力口入乙酸钠缓冲液再加无水乙醇，混匀后在干冰/乙醇中

8.401113mo1/1pH

7.5,沉淀或过夜15〜30min-20℃用微量离心机离心加入乙醇乙酸钠冼

9.4℃15min1ml75%/25%

0.1mol/1pH

5.2涤沉淀干燥后用处理过的水重溶沉淀，取稀释于水中，测

10.100Pd IOIRNA1ml A280R和其与的可在贮存A260,RNA-70C。