细胞复习

、细胞表现全能性需要的条件是什么

12、各种材料的灭菌方法温度、PH值、营养成分、溶氧及气体环境、渗透压等其它因素1洗浸泡、刷洗、泡酸、冲洗2消毒灭菌物理消毒化学消毒细胞培养中常用的消毒剂、浓度及使用场合消毒剂浓度使用场合碘酒动物皮肤、鸡胚、手、器材等2%酒精动物皮肤、鸡胚、手、器材等，碘酒用后酒精去除70%〜75%甲醛无菌室空气36%〜40%戊二盛

0.1%〜

0.2%灭活病毒和固定用氢氧化钠灭活病毒，如测定板、滤材等1%〜3%盐酸1%〜2%灭活病毒，如血凝板等乳酸

0.04mg/L空气消毒过氧乙酸

0.2%〜1%表面消毒，空气消毒1~3g/m3,60min~90min新洁而灭浸泡病毒污染的吸管

0.1%〜

0.5%次氯酸钙

0.3%〜

0.6%处理污染物品，防止细菌污染氯胺丁1%〜10%处理污染物品，防止细菌污染来沙儿表面消毒1%〜5%、植物组培培养基配制方法计算3

①无机营养成分氮、磷、硫、钙、钾、镁、铁、镒、铜、锌、硼、铝等元素；

②有机营养成分:碳源,最常用的一般是蔗糖，浓度一般为2%~5%;含氮物质；

③植物激素类生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类、琼脂、PH值一般都调到

5.0~

6.0o施制液加水直到培养基最终容枳的,在恒温水浴中加热使之溶广需黑普黑鹭？热,因为蔗糖甚至在H3/4微湿的水中也能溶解；由右要在高氏灭韶十篮番液包括生长两节物质和其他的特殊补加物如果由于特殊原］:「后再加入维生素和生长索,那么在调节了之后,可使这些物质的濯旗通过径为・的微孔谑器消毒；pH022~

0.45Mtn）加蒸情水直至培养基的最终容积；34）充分混合之后,用和调节培养基的1mol/L NaOH

0.1mol/L HCIpH1）把培养基分装到所选用的培养容器中，每个的试管各装培养基每个525mmX150mm15mL150ml的三角瓶各装；50ml如果在步骤2）〜5）期间培养基开始凝固，应将装培养基的三角瓶置于65C热水浴加热.只有当培养基为均匀的液态时才能分装,）用包在纱布中的棉塞（能阻止微生物污染，但可使气体自由交换）,或其他适宜的寝或盖封产瓶6口s）把已装入了培养基的培养容器装在铁丝篮子里.外面包上一层铝箔以防止福塞在高乐灭菌时吸湿,7在（）下灭菌

101.3kPa12L3C15mini如果所用的是已经灭过菌的不耐高温的塑料培养容器,培养基可装在或三角瓶中（有的250500ml实验室也使用三角瓶•只是大三角柜在分装时不太方便）,以铝箱或牛皮纸住瓶口,进行高压1000ml H灭菌.灭第后使培养基冷却到大约然后在无菌条件下将其分装到朋目容器中.60C,）使培养基在室温下冷却,置冰箱中保存•当用试管制备琼脂固化培养基时•雄好把制养基做成斜84t面.斜面培养基可为组织的生长提供一个较大的表面积，同时,拍照长在斜面上的堵整物出注助分R、生长素和细胞分裂素在组培上的应用4在组织培养中，生长素被用于诱导细胞的分裂和根的分化，细胞分裂素主要是为促进细胞分裂和由愈伤组织或器官上分化不定芽、植物组培的步骤5外植体的选择-外植体灭菌-切取-接种-诱导培养-继代培养-生根培养-炼苗-移栽-定植、植物组培的培养条件6

①环境条件

（1）温度

（2）光照

（3）湿度

（4）渗透压

（5）pH值

（6）通气条件

②营养条件一一培养基

（1）无机营养物大量元素和微量元素

（2）有机营养碳源，氮源

（3）活性物质维生素类、肌醇等

（4）生长物质生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类、琼脂、活性炭等、植物组培在生产上的应用7

（1）无病毒植株

（2）植物的离体无性快速繁殖

（3）人工种子

（4）植物种质保存

（5）植物胚胎培养

（6）花药及花粉培养等、茎尖脱毒的原理8病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点约（

0.1-lmm区域），病毒浓度越稀，因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒、热处理脱毒的原理9病毒进入植物细胞后，随植物细胞的DNA一起复制热处理不能杀死病毒只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去浸染能力热处理是一种物理效应，可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜、植物单细胞获得的方法有哪些8

（1）完整的植物器官分离单细胞机械法、酶解法

（2）养组织中分离单细胞愈伤组织、植物单细胞培养的方法有哪些9

（1）培养

（2）培养

（3）培养

（4）滤纸培养、悬浮培养的优点有哪些10

（1）培养细胞与培养液的接触面，改善营养供应；

（2）荡条件下可避免细胞代谢产生的有害物质在局部积累而对细胞自身产生毒害；

（3）培养可以适当改善气体的交换、获得原生质体常用到的酶有哪些11纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、聚乙二醇介导细胞融合的原理是什么12PEG具有轻微的负电极性，可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在在原生质体之间形成分子桥用高Ca2+和pH溶液洗脱质膜基上的PEG,导致电荷失去平衡并重新分配，使两种原生质体上的正负电荷连接，细胞聚集和粘连另外，PEG能增加类脂膜的流动性，即脂类分子发生疏散和重组，两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合、贴壁细胞体外生长形态有哪些13上皮细胞型、成纤维细胞型、游走细胞型、多形细胞形、动物细胞有哪些培养方法141胞种类原代细胞培养，传代细胞培养2培养方式贴壁细胞培养，半悬浮细胞培养，悬浮细胞培养、血清在动物细胞培养中的作用有哪些15⑴提供生长因子和激素⑵提供贴附因子和伸展因子⑶提供结合蛋白⑷提供必需脂肪酸和微量元素、动物细胞原代培养的步骤16剪切组织一消化分离一培养、传代培养的步骤171吸出培养瓶内旧培养液2加入

0.25%含

0.02%EDTA胰蛋白酶和EDTA混合液盖满瓶底32〜5分钟后检查，如有细胞间隙变大，细胞质回缩现象，终止消化4吸出消化液，加入Hanks液，轻轻转动以免细胞流失，洗去残留的消化液如果单用胰蛋白酶，可直接加入培养液5用吸管轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落制成悬液，计数后记录其浓度6补加营养液后，12分装培养重新接种培养、单克隆抗体的制备程序是什么18

①对小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠产生免疫反应；

②得到相应的B淋巴细胞；

③将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，再用特定的选择培养基进行筛选；

④在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖又能产生专一的抗体

⑤对上述杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足量的能分泌所需抗体的细胞；

⑥最后，将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，这样，从细胞培养液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体了、选择培养的原理19HAT⑴氨甲蝶吟A是叶酸拮抗剂，可阻断细胞利用正常途径合成DNA,细胞在含有氨甲蝶吟的培养基中不能通过正常途径合成DNA⑵瘤细胞是HGPRT酶阴性细胞，自身O不能通过替代途径合成DNA而繁殖⑶B细胞虽含有HGPRT,但不能在体外培养存活只存活5〜7d,且功能下降

（4）融合细胞含有B细胞和瘤细胞，其中瘤细胞核利用B细胞的HGPRT酶进行旁路合成DNA而存活、有限稀释法的步骤201）取出阳性孔内的细胞进行计数2）用培液将其稀释到例如每毫升内10个细胞3）如果在96孔板内每孔加

0.1ml,其机率将为每孔内落入一个细胞4）加入一定数量的饲养细胞,经过8-12天后，可观察到有集落生长的孔5）根据检测的阳性结果再次进行克隆化、克隆动物的程序中，进行核移植的合适供体和受体细胞有哪些21常以去核的卵母细胞为受体细胞，供体细胞主要有两大类胚胎卵裂球和体细胞核移植（克隆）的技术路线目的基因转基因动物、运用细胞核移植技术进行转基因动物的技术路线是什么22导入动物胎儿成纤维细眈妊娠取核动物去核重组的体外培养囊胚期胚胎移植卵细胞一受精卵,胚胎*受体动物。