脑胶质瘤组织中细胞周期蛋白d

脑胶质瘤组织中细胞周期蛋白d根据细胞药理学的研究，肿瘤的本质是细胞周期的调节紊乱，细胞表现出失控的生长和死亡1数据和方法

1.1神经系统肿瘤过级选取2003年9月一2008年2月广西壮族自治区人民医院手术切除的脑胶质瘤组织标本59例其中男31例，女28例，年龄473岁，平均平

6.2±126岁根据2000年WHO神经系统〜肿瘤分类标准I级10例，II级15例,III级15例，W级19例另外选取同时在该院接受因颅脑损伤行内减压术患者的正常脑组织37例为对照,全部标本均经10%甲醛固定,普通石蜡包埋,4um连续切片

1.2试剂和试剂盒鼠抗人Cyclin DlCyclin A、Cyclin Bl单克隆抗体购自BD Pharmingen公司，兔抗人PIIH3多克隆抗体购自Upstate GroupLLC公司，S-P试剂盒和SAP-9100试剂盒购自北京中杉生物技术开发公司，DAB试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司

1.3过氧化物酶活性免疫组化染色采用S-P法石蜡切片脱蜡水化后，微波抗原修复,过氧化酶阻断剂灭活内源性过氧化物酶活性,羊血清工作液封闭,滴加一抗4℃过夜,滴加生物素标记的二抗,滴加链亲和素一过氧化物酶溶液PHH3标记用坚固红显色,其余标记均用DAB显色,苏木精复染用已知阳性组织切片为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照

1.5统计方法采用SPSS

13.0软件进行分析,所有数据采用均数土标准差2cycling phh3表达变化37例正常脑组织均无Cyclin DI、Cyclin A、Cyclin Bl和PHH3的表达在59例人脑胶质瘤标本中,Cyclin D1阳性表达41例

69.5%,阳性染色信号出现于胞核，见图1Cyclin A阳性表达41例

69.5%,阳性染色信号出现于胞核，见图2Cyclin Bl阳性表达37例

62.7%,阳性染色信号出现于胞核,见图3o PHH3阳性表达50例

84.7%,阳性染色信号出现于胞核，见图44级脑胶质瘤的Cyclin DKCyclin A、Cyclin Bl和PHH3的阳性LI比较差异均有统计学意义P〈

0.01,见表lo3铜绿假单胞菌cyclind与k-rab蛋白表达的关系肿瘤的发生及发展是复杂而漫长的过程,有多种可能的机制，如癌基因的过度扩增,抑癌基因的缺失,生长因子信号传导通路的持续激活等目前认为,这些机制可直接或间接影响细胞周期调控因子的功能，促进细胞周期持续演进,细胞进入自主无限制的增殖和分裂,表现出旺盛的增殖活性而发生恶性转化从一定程度上讲,细胞周期是所有这些机制的“最后公路”Cyclin D1是G1期细胞周期素，与细胞同期依赖激酶CDK4或CDK6在G1期结合形成复合物,通过激活CDK4或CDK6,使后者催化一系列关键底物如Rb蛋白磷酸化导致转录因子释放，促进DNA合成而发挥加速细胞增殖的正性调节作用正常情况下,Cyclin D1蛋白只是在G1期呈一过性表达,任何原因引起Cyclin D1持续高表达都将使细胞增殖失控,最终形成肿瘤许多人类肿瘤组织中均发现染色体llql3区域的Cyclin D1基因扩增和Cyclin D1蛋白的过度表达,在肿瘤的进展和转移中起重要作用Cyclin A基因定位在染色体4q27上，它必须与CDK结合才能显示酶的活性Cyclin A是细胞周期进入S期所必须的调节蛋白在G2期主要是Cyclin Bl的表达增加,有丝分裂结束时降低真核细胞染色质的基本结构单位为核小体,组蛋白H3是核小体的组成成分之一在分裂间期,组蛋白113的丝氨酸残基的磷酸化是微不足道的,而在分裂期,磷酸化则达到了最高峰PHII3是一种抗磷酸化的组蛋白H3的抗体,组蛋白H3的磷酸化与有丝分裂染色体的浓缩相关,并且在细胞的凋亡过程中没有组蛋白H3的磷酸化本研究结果显示PHH3在正常脑组织中不表达,在各病理等级的脑胶质瘤组织中均存在PHH3的表达,并且其表达水平随着肿瘤恶性程度增高而呈升高趋势因此,PHH3可以作为核分裂的特殊标记以快速、有效、客观地进行细胞增殖的定量分析综上,Cyclin DKCyclin A、Cyclin Bl和PHH3在细胞周期调控过程中起关键作用，检测脑胶质瘤组织中的Cyclin DI、Cyclin A、Cyclin Bl和PHH3蛋白的表达水平，可辅助常规病理诊断并为判断预后提供信息

1.4细胞phh3染色Cyclin DKCyclin A、Cyclin Bl蛋白染色均以PHH3细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞,PHH3染色以细胞核出现红色颗粒为阳性细胞计算Cyclin DKCyclin A、Cyclin Bl及PHII3的标记指数LI:选取10个阳性细胞最密集、背景最清晰区域,每个区域高倍视野X400下计算100个细胞中的阳性细胞数，计算1000个肿瘤细胞中阳性细胞所占的百分比，取其平均值即为LI。