蝴蝶兰的组织培养

蝴蝶兰的组织培养蝴蝶兰［］为兰科蝴蝶兰属植物，它是一种热带气生兰，俗称“洋兰乙蝴蝶phalaenopsis兰花型似蝴蝶，形态美妙、色彩丰富、花期长，在热带兰中素有“兰花皇后”之美称，蝴蝶兰种类丰富，分布广，东起菲律宾、新几内亚，南达澳大利亚北部，西苏门答腊,北到我国台湾、云南、四川西部均有原种野生的蝴蝶兰存在，约有多种，其中我国有种，全部为附生507兰蝴蝶兰商品化大规模栽培十分成功，是近年来在国际花卉市场上最受欢迎的洋兰从离体器官诱导产生类原球茎，通过类原球茎的增殖培养，得到大量幼苗，为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础类原球茎是一类呈珠粒状的幼嫩器官种子萌发时先是胚的膨大，种皮破裂，一定时间后发育成肉眼可见浅黄色的原胚呈球状，称为原球茎，由其它外植体诱导产生的称类原球茎，在兰科植物中多以这种器官发育、增殖和分化蝴蝶兰的组培快繁有胚培养、叶片培养和腋芽培养，腋芽培养形成试管苗，再以丛生芽的方式增殖快繁，可以有效地保持母本的优良性状，变异率最低材料与方法1材料取已过盛花期带休眠芽的花梗作为外植体材料1材料消毒与接种切下其带芽茎段，长约・，用自来水清洗干净，在饱和漂白粉上清223cm液中浸泡，浸泡时不断搅动，浸泡后的茎段用流水冲洗干净，置于超净工作台上，先用15min%的酒精消毒无菌水清洗次，再用%的升汞浸泡，经无菌水冲洗数次，7530s,

10.110min将带芽茎段接种到经设计的不同激素组合的诱导培养基上，重复3o培养基的配制3花梗腋芽诱导培养基为1/2MS+BA

2.5mg/L+NAA

0.2mg/L增殖培养基为椰乳%1/2MS♦BA

3.5mg/L+KT

1.0mg/L+NAAO.5mg/L+10生根培养基为香蕉泥1/2MS+BA

1.5mg/L+NAA

0.3mg/L+80g/L以上培养基均为p H

5.5结果2在培养条件每天光照，光强，温度℃获得以下效果12h1600Lx25±2诱导培养效果蝴蝶兰花梗接种到不同激素浓度的培养基上，生长周后在花梗的基部11有褐色物质产生，腋芽开始萌动月后腋芽可以长到高，出芽率可达

1.5cm50%增殖培养效果将长出的芽选取约的苗，取出后切去叶片和基部褐化部分，转接

21.5cm到增殖培养基中，后，增殖倍数可达到倍以上40d3生根培养效果将高约的蝴蝶兰试管苗接种到生根培养基中，后，全部生

32.0cm50d根，平均生根条，长

3.

52.5cm壮苗培养与驯化移栽壮苗生根组培苗壮苗培养基蔗糖琼脂粉41/2MS,10g/L+

3.5g/L+活性炭・温度光照强度光照时间培养后移栽

1.5g/L,pH54,25±2C,2000LX,14h/d15cl驯化室内开瓶炼苗室外炼苗移栽基质最适合的栽培基质为水苔，椰糠也是良好的移栽基质3d+3d讨论3（）蝴蝶兰和其他兰科植物一样，在组培快繁生产中存在着易褐化死亡的问题，因此如何克1服褐变成了组培快繁生产成功与否的关键，活性炭,或效果显著；适时切除培2g/L PVP1g/L养物的褐化部分并及时更换新鲜培养基，能有效抑制外植体褐变死亡；培养基中加入椰子10%水，也能促进原球茎的生长，减少原球茎增殖过程中的褐变；蝴蝶兰的群体效应很明显，单芽容易褐化死亡，且增殖较慢，因此，刚诱导出的原球茎状体不能过早切割转移，在继代阶段接种时，应尽量避免切成单芽，增殖时切块也不宜过小，否则容易褐化死亡；添加香蕉汁对蝴蝶兰原球茎形成及幼苗生长具有明显的促进作用（）另有报道

①蝴蝶兰原球茎的诱导主要受外植体、培养基和培养条件等因素的共同影响，2其中，外植体最难以控制，这与外植体本身的生长发育和生理生化状态有关因此，对外植体的筛选是组培中较关键的技术蝴蝶兰组织培养过程中，采用同样培养基处理时，茎尖比叶片、花梗侧芽作为外植体效果较好

②）在激素浓度相同条件下，、、作为1/2MS MSWhite.B5基本培养基均能诱导出原球茎，但效果最好，且诱导的原球茎数量多，密度大

③以MS MS作为基本培养基对蝴蝶兰原球茎进行增殖培养，附加和时，NAA

1.00mg/L6-BA

2.00mg/L增殖效果最好

④蝴蝶兰生根过程中，在培养基上根生长最快，生根率可达1/2MS

94.42%,根长可达长势最粗壮，数量最多，说明低浓度的盐分有利于侧根发生

⑤基本培养

0.86cm,基中添加蔗糖浓度为3%,琼脂为

6.00g/L,活性炭为

1.00g/L;pH值为

5.60〜

5.8；培养温度为（）℃;光照时间为光照强度为25±113h/d;1500~2000lx（）组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，主要通过两条途径一是利用种子无菌发芽，3二是从离体器官诱导产生原球茎，通过原球茎的增殖培养，得到大量幼苗早在年，1949Potor利用无菌培养技术成功地促使蝴蝶兰花梗上的休眠芽发育成完整植株，该方法经过其他研究人员改进后，曾一度成为蝴蝶兰的主要无性繁殖方式年，等利用蝴蝶兰茎尖诱1974Intuwong导产生了原球茎状体，再由原球茎分化成植株，为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础蝴蝶兰的组织培养中有几个关键的时期原球茎的诱导、原球茎的继代增殖、壮苗的培育蝴蝶兰组培的快繁技术，包括外植体的选择、不同基本培养基、激素、添加物对其增殖与分化的影响、外植体褐变的防治以及生根壮苗的方法等外植体的选择诱导蝴蝶兰原球茎采用的外植体主要有根段、花梗苗根尖、花梗腋芽、茎尖、叶片、胚、花摹节间（花摹地上无茎植物从地表，通常自基生莲座抽出的无叶花序梗）、花梗节或花梗节间切段、种子等蝴蝶兰不同外植体的成活率有差异，其中花梗侧芽的成活率最高，其次为花梗，叶片和根尖最差针对不同外植体，取材方法也不同，通常取花梗节之间1〜2cm长的幼嫩部分，切取长2〜3mm的切段作为外植体如利用2〜3cm长的根尖段，将其切成

0.5〜

0.8cm,接种2周后根端切口处开始膨大，产生淡绿色瘤状愈伤组织；采用无菌种子苗茎尖作为外植体时，培养后基部出现愈伤组织，出愈率达以上；而利用正在培30cl85%养的花梗苗生长旺盛的根尖进行培养，左右外植体膨大且表面颜色明显加深；用花梗腋芽20d为起始材料诱导花孽，由花草节间切片可以高频率诱导分化不定芽基本培养基的选择蝴蝶兰组织培养所采用的基本培养基包括、、、MS1/2MS.VW B

5、花宝及其改良型等但由于蝴蝶兰品种差异及外植体来源不同对最适培养基的选择是不同KC的以红花品种为试材，以改良的效果最好，次之，最差；蝴蝶兰的原球茎增KC1/2MS MS殖培养以较低的无机盐浓度为好，大量元素对原球茎增殖有很大影响，对原球茎增殖最1/2MS有利在花梗节间切段诱导原球茎的实验过程中对培养基进行筛选，也发现或改良1/2MS MS较效果好，减少中大量元素和部分微量元素及有机成分，适当增加少量的叶酸和生物MS MS素有利于原球茎的增殖生长；但培养基最适合蝴蝶兰种子的萌发也有报道培养基更有MS B5利于蝴蝶兰根段原球茎的诱导和增殖植物生长调节剂对蝴蝶兰原球茎增殖与分化的影响蝴蝶兰组织培养中常用的细胞分裂素为6・BA,较高浓度（1〜8mg/L）的6・BA能促进蝴蝶兰原球茎增殖，较低浓度（0/〜

0.5mg/L）的则能促进原球茎分化有研究表明，低浓度・有利于原球茎的增殖，而高浓度（）6BA6mg/L的刺激多酚氧化酶作用，使原球茎容易产生褐化低浓度的对原球茎增殖和出苗6-BA NAA均有促进作用，高浓度的则不利研究表明，适宜浓度的・配合较低浓度的更有利6BA NAA,于原球茎的增殖，和配合使用是蝴蝶兰原球茎增殖的最佳组合

2.0mg/L6-BA

0.3mg/L NAA高浓度的对蝴蝶兰原球茎增殖有一定的抑制作用，浓度从增加到NAA NAA1mg/L3mg/L,增殖率相应从下降到；采用・配方，能够有效

98.3%

38.3%

3.0mg/L6BA♦

0.2mg/L NAA的诱导原球茎，同时还发现提高激素配比（活性碳）

5.0mg/L6-BA+

0.2mg/LNAA+

1.0g/L,则有利于原球茎的增殖，提高增殖系数，且不用转接就可直接生根成苗，避免转接过程带来的污染损失，简化了培养过程，因而是一种值得推广的方法；此外，在培养基中加入

1.0mg/L GA3对原球茎分化成芽有一定的抑制效果，为获得大量原球茎而避免分化成芽，适当添加是GA3有一定作用的添加物对蝴蝶兰原球茎增殖和分化的影响一些氨基酸类添加物，也可以作为培养基中的有机氮源，例如甘氨酸能促进离体根的生长丝氨酸和谷氨酰胺有利于花药、胚状体或不定芽的分化水解酪蛋白和水解乳蛋白对胚状体或不定芽或多胚的分化有良好的促进作用而在培养基中加入一些天然有机物，如椰乳、香蕉泥、番茄汁等，也能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等，如力口入100〜200mg/L香蕉泥，具有较大的pH缓冲作用，对幼苗发育有促进作用水解酪蛋白对蝴蝶兰原球茎增殖有明显促进作用，而水解酪蛋白和香蕉匀浆相结合却对原球茎增殖有抑制作用，有机添加物之间的相互作用或有机添加物与培养基之间的相互作用可能对原球茎增殖有影响许多研究也表明，添加适量的香蕉泥、椰乳或含胶质的果菜汁等均对原球茎增殖有明显促进效果培养基中添加活性炭，低浓度（

0.5〜

1.0g/L时对原球茎增殖影响不明显，高浓度

2.0〜

3.0g/L时对原球茎增殖有促进作用，但原球茎有黄化现象蔗糖作为培养基的能源物质和渗透调节剂，对原球茎的增殖生长影响较大，2%的蔗糖浓度有利于原球茎生长，2%〜3%蔗糖促进芽的形成，5%的蔗糖有利于根的分化和生长生根壮苗壮苗培养是提高移栽成活率的一项重要措施，生根效果也直接影响到生产效益此阶段的关键在于严格筛选激素的种类和浓度，一般需降低培养基的激素含量，以便形成健壮苗常用的生长素有IBA

0.3〜

1.5mg/L,NAA

0.1-

0.8mg/L GA

30.1mg/L+NAAo的组合能明显提高生根率，且植株健壮，长势好无机营养是影响蝴蝶兰丛生芽生

0.1mg/L根率的主要原因，蔗糖次之，和多效嗖影响程度较弱NAA.提高原球茎的增殖率组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，通过无性快繁，继代培养，4然后诱导生根，继而培育成苗是蝴蝶兰组织培养的一般程序但是能诱导产生原球茎的外植体数量有限，有的甚至要牺牲原植株所以如果能提高原球茎的增殖率，就会大大提高蝴蝶兰的繁殖系数蝴蝶兰原球茎增殖的最适培养基为，增殖1/2MS+BA3mg/L+NAA

0.3mg/L系数可达蝴蝶兰继代成苗率随着的值增大而增加，以

5.5BA/NAA1/2MS+BA5mg/L+O为继代培养基时，蝴蝶兰的成苗率最高,为NAA

0.1mg/L

78.4%o。