大学生创新训练项目申请书

大学生创新训练项目申请书项目编号_______________________________________项目名称中医经典名方一连朴饮治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的机制研究项目负责人党浩鹏联系电话―所在学院中医临床学院学号—专业班级中医学（5+3）班指导教师张思依E-ma iI申请日期2023年6月1日起止年月

2023.6-

2025.6湖北中医药大学

四、指导教师意见项目具有一定创新性，可行性良好导师（签章）

五、学院推荐意见单位盖章年月日

六、学校推荐意见单位盖章年月日填写说明

1、申请书所列各项内容均须实事求是填写，表达明确严谨,简明扼要模板可网上下载、自行加页

2、申请书首页只填写项目负责人“项目编号”一栏可不填

3、项目负责人所在学院须认真审核，签署推荐意见并加盖公章后提交基本情况项目中医经典名方-连朴饮治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的机制研究名称所属学学科一级门中医学与中药学学科二级类中医学科申请金20000元起止年月2023年6月至2025年6月额负责人党浩鹏性别男民族汉出生年月2001年8月姓名联系学号手机电话指导教联系张思依宅

（027）手机师电话负责人曾经参与参与互联网+大学生创新创业大赛科研的情况主持课题[11TRTM31调控NLRP3炎症小体参与幽门螺杆菌导致胃黏膜损伤的分子机制及连朴饮加味方的干预作用，国家自然科学基金，编号，2023年1月-2025年12月，30万

[2]辛开苦降法治疗糖尿病胃轻瘫的作用机制研究，湖北中医药大学，博士科研启动基金项目，编号2022ZZXB001,2022年1月-2024年12月，8万

[3]连朴饮加味方靶向NLRP3炎症小体治疗幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证的机制研究，湖北中医药大学，“青苗计划”项目，编号2022ZZXQ031,2022年1月-2023年12月，2万

[4]基于NF-kB/NLRP3信号通路探讨清热化湿解毒法治疗幽门螺杆菌相指导教师承担科关性胃炎的机制研究，湖北省教育厅，科学研究计划指导性项目，项研课题情况目编号B,2022年1月-2023年12月，0万参与科研课题

[1]应对新冠肺炎中药方剂的真实世界临床研究，科技部，国家科技重大专项,2020YFC,参与，

2020.3-

2020.12,400万,参与

[2]中医药参与治疗新冠肺炎患者康复后中和抗体水平研究，湖北省教育厅，科学研究计划指导性项目，B,

2020.9-

2022.12,0万，参与

[3]新型灸疗仪在新冠肺炎恢复期的应用和研发，湖北中医药大学，校级课题，参与

[4]柴胡达原颗粒治疗新型冠状肺炎的作用机理研究，湖北中医药大学，校级课题，参与

[5]基于数据挖掘古医籍对中医药治疗疫病措施的优化研究，湖北中医药大学，校级课题，参与指导教师对本项对课题项目设计、任务书填写、研究方案、项目实施等过程中全程指目的支持情况导姓名学号专业班级所在学院项目中的分工项20级中医学（美动物实验、论文撰黄智芮中医临床学院目康）班写组主樊丰瑾622级中医2班中医临床学院数据分析要成周芳羽121级中医学3班中医临床学院数据分析员陈紫阳122级中医学3班中医临床学院查阅文献

二、立项依据（可加页）

（一）项目简介幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）全球感染率约为50%,是人类最为常见的慢性感染之一几乎所有的Hp现症感染者均存在不同程度的胃黏膜慢性活动性炎症，全球约75%的胃癌可归因于Hp诱发的炎症和损伤Hp感染是胃炎最主要的致病因素，也是预防胃癌最重要的、可控的危险因素目前针对Hp相关性胃炎的临床主流疗法是以抗生素为核心的Hp根除治疗，但逐渐面临抗生素耐药和不良反应风险的挑战为缓解即感染率日益增高，积极研发有效的治疗手段刻不容缓，而寻求一种疗效好、副作用少的药物，探索Hp相关性胃病治疗新路径、新补充是当前研究的热点和难点，从传统中医药宝库中寻求有效方剂具有巨大潜力Hp属中医病因中“外邪”范畴，具有湿、热的性质湿热之邪困阻中焦脾胃，以致气机阻滞、耗阴伤阳，病程日久，则气滞血瘀、湿热酿毒，损伤胃络，这与即长期定植，引起患者功能性消化不良-慢性胃炎一胃黏膜萎缩-肠上皮化生-胃癌的病情进展契合湿热中阻牌胃，久蕴酿毒，胃络受损为即感染的关键病机，治疗当以清热化湿解毒为主连朴饮源于清代医家王孟英撰写的《霍乱论》卷下，功效清热化湿、理气和中连朴饮加味方是本团队在长期的临床实践过程中总结出的经验方，即连朴饮加蒲公英，在清热化湿方的基础上加大清热解毒的力度，切合Hp感染湿热中阻脾胃，久蕴酿毒的病机该团队成员在大量的临床跟师观察中发现，以连朴饮加味方为代表方的清热化湿解毒法治疗Hp相关性胃病，疗效良好本团队前期国家自然科学基金项目（编号）研究表明，连朴饮加味方可改善Hp感染大鼠的胃黏膜炎症和损伤，抑制NLRP3炎症小体信号通路的激活，降低血清ILTB，ILT8水平，提示连朴饮加味方可能通过调控NLRP3炎症小体激活改善Hp导致的黏膜病变本团队目前已撰写相关论文1篇，预期进行相关动物实验,深入探讨Hp感染的病理机制，阐释连朴饮加味方的干预作用，进一步丰富其科学内涵

（二）研究目的

（1）明确线粒体自噬-NLRP3炎症小体途径在Hp所致胃黏膜病变过程中的作用，为即感染的防治提供新靶点

（2）证实连朴饮加味方可通过调控线粒体自噬，抑制NLRP3炎症小体信号通路激活，改善Hp感染导致胃黏膜损伤的作用机制，为临床应用提供依据，推动传统医学的继承，为Hp相关性胃病的治疗提供新思路

（三）研究内容

（1）连朴饮加味方对NLRP3炎症小体通路的影响采用4周龄小鼠，用Hp菌液灌胃建立Hp感染小鼠模型分为模型对照组，连朴饮加味方干预组（高、中、低浓度）及四联疗法对照组观察各组小鼠Hp定植水平，黏膜组织形态，Western blot（WB）和RT-PCR检测各组大鼠NLRP

3、ASC、Caspase1Caspaselp20,Pro-IL-ip,IL-lp pl7IL-18表达水平,Elisa检测相关炎症因子表达同时，通过免疫共沉淀（CoTP）、WB检测NL即3/ASC、ASC/Caspasel共表达，并做相关性分析

（2）连朴饮加味方通过促进线粒体自噬抑制NLRP3炎症小体激活的干预作用沿用上述小鼠模型及分组透射电镜观察线粒体、自噬小体、溶酶体等结构;WB和RT-PCR检测各组大鼠LC3I/LC3II、PINK-K p

62、Parkin及炎症小体相关蛋白；流式细胞技术检测细胞mtROS的水平；免疫荧光（GFP-LC3和Dsred-mito共定位）检测线粒体自噬情况

（四）国、内外研究现状和发展动态Hp触发的炎性激活在Hp导致的胃黏膜炎性损伤的病理进程中发挥着极其重要的作用NOD样受体蛋白3（Nod likereceptor protein3,NLRP3）炎症小体作为固有免疫的重要组分，是机体抵抗外源性病原体感染和消除内源性危险因子刺激的始动免疫环节NLRP3炎症小体信号途径激活后，招募细胞凋亡相关斑点样蛋白（Apoptosis-associated speck-like proteincontaining aCARD,ASC）和半胱氨酸天门冬氨酸酶T（Cysteinyl aspartatespecific proteinase,Caspase-1）,组成NLRP3炎症小体复合物，进一步促进IL-

1、IL-18的剪切活化释放，导致病理性炎症的产生研究显示，Hp可激活黏膜上皮细胞（GES-1）和胃腺癌细胞（MKN-45）中的NLRP3炎症小体信号通路本团队前期研究结果亦显示，Hp感染可激活大鼠胃黏膜NLRP3炎症小体信号通路，导致胃黏膜损伤综上,NLRP3炎症小体激活在Hp感染所致胃黏膜损伤的过程中起着重要作用，但其具体分子机制还需进一步研究研究显示，Hp感染后，其毒性因子如VacA、CagA等可引起中性粒细胞、胃黏膜上皮细胞释放大量ROS,从而导致NLRP3炎症小体启动活化，而细胞内累积的ROS主要来源于损伤的线粒体因此，NLRP3炎症小体的激活与线粒体的功能紊乱密切相关线粒体自噬是线粒体完成自我清除和修复的重要途经之一，其主要作用是降解受损或多余的线粒体，促进线粒体更新以及限制ROS过量累积，对线粒体质量调控与防止细胞潜在的氧化损伤具有重要作用，而在线粒体自噬缺陷的细胞内，线粒体膜电位线下降，线粒体ROS水平明显升高，NLRP3炎性小体被激活综上,线粒体自噬可负调控NLRP3炎性小体激活，调控线粒体自噬可能是调节NLRP3炎症小体激活的潜在靶点1M.RPJMlUnMnflMMM•rtiwation图1线粒体自噬的分子机制

（五）创新点与项目特色

（1）现研究显示NLRP3炎症小体的激活在Hp致病的过程中起着重要作用，但鲜有研究针对线粒体自噬-NLRP3炎症小体途径的作用进行探讨，如本研究顺利开展,可深化Hp感染导致胃黏膜病变的机制认识

（2）连朴饮加味方针对Hp感染的临床疗效较好，但连朴饮加味方通过靶向线粒体自噬-NLRP3炎症小体途径发挥抗炎作用的研究尚未见报道，本研究深入探讨其改善即导致胃黏膜病变的分子机制，如获突破，后续还可对连朴饮加味方进行药物开发

（六）技术路线、拟解决的问题及预期成果预期成果和目标

（1）明确线粒体自噬-NLRP3炎症小体途径在Up所致胃黏膜病变过程中的作用，为Hp感染的防治提供新靶点

（2）证实连朴饮加味方可通过调控线粒体自噬，抑制NLRP3炎症小体信号通路激活，改善Hp感染导致胃黏膜损伤的作用机制，为临床应用提供依据，推动传统医学的继承，为Hp相关性胃病的治疗提供新思路3发表高水平论文1-2篇技术路线照闻〔期二:百耳低於工利甲骂瓯@芭毕@5^1n3里

⑥C sMg降期值T~1-饮食.馍水■・活HE染色观事篇建，£一/实用；快速动度.便盾.检毛改变,通酎电气尾未・送检］育毋光#,体，由，像电器修用；产能色长粒体自相关指券检费丽JIP3支赶不像出美指蚱IB.RT-PCR检测自噬相关量白及nRNA盘达i WesternblotIB和RT-PCR枪测就大面胞技术检刷施胞川侬的水平NLRP

3.ASC,CaJSpnKcl,Caxpaxol p20,DCFH-“法■利细电内ROS水平g pl

7.1LT8表热水早，Eli8aA免健英先GH»LC3f«lsred-«ito*tt相关炎症因子豪培i什IP绘利NLRP3/ASC、检/线依体自金情处ASC/Gupascl共盘逑__________现___更__迷__朴___饮__加___味__方______向__线__粒.体自炎痕小体途径IE1LNLRP3千•蝎染所致黏膜辍伤的具体机制fWp H图2技术路线图七项目研究进度安排12023年6月-2023年12月购买试剂、耗材、药物，完成准备工作；完成连朴饮加味方中药材质量控制；完成小鼠胃黏膜Hp定植情况、黏膜病理情况观察22024年1月-2024年6月NLRP3炎症小体相关指标检测32024年7月-2024年12月完成小鼠线粒体自噬相关指标检测42025年1月-2025年6月分析数据，撰写论文、结题报告八已有基础

1.与本项目有关的研究积累和已取得的成绩指导老师为我校中医临床学院温病教研室教师，在温病学医教研过程中积累了较为丰富的经验，主持包括国家自然科学基金在内的各级各项课题4项，累计科研经费40万，取得了部分成果

2.已具备的条件，尚缺少的条件及解决方法本项目依托湖北中医药大学疫病研究所、循证医学中心、证候研究室及疫病文献研究室本课题拟在我校国家中医药管理局III级实验室完成实验室现有暗室、完备的分子及细胞生物学实验设备，细胞室、超净工作台和安全柜，CO2培养箱等，-80℃冰箱，Bio-Rad中小SDS-PAGE装置、液氮罐、杂交炉、电泳、凝胶成像及分析系统，测序-干胶系统、Beckman高速离心机、大型摇床和制水、制冰机等等能在实验室内完成RT-PCR、Western Blot,免疫荧光、免疫共沉淀、免疫共聚焦等实验，完全可满足本课题研究的需要

三、经费预算预算经费阶段下达经费计划（元）开支科目主要用途前半阶段后半阶段（元）预算经费总额

200001000010000.业务费1

（1）计算、分析、测试费

（2）办公费

（3）会议、差旅费

（4）文献检索费

（5）论文出版费5000发表1篇论文

5000.仪器设备购置费2实验装置试制费

3.

4.材料费15000购买实验动物、相lX005000关实验试剂、耗材等学校批准经费。