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文本内容:
批号送检日期检测日期试验类型口初试口复试口重试重（复）试原因口初试不合格，口初试不成立，口稳定性检验
1.第一次细胞传代
1.1操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况设施、设备检查设备超净工作台倒置显微镜、是否处于完好、清洁状态是否在验证有效期内是口否口是口否口文件记录检查是口否口是否为现用版本♦是口否口是否准备相应记录♦消毒剂检查口1%新洁尔灭批号、效期有效期至年月日口5%新洁尔灭批号、效期有效期至年月日口1%来苏儿批号、效期有效期至年月日口5%来苏儿批号、效期有效期至年月日备注操作人日期复核人:日期:
1.2操作前准备工艺操作标准及工艺要求过程记录步骤灭菌批号按照工艺要求准备物品501nl瓶、100ml有效期至年月日瓶、10ml瓶、橡胶塞、1ml吸管、10ml吸灭菌批号管、无毛抹布、C级区洁净服及口罩、吸有效期至年月日球、不锈钢盆物料名称来源规格（ml/瓶）批号领入数（瓶）有效期至E-MEM培养基本室自配物料
7.5%碳酸氢钠木室自配确认
3.0%谷氨酰胺本室自配
0.25%胰蛋白酶本室自配10000单位PS待检新生牛血清对照新生牛血清E-MEM培养基本室自配
7.5%碳酸氢钠本室自配
3.0%谷氨酰胺木室自配
0.25%胰蛋白酶本室自配10000单位PS本室自配待检新生牛血清对照新生牛血清细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况细胞口伸展呈成纤维状种子人胚肺二倍体细胞口致密单层□光亮透明确认□无污染□有污染（2BS株）口细胞死亡备注操作人日期复核人:日期:
4.3操作工作时间年月日时分至时分工艺步操作标准及工艺要求过程记录骤生长液配制
1、不含血清MEM培养液配制配方400mlE-MEM+1%（ml/ml）（
3.0%谷E-MEM_______ml氨酰胺）+l%PS+
2.6%（ml/ml）+（
7.5%碳
3.0%谷氨酰胺___________ml酸氢钠）+10%（ml/ml）新生牛血清以配制PS:______ml
100.0ml生长液为例
7.5%碳酸氢钠_________ml按配方计算出配置一定体积的生长液所需
2、对照新生牛血清细胞生长液的配制取上述培养液体E-MEM、
3.0%谷氨酰胺、1%PS
7.5%碳酸氢钠液____ml,加对照新生牛血清_____mlo配制用10ml吸管抽取对照新生牛血清及待检新生
3、待检新生牛血清细胞生长液的制备取上述培养牛血清加入对应体积的液体E-MEN培养基中，液_____ml,加待检新生牛血清_______mlo盖橡胶塞摇匀待用
1.计算消化液配制以400ml体积装量的浓度为
0.25%胰蛋白酶为基质液，加入
2.0%
7.5%碳酸氢钠二20nli X
2.0%=
0.4ml（ml/ml）（
7.5%碳酸氢钠）
2.操作步骤取装量为20nli的
0.25%胰蛋白酶瓶，每瓶按上述同样的方法配制是口否口细胞L弃旧生长液，每50nli瓶中加入胰蛋白酶消消化液46ml；〜化、
2.待细胞面呈松散状时，弃掉消化液；是口否口传代
3.将消化好的细胞加入生长液，每瓶加入分种8ml生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使细胞从是口否口与细瓶壁上脱落悬入生长液中胞计4,细胞计数细胞计数数
5.使用10ml吸管将细胞悬液种入含细胞生用含有对照血清的生长液悬浮的细胞_________长液3L转瓶中用含有待检血清的生长液悬浮的细胞_________含待检新生牛血清分种_______个3L瓶口含对照新生牛血清分种_______个3L瓶口将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37℃转瓶培养培养是口否口细胞细胞名称使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向瓶型使用人胚肺二倍体细胞情况（2BS株）备注操作人日期年月日操作人________________________日期—____年——月―复核人_______________________日期—____年——月―—日日期年日月检查人________________________复核人日期年月日
4.4清场操作:清场要求清场过程确认结果在生产完成后清场操作前需在房间门上悬挂“待处理”标志悬挂“待处理”标志牌，关闭日光灯合格口不合格口牌，关闭日光灯按《生产区清场、清洁、消毒将不锈钢盆、桶、250nli瓶、500ml瓶、橡管理标准操作规程》对操作区域进胶塞、3L瓶、吸管、送到洗刷间清洗合格口不合格口行清洁、消毒合格口不合格口按要求悬挂状态标识正确悬挂状态标识牌标识合格口不合格口废弃物装袋放固定位置送出废弃物装袋放固定位置送出
5.新生牛血清支持细胞增殖试验相对生长率计算每次传代进行细胞计数，计算待检血清与对照血清的相对生长率（RGR）RGR=（待检血清细胞平均数/对照血清细胞平均数）X100%RGR不低于95%RGR结论细胞传代第一次细胞传代口合格口不合格第二次细胞传代口合格口不合格第三次细胞传代口合格口不合格
6.新生牛血清支持细胞增殖检查判定结果:批号结论操作人日期年月日复核人日期年月日细胞增殖检查记录细胞细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况口伸展呈成纤维状种子人胚肺二倍体细胞口致密单层口光亮透明确认口无污染口有污染（2BS株）口细胞死亡操作人日期复核人:日期:L3操作工作时间年月日时分至时分工艺步操作标准及工艺要求过程记录骤生长液配制
1、不含血清MEM培养液配制配方:100mlE-MEM+1%（ml/ml）（
3.0%谷E-MEM_______ml氨酰胺）+l%PS+
2.6%（ml/ml）
3.0%谷氨酰胺_________ml（
7.5%碳酸氢钠）+10%（ml/ml）新生牛PS:______ml血清以配制
100.0ml生长液为例
7.5%碳酸氢钠__________ml
2、对照新生牛血清细胞生长液的配制取上述培养按配方计算出配置一定体积的生长液所需液体E-MEM、
3.0%谷氨酰胺、1%PS、
7.5%碳酸氢钠液_____ml,加对照新生牛血清_____mlo配制用10ml吸管抽取对照新生牛血清及待检新生
3、待检新生牛血清细胞生长液的制备取上述培养牛血清加入对应体积的液体E MEN培养基中，液______ml,加待检新生牛血清______mlo盖橡胶塞摇匀待用
1.计算消化液配制以20ml体积装量的浓度为
0.25%
7.5%碳酸氢钠二20nli X
2.0%=
0.4ml胰蛋白酶为基质液，加入
2.0%（ml/ml）（
8.0%碳酸氢钠）o
2.操作步骤取装量为20nli的
0.25%胰蛋白酶瓶，每瓶按上述同样的方法配制是口否口L弃旧生长液，每50nli瓶中加入胰蛋白酶消化液46ml；〜细胞是口否口
2.待细胞面呈松散状时，弃掉胰蛋白酶消化消液；化、是口否口
3.将消化好的细胞加入生长液，每瓶加入传代8nli生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使细胞分种从瓶壁上脱落悬入生长液中与细
4.细胞计数细胞计数胞计
5.使用10ml吸管按14分种率将细胞悬液用含有对照血清的生长液悬浮的细胞__________数分种于生长液瓶中，振荡摇匀后加入501nl用含有待检血清的生长液悬浮的细胞__________瓶中;含待检新生牛血清分种_______个50ml瓶，含对照新生牛血清分种_______个50ml瓶将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37℃培养是口否口瓶型细胞细胞名称使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向使用人胚肺二倍体细胞情况（2BS株）操作人日期复核人日期
1.4待检血清传代细胞观察观察日期细胞生长情况操作者复核者口贴壁良好□未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状口光亮透明口浑浊年月日□致密单层□薄单层口未成单层口可见较多分裂相□可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状口光亮透明口浑浊年月日□致密单层□薄单层口未成单层口可见较多分裂相□可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状口光亮透明口浑浊年月日□致密单层口薄单层口未成单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落
2.第二次细胞传代
2.1操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况设施、设备检查培养箱、超净工作台、倒置显微镜、是否处于完好、清洁状态是否在验证有效期内是口否口是口否口文件记录检杳是否为现用版本是口否口♦♦是否准备相应记录是口否口消毒剂检查口1%新洁尔灭批号、效期有效期至年月曰口5%新洁尔灭批号、效期有效期至年月曰口1%来苏儿批号、效期有效期至年月曰口5%来苏儿批号、效期有效期至年月曰备注操作人日期复核人:日期:
2.2操作前准备工艺操作标准及工艺要求过程记录步骤物料按照工艺要求准备物品25cn2细胞瓶、灭菌批号确认100ml瓶、10ml瓶、橡胶塞、Ind有效期至年月日吸管、10ml吸管、分装管道、无毛抹布、灭菌批号吸球、不锈钢盆、桶C级区洁净服及口有效期至年月日罩、物料名称来源规格（ml/瓶）批号领入数量（瓶）有效期至E-MEM培养基本室自配
7.5%碳酸氢钠本室自配
3.0%谷氨酰胺本室自配
0.25%胰蛋白酶本室自配10000单位PS本室自配待检新生牛血清对照新生牛血清细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况细胞人胚肺二倍体细胞口伸展呈成纤维状种子□致密单层□光亮透明（2BS株）确认口无污染口有污染口细胞死亡备注操作人日期复核人:日期:
2.3操作工作时间年月日时分至时分工艺步操作标准及工艺要求过程记录骤生长液配制
1、不含血清MEM培养液配制配方100mlE-MEM+1%（ml/ml）（
3.0%谷E-MEM________ml氨酰胺）+KPS+
2.6%（ml/ml）（
7.5%碳酸氢
3.0%谷氨酰胺___________ml钠）+10%（ml/ml）新生牛血清以配制
100.PS:______ml0ml生长液为例
7.5%碳酸氢钠___________ml按配方计算出配置一定体积的生长液所需
2、对照新生牛血清细胞生长液的配制取上述培养E-MEM、
3.0%谷氨酰胺、1%PS.
7.5%碳酸氢钠液体液____ml,加对照新生牛血清_____mlo用10ml吸管抽取对照新生牛血清及待检新生配制
3、待检新生牛血清细胞生长液的制备取上述培养牛血清加入对应体积的液体E-MEN培养基中，盖橡胶塞摇匀待用液______ml,加待检新生牛血清______mlo
1.计算消化液配制以20ml体积装量的浓度为
0.25%
7.5%碳酸氢钠二20ml X
2.0%=
0.4ml胰蛋白酶为基质液，加入
2.0%
2.操作步骤取装量为201nl的
0.25%胰蛋白酶瓶，每（ml/ml）（
7.5%碳酸氢钠）瓶按上述同样的方法配制是口否口细胞L弃旧生长液，每25cn）2瓶中加入胰蛋白酶消消化、化液46ml；〜传代是口否口2,待细胞面呈松散状时，弃掉胰蛋白酶消是口否口分种化液；与细
3.将消化好的细胞加入生长液，每瓶加入8nli胞计生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使细胞从瓶壁数上脱落悬入生长液中细胞计数
4.细胞计数用含有对照血清的生长液悬浮的细胞________
5.使用10ml吸管按L4分种率将细胞悬液分用含有待检血清的生长液悬浮的细胞_________种于生长液瓶中，振荡摇匀后加入3L瓶中；含待检新生牛血清分种_______个25cllI瓶，含对照新生牛血清分种_______个25cm2瓶培养将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37℃培养是口否口细胞细胞名称使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向瓶型使用人胚肺二倍体细胞情况（2BS株）备注操作人日期复核人日期
2.4清场操作:清场要求清场过程确认结果在生产完成后清场操作前需悬挂“待处理”标志牌，关闭层流罩，日合格口不合格口在房间门上悬挂“待处理”标志光灯牌，关闭层流罩，日光灯按《生产区清场、清洁、消毒将不锈钢盆、桶、250ml瓶、500nd瓶、橡管理标准操作规程》对操作区域进合格口不合格口胶塞、吸管、送到洗刷间清洗行清洁、消毒按要求悬挂状态标识正确悬挂状态标识牌标识合格口不合格口废弃物装袋放固定位置送出废弃物装袋放固定位置送出合格口不合格口操作人____________日期复核人___________日期:检查人___________日期:
2.5待检血清传代细胞观察观察日期细胞生长情况操作者复核者口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状口光亮透明口浑浊年月日口致密单层口薄单层口未成单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落口未贴壁口贴壁良好口未伸展的球状口伸展呈成纤维状口浑浊口光亮透明年月日口致密单层口薄单层口未成单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状口光亮透明口浑浊年月日口致密单层口未成单层口薄单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落
3.第三次细胞传代
3.1操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况操作间名称细胞制备间环境温度1526℃相对〜生产环境检查是口否口湿度3070%〜是口否口培养箱、洁净工作台、倒置显微镜、是否处于完设施、设备检查好、清洁状态是否在验证有效期内是口否口是口否口是否为现用版本是口否口♦文件记录检查♦是否准备相应记录是口否口口1%新洁尔灭批号、效期有效期至年月日口5%新洁尔灭批号、效期有效期至年月日消毒剂检查口1%来苏儿批号、效期有效期至年月日口5%来苏儿批号、效期有效期至年月日备注操作人日期复核人:日期:
3.2操作前准备工艺操作标准及工艺要求过程记录步骤物品在灭菌有效期内是口否口按照工艺要求准备物品50ml瓶、100mL瓶、灭菌批号10ml瓶、橡胶塞、1ml吸管、10ml吸管、有效期至年月日无毛抹布、吸球、不锈钢盆、桶、C级区洁灭菌批号净服及口罩、物料有效期至年月日确认领入数量（瓶）物料名称来源规格（ml/瓶）批号有效期至E-MEM培养基本室自配
7.5%碳酸氢钠本室自配
3.0%谷氨酰胺本室自配
0.25%胰蛋白酶本室自配10000单位PS本室自配待检新生牛血清对照新生牛血清细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况细胞人胚肺二倍体细胞口伸展呈成纤维状种子（2BS株）口致密单层□光亮透明确认□无污染口有污染口细胞死亡备注操作人日期复核人:日期:
3.3操作工作时间年月日时分至时分工艺步操作标准及工艺要求过程记录骤生长液配制
1、不含血清MEM培养液配制配方100mlE-MEM+1%（ml/ml）（
3.0%谷E-MEM________ml氨酰胺）+l%PS+
2.6%（ml/ml）（
7.5%碳酸
3.0%谷氨酰胺___________ml氢钠）+10%（ml/ml）新生牛血清以配制
100.PS:______ml0ml生长液为例
7.5%碳酸氢钠___________ml按配方计算出配置一定体积的生长液所需
2、对照新生牛血清细胞生长液的配制取上述培养E-MEM、
3.0%谷氨酰胺、1%PS、
7.5%碳酸氢钠液体用10ml吸管抽取对照新生牛血清及待检新生液____ml,加对照新生牛血清_____mlo配制牛血清加入对应体积的液体E-MEN培养基中，
3、待检新生牛血清细胞生长液的制备取上述培养盖橡胶塞摇匀待用液_____ml,加待检新生牛血清______mlo
1.计算消化液配制以20ml体积装量的浓度为
0.25%胰蛋白酶为基质液，加入
2.0%
7.5%碳酸氢钠=20nli X
2.0%=
0.4ml（ml/ml）（
7.5%碳酸氢钠）
2.操作步骤取装量为20ml的
0.25%胰蛋白酶瓶，每瓶按上述同样的方法配制是口否口细胞L弃旧生长液，每50ml瓶中加入胰蛋白酶消消化液46ml；〜化、
2.待细胞面呈松散状时，弃掉消化液；是口否口传代
3.将消化好的细胞加入生长液，每瓶加入分种200nli生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使细胞是口否口与细从瓶壁上脱落悬入生长液中胞计
4.细胞计数细胞计数数
5.使用10ml吸管按L4分种率将细胞悬液分用含有对照血清的生长液悬浮的细胞_________种于生长液瓶中，振荡摇匀后加入50mL瓶中；用含有待检血清的生长液悬浮的细胞________含待检新生牛血清分种_______个50nli瓶口含对照新生牛血清分种_______个50ml瓶口培养将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37℃培养是口否口细胞细胞铭称使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向瓶型使用人胚肺二倍体细胞情况（2BS株）备注操作人日期复核人:日期:
3.4清场操作:清场要求清场过程确认结果在生产完成后清场操作前需悬挂“待处理”标志牌，关闭层流罩，日在房间门上悬挂“待处理”标志合格口不合格口光灯牌，关闭层流罩，日光灯按《生产区清场、清洁、消毒将不锈钢盆、桶、250ml瓶、500ml瓶、橡管理标准操作规程》对操作区域进胶塞、3L瓶、吸管、送到洗刷间清洗合格口不合格口行清洁、消毒按要求悬挂状态标识正确悬挂状态标识牌标识合格口不合格口合格口不合格口废弃物装袋放固定位置出废弃物装袋放固定位置送出
3.5待检血清传代细胞观察观察日期细胞生长情况操作者复核者口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状□光亮透明口浑浊年月日口致密单层口薄单层口未成单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染□有污染口细胞死亡口细胞脱落口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状□未伸展的球状□光亮透明口浑浊年月H口致密单层口薄单层口未成单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染□有污染口细胞死亡口细胞脱落操作人________________________日期年月日日期年日月复核人_______________________日期_____年——月——日检查人________________________口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状口光亮透明口浑浊年月日口致密单层□薄单层口未成单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染□有污染口细胞死亡口细胞脱落
4.第三次细胞传代后细胞计数
4.1操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况是口否口设备名称超净工作台、倒置显微镜、转瓶机是设施、设备检查否处于完好、清洁状态是否在验证内是口否口是否为现用版本是口否口♦文件记录检查♦是否准备相应记录是口否口消毒剂检查口1%新洁尔灭批号、效期有效期至年月曰口5%新洁尔灭批号、效期有效期至年月曰口1%来苏儿批号、效期有效期至年月曰口5%来苏儿批号、效期有效期至年月曰备注操作人日期复核人:日期:
4.2操作前准备工艺操作标准及工艺要求过程记录步骤灭菌批号按照工艺要求准备物品250nli瓶、3L有效期至年月日瓶、500ml瓶、10ml瓶、橡胶塞、1ml物料吸管、10ml吸管、无毛抹布、吸球、不灭菌批号确认锈钢盆、桶有效期至年月日物料名称来源规格（ml/瓶）批号领入数量（瓶）有效期至。
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