5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段导学案

课题多聚酶链式反应扩增片段导学案2DNA学习目标

1、了解PCR技术的基本操作

2、理解PCR的原理

3、探讨PCR的应用I.基础学问PCR技术扩增DNA的过程，与细胞内DNA复制过程类似

1.细胞内DNA复制条件分析条件组分作用模板DNA的两条单链供应复制的模板原料四种脱氧核甘酸合成DNA子链的原料解旋酶打开DNA双螺旋酶DNA聚合酶催化合成DNA子链ATP能量为解螺旋和合成子链供能引物RNA为DNA聚合酶供应合成的3端起点

2.细胞内DNA复制过程的解析解旋引物结合DMA聚合酶结合子链合成后续加工子链合成特点［思索］DNA分子能精确复制的缘由有哪些？

3.DNA分子复制的人工限制解开螺旋在℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性复原螺旋在℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性复制条件反应场所（自动温度周期性调整）［思索］缓冲液相当细胞内的什么成分？（核基质）

4.PCR的反应过程变性在C时DNA解旋复性在C时引物与DNA单链结合延长在C时合成DNA子链（两个引物间的序列）II.试验操作

（1）PCR反应体系缓冲液、，、、两种RNA引物，水

（2）试验操作步骤

①依据PCR反应体系配方配制反应液；

②将PCR反应体系50u L用微量移液器转移到微量离心管（

0.5而,）中；

③将微量离心管放到PCR仪中；

④设置PCR仪的工作参数

⑤DNA在PCR仪中大量扩增

2.4水浴法将微型离心管依次在℃、℃、℃的恒温水浴锅中循环处理相应时间

3.试验留意事项

（1）避开外源DNA污染所用仪器、缓冲液、蒸馄水等运用前高压灭菌

（2）缓冲液和酶分装成小份，-20℃低温保存

（3）每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头

（4）混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部课堂检测点金训练多聚酶链式反应扩增片段测定含量稀释调零测定并读数计算DNA。