细胞培养室工作守则

细胞培养室工作守则

一、入室基本规则

1.禁止私自带非本实验平台人员入室操作

2.进细胞培养室必须穿专用工作衣（白大衣），换拖鞋或鞋套，不必需的物品勿携入室内

3.严禁吸烟和饮食，保持安静和良好秩序，实验时要严肃认真4•当天要操作的使用者，实验开始前、结束后开操作间外紫外灯消毒细胞房15-30min；检查培养箱内水量是否足够；检查灭菌物品的储备情况，以便及时补充

5.细胞培养室遵循预约原则预约时间和实际操作时间都要登记！备查！无预约者若要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验

6.试剂耗材都由实验人员自己准备，各自物品请写好名字，不能私自拿取他人试剂耗材或消毒物品，如紧急需要，则需征得本人同意后方可注公用材料如枪头、离心管，配制消毒用75%的酒精，制作酒精棉球等遵从谁消耗谁补充，与人方便于己方便！耗材的使用秉持节约的原则，同一类耗材必须使用完才可以拆封新的耗材,同一类耗材快使用完的时候到徐老师处领取

7.离开实验室前，脱去工作衣和拖鞋或鞋套若有垃圾堆积，请顺手扔掉,更换垃圾袋关好水、电、门、窗，方可离开实验室

8.定期1-2月清理冰箱里的个人物品

9.新进细胞培养室进行实验的老师或同学，由负责该新进人员的指导教师进行细胞培养培训

二、培养箱使用规则

1.从培养箱取放物品前;用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数注培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气长时间敞开或频繁开关培养箱,容易造成污染

2.培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒瓶口位置，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气

3.2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱

4.普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察注频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定

5.培养箱贴上消毒、换水时间表，值日生请作好记录

三、显微镜使用规则

1.显微镜使用前\用酒精棉球从中间至周围擦拭载物台，注意不要碰到镜头

2.离开细胞房时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命尽量避免频繁开关显微镜电源

四、超净台相关操作规则

1.检查酒精棉球是否足够；喷壶和酒精灯中酒精是否足够，液面应占容量1/3-2/3；不足请及时补充注消毒用75%的酒精，酒精灯用95%的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意2,超净台中应摆放废液缸，用于暂时存放废弃物，实验结束后将20%的84消毒液倒入缸中浸泡约30分钟，冲洗晾干备用废弃细胞需首先用20%的84消毒液消毒后再倒入下水道

3.超净台使用前需用酒精棉球擦拭工作区消毒，打开紫外线灯和风机，同时打开室内紫外线灯照射30分钟以上；使用后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，关闭风机，紫外线灯照射30分钟以上后关闭超净台电源

4.从外面拿进超净台的东西都要喷75%酒精消毒

5.可回收的移液管、离心管、培养瓶皿•等干净干燥后用放酸缸中浸泡过夜后，再进行洗涤洗涤程序清水冲10次以上去除洗涤残留酸液，然后冲去离子水3次，再用双蒸水1次，倒置晾干

6.每次实验结束后，应及时清理台面、桌面、地面，整理好用过的实验器材观察培养箱中C02的浓度、温度、水量、供气压力等参数，待正常后做好操作时间记录将废弃物品带出操作间

五、培养液、试剂等相关操作规则

1.从冰箱取放物品动作要迅速，关门时要检查门是否关好按类别存放试剂

2.买回的血清使用前需在超净台分装（15ml离心管），标注血清品牌、分装人和分装日期分装好的血清长时间保存于-20℃如需使用，使用前放于4c预解冻，在血清管上签上使用者名字及口期,解冻后的血清暂存在4℃并尽快使用若使用别人解冻的血清需征得同意以免耽误他人实验按需解冻，避免反复冻融

3.细胞因子或蛋白等试剂到货后存放于-20度或-80度若为粉状，在使用前按说明书溶解，并分装好，标注好试剂名称、分装日期，分装浓度，分装体积，存放于-80度每次取一管放于细胞室-20度，用完之后再另外取用

4.细胞培养实验所用试剂尽量做到专人专用，标注清楚物品名称、个人名字和启封日期，以免交叉污染若为同一课题组成员，试剂可相互协调共用，以保证试剂最大限度的使用完之后再订购

六、值日生工作职责L每周值日生时间从周六开始，至下周五结束

5.值日周开始时需完成的事情在周末消毒灭菌并烘干枪头、离心管等常规物品，供未来一周的使用各种规格的枪头需要准备两套，一套放置于烘箱中，一套放置于超净工作台中配制消毒用的75%的酒精，制作酒精棉球，给细胞房内添加足够的95%乙醇供酒精灯使用

6.值日周结束前需完成的事情星期五或前后一天内打扫细胞房包括超净台面、桌面、地面，给水浴锅加水或换水（超纯水或蒸储水），洗细胞房专用的实验服，紫外消毒细胞房切记给培养箱换超纯水，保证水质清洁！注若上周值日生及时给培养箱内水槽加足水，根据经验未来一周内培养箱不会干水，但值日生仍应经常检查，以便及时发现异常情况

7.值日完成后需在平台群发照片汇报已做值日

8.每4周清洁一次培养箱先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要迅速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器的寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min如不遵守该细胞培养室守则，将取消进行细胞培养的资格！。