实验报告硝酸还原酶活性的测定

实验报告-硝酸还原酶活性的测定实验报告-硝酸还原酶活性的测定

一、实验目的本实验旨在测定硝酸还原酶的活性，了解其在植物氮素代谢中的作用硝酸还原酶NR是植物氮素同化过程中的关键酶，催化硝酸根离子N03-还原为亚硝酸根离子N02-,进一步转化为钱离子NH4+,为植物提供必要的氮素营养

二、实验原理硝酸还原酶活性的测定通常采用比色法该方法基于硝酸还原酶催化硝酸根离子还原为亚硝酸根离子的反应，生成的亚硝酸根离子与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与NT-蔡基乙二胺盐酸盐NEDD偶联生成红色产物，通过测定产物在540nm处的吸光度值，可计算硝酸还原酶的活性

三、实验步骤

1.试剂配制配制反应液、显色液、标准品溶液等所需试剂

2.样品处理称取适量新鲜植物组织，加入提取缓冲液研磨成匀浆，离心取上清液备用

3.酶活性测定取适量上清液加入反应液中，37c水浴保温30niin,加入显色液充分混匀，室温放置15min

4.比色分析以空白管调零，测定各管在540nm处的吸光度值

5.数据处理根据标准曲线计算样品中亚硝酸根离子的浓度，进一步计算硝酸还原酶的活性

四、实验结果

1.标准曲线绘制以不同浓度的标准品溶液为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线得到回归方程y=

0.012x+

0.005,R2=

0.

9982.样品吸光度值测定测定各样品管的吸光度值，记录数据如下表样品编号吸光度值

10.

15020.

18030.

21040.

24050.

2703.计算硝酸还原酶活性根据标准曲线计算各样品中亚硝酸根离子的浓度，进步计算硝酸还原酶的活性得到各样品的硝酸还原酶活性如下表:样品亚硝酸根离子浓度Pmol/L硝酸还原酶活性U/g FW编号

110.

420.

261213.

760.

344317.

100.

427420.

440.

510523.

780.593

五、实验结论本实验通过比色法测定了不同植物样品中硝酸还原酶的活性结果表明，不同植物样品的硝酸还原酶活性存在差异，可能与植物的种类、生长条件以及氮素营养状况等因素有关实验结果可为植物氮素代谢研究提供参考数据。