恶性肿瘤的常用基因检测

恶性肿瘤的常用基因检测正常细胞恶变，直到最后扩散转移的过程涉及许多基因的改变借助分子生物学技术，对细胞恶变及肿瘤生成过程进行深入研究，寻求新的恶性肿瘤的基因标志物有助于填补传统生化和免疫学标志物的空白肿瘤的产生与癌基因和抑癌基因有关凡能参与或直接导致正常细胞发生恶性变的任何基因序列均称为癌基因；而存在正常细胞内，发生恶变后转变为癌基因的基因序列称为原癌基因原癌基因或细胞癌基因本质是一类控制细胞生长分化的基因组原癌基因编码的产物可在细胞膜、细胞质、细胞核及细胞外，对细胞生长及分化进行调控与临床诊断有关的癌基因可以分为两大类

①肿瘤非特异性癌基因如c-myc、nm

23、k-ras等存在于多种组织，在肝癌、膀胱癌、乳腺癌、大肠癌、肺癌等许多肿瘤中都可检测到；

②肿瘤特异性癌基因如c-s i s与淋巴结肿瘤转移有关，c-ab I与慢性髓性白血病有关凡可抑制细胞生长并能潜在抑制癌变作用的基因均称为抑癌基因，如p

53、Rb、APC等抑癌基因必须具备以下条件在癌组织细胞中，该基因有明显改变，如点突变、DNA片段或全基因的缺失或表达缺陷;而在相应的正常组织中基因表达正常；该基因可部分或全部抑制肿瘤细胞的恶性表型

一、视网膜母细胞瘤基因视网膜母细胞瘤基因ret inob Iastoma,Rb定位于人类染色体13q14,全长约200kb,有27个外显子，26个内含子，编码具有928个氨基酸残基的Rb蛋白，85%的Rb蛋白质产物存在于细胞核中，约10%在细胞膜上，在胞质和间质中几乎没有Rb蛋白质Rb蛋白磷酸化是Rb基因调节细胞分化的主要形式，在细胞周期的G1期Rb基因蛋白为去磷酸化状态，在G2期、S期、M期为磷酸化状态Rb基因的抗癌性有两层含义一是在正常细胞中Rb基因具有抑制细胞生长的作用；二是在肿瘤细胞内Rb基因具有抑制其生长及致瘤性作用正常人体组织Rb基因的结构及表达均正常，而相应的肿瘤组织中的基因常缺失突变，缺乏正常的Rb蛋白Rb基因可以完全抑制视网膜母细胞瘤的发生，表明基因功能失活是视网膜母细胞瘤发生的主要机制；而Rb基因只能部分抑制前列腺癌、膀胱癌及乳腺癌的发生，说明Rb基因失活在这些肿瘤的发生、发展中起着一定作用Rb基因突变也与骨肉瘤和小细胞肺癌有关

二、BRCA1和BRCA2基因遗传性乳腺癌为常染色体显性病，与BRCA1和BRCA2基因有关BRCA1位于染色体17q上，BRCA2位于染色体13q12-13上BRCA1编码含1863个氨基酸残基的蛋白，这种蛋白可以作为一种转录因子检测体细胞BRCA1和BRCA2的突变，能鉴别带有突变基因的乳腺癌家族个体现已查明，2%的乳腺癌，最多5%的卵巢癌是由于BRCA1基因突变引起不到2%的女性乳腺癌，10%的男性乳腺癌和1%的卵巢癌由BRCA2基因突变引起

三、Her-2/neu基因Her-2/neu原癌基因编码产生一种跨膜的酪氨酸激酶受体，具有刺激生长的活性，在调节细胞生长、生存和分化中起重要作用Her-2/neu基因的过度表达可导致细胞过度增殖和表型恶性转化临床研究发现25%30%〜的乳腺癌患者Her-2/neu基因过度表达，这些患者具有病理类型多为低分化型、激素受体往往阴性、易发生淋巴结转移、预后不良、总生存期及无病生存期较短等特点现已明确，Her-2/neu基因过度表达与治疗效果密切相关，具有预测疗效的作用近来发现，Her-2/neu癌蛋白胞外结构可通过蛋白水解的方式从细胞表面脱落，形成可溶性的Her-2/neu可溶性Her-2/neu是肿瘤转移和负荷增加的标志，血清可溶性Her-2/neu水平升高，预示着病情进展、预后不良

四、ras基因ras基因首先在大鼠肉瘤病毒rat sarcomavirus中发现而得名，编码酪氨酸激酶目前已发现人基因中有Ha-ras Ki-ras和N-ras三种，三者核酸序列同源高达85%,均有4个外显子不论什么种族的m基因编码的磷蛋白p21都具有与鸟甘酸结合的能力，并具有GTP酶的活性，它们都定位于细胞内侧起作用，这些作用与G蛋白十分相似目前，多数学者认为ras基因参与诱发肿瘤的可能机制有

①ras基因的过度表达，形成过多与GTP结合状态的ras蛋白，或ras蛋白异常使与GTP结合状态居多；

②ras基因突变影响ras蛋白GTP酶活性Oras基因突变多见于神经母细胞瘤、膀胱癌、急性白血病、消化道肿瘤、乳腺癌，患这些疾病时ras基因突变后的表达产物p21蛋白增加并和肿瘤的浸润及转移有关大约有30%的人类肿瘤中可以发现ras突变乳腺肿瘤中有21%

63.6%ras癌基因的表达，且其表达与肿瘤恶化程度、〜淋巴结转移情况等有关

五、EGFR基因表皮生长因子受体ep ithe Ii aI growthfactor receptor,EGFR本身具有酪氨酸激酶活性，一旦与表皮生长因子EGF结合可启动细胞核内的有关基因，从而促进细胞分裂增殖EGFR在肿瘤细胞的增殖、损伤修复、侵袭及新生血管形成等方面起重要作用胃癌、乳腺癌、膀胱癌和头颈部鳞癌的EGFR表达增高近年来，靶向EGFR药物已成为肿瘤治疗的新热点靶向EGFR药物主要有两类一类是作用于受体胞内区的小分子酪氨酸激酶抑制剂TKI,如吉非替尼等；另一类是作用于受体胞外区的单克隆抗体MAb,如西妥昔单抗等肺癌细胞中EGFR酪氨酸激酶编码区基因突变是靶向药物奏效的一个必要的前提条件，对EGFR基因的外显子进行检测，能从晚期肺癌患者中筛选出最适合治疗的对象进行有针对性的治疗文献报道，中国人肺癌的EGFR基因突变主要发生在外显子19和21,突变率较高，理论上讲是EGFR酪氨酸激酶抑制剂合适的应用对象

六、结肠多发性腺瘤样息肉病基因结肠多发性腺瘤样息肉病基因adenomatous poI yposisco Ii,APC的突变在遗传性大肠癌的形成中起着关键的作用APC基因定位于染色体5q215q22,共有15个外显子，编码具有2843个氨基酸的蛋白质APC基因存在于细胞质中，参与c-myc基因表达的调节，它没有信号肽、穿膜区和核靶信号APC基因在正常结肠黏膜、胎儿肌肉、肝、皮肤、成人外周血白细胞、结肠癌及部分其他肿瘤细胞系中表达APC基因的突变主要包括点突变和框架移动突变前者包括无义突变、错义突变和拼接错误；后者包括缺失和插入点突变似乎分散在整个基因中，而且半数以上表现在核甘酸C向其他核甘酸的改变，大部分集中在CpG和GpA位点；大部分缺失发生在外显子15,所有的缺失都改变了阅读框，且形成了下游的终止密码子在大肠肿瘤细胞中，除存在APC位点杂合性丢失外，还有体细胞突变，结果与胚系突变的情况类似未分化性胃癌APC基因的点突变和缺失均位于第15外显子，而在食管癌中的APC等位基因呈杂合性丢失

七、家族性结肠息肉易感基因家族性结肠息肉易感基因mutated coI orectaI cancer,MCC定位于5q21,有17个外显子，16个内含子，mRNA全长4181个核甘酸，编码829个氨基酸的蛋白，分子量为93kD结肠癌中发现有MCC的重排，也有MCC的点突变现研究表明MCC不仅与结肠癌有关，而且与小细胞肺癌、非小细胞肺癌等肿瘤有关

八、大肠癌缺失基因大肠癌缺失基因deleted in coI orectaI carei noma,DCC定位于18号染色体18q

21.3,DNA约370kb,转录成1012kb的mRNA,〜编码750个氨基酸蛋白，分子量为190kD DCC编码产物作为受体的一部o分在轴索中发挥作用现研究表明它与结肠癌等肿瘤有关，DCC在大肠癌中是作为一种肿瘤抑制基因起作用，表达减少或丢失和肿瘤的分期增加及预后较差有关

九、其他基因

1.myc基因最早在B、T淋巴细胞瘤、肉瘤、内皮瘤患者中发现myc基因的激活，后来发现小细胞肺癌、幼儿神经母细胞瘤的临床进展和myc基因表达扩增有关，而且多见于转移的肿瘤组织，目前myc基因蛋白标志主要用在判断肿瘤的复发和转移上

2.p53基因野生型p53是一种抑癌基因，它通过控制细胞进入S期控制细胞的分化，监视细胞基因组的完整性，阻止具有癌变倾向的基因突变的发生突变型p53基因编码的p53蛋白是一种肿瘤促进因子，它可以消除正常p53的功能，导致细胞转化或肿瘤形成p53基因突变主要是点突变，另有少量插入和缺失突变70%恶性肿瘤中存在p53基因的突变如肺癌、乳癌、肝癌、胃癌、卵巢癌、鼻咽癌、脑瘤、肉瘤、白血病和淋巴瘤等，分别存在相应的突变热点

3.nm23基因nm23基因是一种与恶性肿瘤转移有关的基因，人基因组中有两个nm23基因nm23-H1和nm23-H2,分别编码核甘二磷酸激酶NDPK的A、B两种亚基，分子量均为17kD这两种亚基随机地组合成等电点不同的系列同工酶，广泛存在于机体内NDPK通过参与调节细胞内微管系统的状态而抑制癌的转移在无转移鼠黑色素瘤细胞株中发现nm23基因的过度表达，nm23基因产物在转移性乳腺癌、结肠癌和前列腺癌中出现升高，被作为一种新的肿瘤转移标志。