总糖和还原糖的测定

总糖和还原糖的测定（3,5一二硝基水杨酸法）试验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类同时，糖也是我们维持机体运动所必不行少的物质，没有了它，就没有了能量的来源我们这次便走进试验室探究糖类的奇妙本次试验我们将用

3.5一二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量本次试验中，我们除了要驾驭还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧还原糖的测定是糖定量测定的基本方法还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不肯定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸在肯定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖昔键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以

0.9

一、试验目的

1、驾驭还原糖和总糖的测定的基本原理

2、学习比色法测定还原糖的操作方法

3、学习分光光度法测定的原理和方法

二、试验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不肯定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸在肯定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苔键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以

0.9

三、材料与器具的打算试验材料面粉试验试剂⑴、Img/mL葡萄糖标准液精确称取80C烘至恒重的分析纯葡萄糖lOOmg,置于小烧杯中，加少量蒸镭水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸储水定容至100mL,混匀，4℃冰箱中保存备用

2、3,5-二硝基水杨酸DNS试剂将

6.3g DNS和262mL2M NaOH溶液,加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸镭水定容至1000mL,贮于棕色瓶中备用

3、碘-碘化钾溶液称取5g碘和10g碘化钾，溶于100mL蒸镭水中

4、酚猷指示剂称取

0.1g酚醐，溶于250mL70%乙醇中

5、6MHe1和6M NaOH各100mLo试验器材1具塞玻璃刻度试管20mLX112大离心管50mLX23烧杯100mLXI4三角瓶100mLXI5容量瓶:100mLX36刻度吸管ImLXl；2mLX2；10mLXI7恒温水浴锅8沸水浴9分光光度计分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照耀下，产生了对光汲取的效应，物质对光的汲取是具有选择性的各种不同的物质都具有其各自的汲取光谱,因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被汲取而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有肯定的比例关系，也即符合比色原理Lambert-Beer!s law数学表达式A=lgl/T=KCLA为吸光度T为透射率，是投射光强度比上入射光强度C为吸光物质的浓度L为汲取层厚度K为汲取系数物理意义是当一束平行单色光垂直通过某一匀称非散射的西光物质时，其吸光度A与吸光物质的浓度C及汲取层厚度L成正比.

四、试验步骤器材与材料打算完毕之后，便起先依据以下步骤进行试验首先，制作葡萄糖标准曲线取6支20矶具塞刻度试管编号，按下表分别加入浓度为luig/mL的葡萄糖标准液、蒸福水和3,5-二硝基水杨酸DNS试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液_012345标准葡萄

00.

0.

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81.糖溶液\ml2460蒸■水\ml

2.

1.

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1.

1.

21.08640DNS试剂

1.

1.

1.

1.

1.

51.\ml55555接下来，提取还原糖精确称取

2.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸储水调成糊状，然后加入50mL蒸储水，搅匀，置于5TC恒温水浴中保温20niin,使还原糖浸出过滤，将滤液收集在100nli容量瓶中，用蒸储水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液紧接着，提取总糖精确称取

1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸镭水及10mL6MHe1,置沸水浴中加热水解30min水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚猷指示剂，用6mol/LNaOH中和至微红色，用蒸馅水定容在100mL容量瓶中，混匀将定容后的水解液过滤，取滤液10mL,移入另一100mL容量瓶中定容，混匀，作为总糖待测液然后，取4支20mL具塞刻度试管，编号，

6、

7、

8、9,按下表所示分别加入待测液和显色剂他口管万还原糖待总糖待测蒸储水ml l.\S测液ml液mlml

60.

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51.

570.

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58111.

59111.5最终，用分光光度计进行比色先将机器打开预热20分钟选择540nm的波长再按MODE键切换到T,将黑体放入光路中，合上盖，0键校零再按MODE键切换到A,将倒入比色皿中的0号液体放入到光路中，合上盖，100键校零再将倒入比色皿中的各号液体放入到光路中即可测得光密度值

五、留意事项

1、每次测量前检查，检查波长是否所需值；

2、比色皿应拿磨砂面，不行用手接触透光面；

3、比色皿在盛装样品前，应用所盛样品冲洗两次，装样量为比色皿的2/3容积；

4、向比色皿加样时，若样品流到比色皿外壁时，应用滤纸点干，切忌用滤纸擦拭，以免比色皿出现划痕；

5、测量结束后应用蒸镭水清洗比色皿，清洗干净后放起.

六、数据处理试234567891管光密度

0.

00.

10.

10.

20.

30.

00.000值nm

25328697247782、

71、73葡萄糖标准曲线y=

0.3557x-

0.0172X查曲线所得葡萄摭亳克数提取液总体积/测定时取用体积〃X1DDd还原搪N―样品亳克数-X查曲线所得水解后还原糖亳克数稀释倍数，总精Ji-----------------------------------------------------XD,9X1唧样品毫克教〃依据公式可以算得还原糖为

0.27mg总糖为

2.07mg.则还原糖百分含量二毫克数X提取液总体积测定时取用体积+样品的质量=

13.5%总糖的百分含量二毫克数X稀释倍数小样品质量义

0.9=

18.63%总结本试验测得还原糖的含量为

13.5%,总糖含量为

18.63%,R2为

0.9739,试验数据还是略有偏差

七、误差分析

1、在配置制作葡萄糖标准曲线的溶液时，运用移液管移动液体，由于不够娴熟，所以并没有精确移动相应的液体量，导致R2偏低2在提取还原糖时，由于我们采纳的是最简洁的棉花过滤方法，这个方法可能导致有很多还原糖被奢侈，导致所测还原糖含量偏低此外，我们也须要留意，在标准的试验中，标准曲线的制定与样品含糖量必需同时进行，一起显色和比色

八、体会这次试验我们学习了植物总糖、还原糖的提取鉴定及其含量测定，驾驭了还原糖和总糖测定的基本原理，同时也对比色法测定还原糖有了肯定了解并且还驾驭了运用分光光度计测定还原糖和总糖的光密度值收获很多，试验中要求每只试管同时进行水浴加热加热时间视试验原料而定，严格限制时间分光光度计是溶液中的物质在光的照耀下产生了对光汲取的效应，物质对光的汲取是具有选择性的我们就利用了这个原理，测定了还原糖和总糖的含量，而且绘制了葡萄糖标准曲线试验很有意思，接触新的仪器也让我很快乐，希望以后也会这么开心

九、参考文献吴兰老师PPT《生物化学试验》第三版百度文库

十、感谢吴兰老师指导同组成员朱帅、周洁、曹冲。