开题报告_345

基因启动子的引物设计及体外扩增ATDPBF3专业生物工程学号11560228姓名王晶晶指导老师马建忠职称教授

一、研究的目的、意义

二、启动子（promoter）是一段供RNA聚合酶特异性识别、结合和起始转录的DNA序列，它位于基因的上游其长度因生物种类而异,一般不超过200bp一旦RNA聚合酶定位并结合到启动子序列上，即可启动转录o启动子作为基因表达调控的一种重要的的顺式元件，它具有如下特征

①序列特异性，在启动子的DNA序列中，通常含有几个保守的序列框，序列框中碱基的变化会导致转录启动的滞后和转录速度的减慢

②方向性，启动子是一种有方向性的顺式调控元件，在正反两种方向中只有一种具有启动功能

③位置特性，启动子只能位于所启动转录基因的上游或基因内的前端

④种属特异性，原核生物的不同种、属，真核生物的不同组织都具有不同类型的启动子但亲缘关系越近的两种生物，其启动子通用的可能性也越大高等植物启动子属于II型启动子，即mRNA基因启动子植物基因工程中常用的启动子按其功能及作用方式可将它们分为3类:组成型启动子、诱导型启动子、组织特异型启动子植物基因启动子中包含多种重要的顺式作用元件，在转录水平上参与调控下游相应基因表达，从而使植物能够抵御外界环境胁迫因此，研究启动子功能对于了解生物生长发育、探讨生物适应环境的机制及实现外源基因在转基因生物中的高效表达等均有重要意义

三、国内外研究概况目前，在启动子研究方面，可以说已取得了重大进步，启动子序列克隆的多种方法促进了启动子分离技术的突飞猛进，各类型的启动子不断得到分离,为基因工程的进一步研究奠定了坚实的基础另一方面，启动子的功能分析多年来都是通过实验进行，随着人类基因组测序工作的完成，利用生物信息学方法来预测启动子的功能属性得到广泛应用；然而，一些生物信息学工具根据实验获得的转录因子结合特性来描述启动子的序列特征，并以此作为启动子预测的依据，实际效果并不十分理想，遗漏和假阳性都较严重因此，启动子功能分析的方法仍需进一步完善启动子作为一种基因表达的重要顺式作用元件，从1983年第一株转基因植物问世以来，一直是基因工程中的研究热点，随着生物学、遗传学和分子生物学的不断发展，将会有更多的启动子得到分离和分析，并应用于基因工程

三、实验实施方案的确定

3.

1.仪器、药品仪器DYY—11型电泳仪、移液枪（

10、

100、1000uL,Eppendorf）、枪头、Ep管、DNA扩增仪、电泳系统、一次性塑料手套、紫外透射反射仪、电热恒温水浴锅、高速离心机、高压灭菌锅药品拟南芥幼叶、RNaseA.dNTP.Taq聚合酶、DNA Marker.琼脂糖、澳化乙锭、无菌水、6XDNA LoadingBuffer.10XTBE、液氮、醋酸钠、TE缓冲液、B-筑基乙醇、酚氯仿异戊醇、异丙醇、70%乙醇、无水乙醇

3.

2.实验方案

①用NCBI数据库查找拟南芥DPBF3基因的相关信息，找到该基因的启动子

②选择基因的启动子区，分析后设计引物

③用CTAB法提取拟南芥基因组DNA

④用PCR扩增启动子区，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳

四、预期目标

五、用NCBI查找DPBF3基因的相关信息，找出启动子区并设计引物，用PCR扩增DPBF3基因的启动子区，将扩增产物与PCAMBIA1301载体体外连接后，将表达载体转化入农杆菌，再侵染拟南芥，判断启动子区可以启动哪些部位基因的表达

六、实验进度安排起止日期周期实验内容

2014.

8.15-

2014.

8.22查阅、阅读相关文献资料，撰写开题报告

2014.

8.23-

2014.

8.25准备实验药品及器材

2014.

8.26-

2014.

8.引物设计PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳数据处理与分析、论文撰写与修改交毕业论文，准备论文简介和答辩材料

六、参考文献[

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