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学科评审组植物保护学教育厅编号__________________安徽省高等学校省级自然科学研究项目申请书点击这里填写项目名称微囊藻藻胆蛋白光活化杀虫剂的研究申请者黄禧所在单位安徽大学邮政编码230039通讯地址合肥肥西路号安徽大学龙河校区3电话传真申请日期年月日2024918您现在不能检查保护文档或打印文档，请按照以下步骤操作，请把Word宏的安全性设为〃中〃方法菜单-＞工具-＞宏-＞安全性-＞安全级，设置为〃中〃Word安徽省教育厅二一年制o
（4）果蝇在体实验将藻蓝蛋白混入培养基喂养果蝇，根据藻蓝蛋白可以被诱发产生荧光的特性，用荧光显微镜观测藻蓝蛋白在体内分布吸取情况，拟定给药时间；经光照解决后观测其对成虫、幼虫存活率及繁殖率影响
（5）针对几种实蝇，进行藻胆蛋白与饵料及荧光增敏剂的配方实验，在野外检测其杀虫效果
1.4拟解决的关键科学问题
1.5项目依据的技术原理，涉及文献、专利，或发明等L6国内外相关技术的研究、开发现状的介绍、分析；L7采用的现有成熟关键技术、已攻克的关键技术已攻克的关键技术微囊藻的采集季节、前期解决技术；藻胆蛋白的分离方法（专利正在申请中）；藻胆蛋白光敏杀虫剂的作用条件（专利正在申请中）
1.8预计项目完毕时计划解决关键技术及达成的技术性能指标计划解决关键技术藻胆蛋白规模化分离技术设备的优化藻胆蛋白光敏杀虫剂田间实行条件的优化藻胆蛋白可溶性粉剂达成的技术性能指标重要成份C型藻蓝蛋白，其发色团为藻蓝胆素（四口比咯结构的色基）相对分子质量:21KDo特性性吸取峰620nm,光谱纯度A620/A280不小于
1.5色谱纯度大于85%稳定性在pH为中性,40℃以下藻蓝蛋白稳定性良好，小鼠室内急性毒性实验，ID50大于8g/kg
2.拟采用的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析（字数不限，可加页）（产学研项目重要描述申报项目研究开发的内容及涉及的关键技术、关键问题的解决方案;技术路线描述涉及工艺流程图、产品结构图、框架图等）
2.1研究方法通过采用抽提、粗过滤、微滤、超滤脱毒、低温静置离心、真空干燥等提取纯化方法方法从微囊藻中提取藻胆蛋白，通过紫外可见分光光度计、电泳、HPLC方法检测其光谱纯度、分子量大小、藻蓝蛋白的含量及藻毒素的含量.L藻胆蛋白的提取
2.藻胆蛋白的检测与定量3）电泳检测藻胆蛋白分子量4）溶解度检测
（6）培养细胞的PDT实验
3.自然光条件下的果蝇光敏作用实验
4.藻胆蛋白对小鼠的毒性实验
5.1技术路线A.微囊藻藻胆蛋白分离技术线路及工艺流程收集富藻水藻水I分离（旋振筛）清水------------藻地干*（塑料大棚挂晒）制%（粉碎机）破%、浸提（磷酸缓冲液）沉淀（杂质）——离心（离心机）◄上清液I沉淀◄------------过猛微米平板过滤器）上落液超滤（50KD超滤膜装置）过滤液◄--------藻原蛋白浓缩液藻毒素检测（HPLC）^i----------------------a藻胆蛋白得率检测▼干燥成粉（冷冻干燥机）B.微囊藻藻胆蛋白光活化杀虫效果实验藻胆蛋白干粉理化/质测定小鼠急性毒理实验（分子量、光谱性质分析、C-PCAPC的含量）昆虫细胞及PDT实验细胞克制率（MTT法）细胞学分析（荧光显微镜、电境）细胞周期、凋亡分析（流式细胞仪）果蝇在体PDT实验藻蓝蛋白在各组织中分布（荧光显微镜）成体、幼体生存率检测成体繁殖率检测PDT对器官组织的影响（电镜）实蝇杀虫力配方的研制实蝇饵料的选择藻胆蛋白与实蝇饵料的配比几种不同实蝇光活化杀虫效果实验关键技术、关键问题的解决方案
2.3可行性分析本课题组与中科院海洋所王广策研究员课题组长期合作，参与过有关肿瘤光动力治疗的藻胆蛋白光敏剂的青年海洋’863,项目、国家科技部21世纪“创新药物博士基金”、国家高技术研究发展计划（863计划）“藻胆蛋白克制与治疗肿瘤及大规模高纯度制备工艺的研究工本课题组已纯熟地掌握了C-PC分离纯化、鉴定及光谱分析、C-PC PDT作用的细胞学实验、动物模型在体实验及抗体制备技术；已建立了生物活性功能检测平台，涉及抗肿瘤、抗氧化、提高免疫力、促细胞增殖等活性检测目前正参与巢湖蓝藻水专项的研究，已收集了不同季节的微囊藻，并对C-PC进行了分离纯化，掌握了藻毒素的去除方法，并用MTT法对微囊藻C-PC作了体外PDT克制昆虫细胞生长实验项目组成员李玉成专家在巢湖蓝藻的综合运用方面有着丰富的经验，承担着国家水专项的重大项目“巢湖市水源区污染物来源和迁移及对水体影响的研究”，对该项目的完毕提供了有力的支持安徽陆野农化有限责任公司是国家发改委农药定点生产厂家，市、区政府部门重点扶持公司，是以加工和复配为主的农药、肥料生产公司，被授予亳州市农也产业化龙头公司公司拥有先进的生产、检测设备，依托安徽省化工研究院、河南省农科院、安徽大学生命科学学院等科研单位，不断研制开发新产品,目前已发展成拥有三大系列十多个品种，有2项自主研发的产品通过了成果鉴定
（1）
0.5%辣椒碱水乳剂
（2）
4.5%高效氯氟菊酯水乳剂因此，本项目是在原有抗肿瘤光敏剂良好的工作基础上开展抗虫光敏剂这种新型绿色农药的研究，方法成熟，项目组成员基础扎实，技术全面，合作公司较强的产品研发与市场运作能力，完全有能力完毕本项目的研究目的3•本项目的创新之处（论证须充足，字数不限，可加页）（产学研项目按理论创新、应用创新、技术创新、工艺创新、结构创新等方面的创新点描述尽也许用实验数据对技术创新性进行描述，要有数据分析、对比，要有新旧技术、结构或工艺对比）
3.1理论创新
4.2应用创新
3.1技术创新
4.年度研究计划及预期进展（产学研项目填写产品化和市场化计划安排）
2023.1-—
2023.6藻胆蛋白的分离纯化方法的优化
2023.7-—
2023.12不同的时间段从巢湖采集蓝藻（只有每年7-10月可以采集）分析光照强度对铜绿微囊藻细胞中藻藻胆体的密度分布及藻毒素含量的影响
2023.1—
2023.6藻胆蛋白干粉理化性质测定，小鼠急性毒理实验昆虫细胞株PDT实验作为光敏剂的C-PC克制昆虫细胞生长效果的检测（细胞水平）对PDT作用后细胞机理的分析（细胞周期、细胞形态）
2023.7—
2023.12果蝇PDT在体实验藻蓝蛋白在果蝇体内分布及代谢规律的研究
2023.1—
2023.6实蝇杀虫剂配方的研制实蝇饵料的选择，藻胆蛋白与实蝇饵料的配比几种不同实蝇光活化杀虫效果实验
2023.7—
2023.12申请发明专利撰写研究论文
5.预期研究成果（产学研合作项目填写项目完毕后产品技术性能参数）
1.研制出微囊藻藻胆蛋白关活化杀虫粉剂的配方
2.完毕微囊藻藻胆蛋白关活化杀虫粉剂的制备工艺流程
3.申请发明专利2项，在国内外学术刊物发表2-3篇研究论文，培养研究生2-4名
三、研究基础
1.与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩（产学研项目还要填写试用单位意见、是否通过技术检测、鉴定，项目曾经获得的其它计划支持情况可提供实验室样品检测数据）
1.2藻蓝蛋白光敏剂抗肿瘤作用有关藻胆蛋白亚基抗肿瘤特性的研究为本实验室原创性科研成果的积累
1.3相关论文被引用及成果获奖情况
1.4本课题组与中科院海洋所课题组合作研究成果
1.5藻毒素对体外培养细胞生长的影响（预实验结果）
1.6微囊藻藻蓝蛋白对果蝇细胞的PDT实验陆野农化在杀虫剂方面的研究成果陆野农化有限责任公司研发能力陆野农化有限责任公司始建于1998年，为国家发改委、农业部农业部肥料定点生产公司，位于中国历史文化名城一亳州亳州是曹操、华佗的故乡，是全国最大的中药材集散地，江泽民主席曾题词“华佗故里，药材之乡”公司自建厂以来，在各级领导的关怀和大力支持下，短短几年公司规格迅速扩大，被安徽省乡镇公司局授予“科技先导型公司”，通过几年发展，公司由建厂时单一品种，发展成拥有三大系列十多个品种，以加工和复配为主的农药、肥料生产公司正在制备与销售的产品有20%乙酰甲胺磷EC.40%辛硫磷EC.480g/L毒死螂EC.18g/L阿维菌素EC.5%氟铃胭EC
4.5%高效氯氟菊脂EC.25g/L高效氯氟氟菊脂EC.80%敌敌畏EC.3%辛硫磷GR、20%三嗖磷EC.25%睡嗪酮异丙威WP、
4.5%高效氯氟菊脂EW、25g/L联苯菊脂EC、氨基酸水溶肥料与其他公司合作经营的产品有25%氧乐果•鼠戊菊脂、
12.5%井冈•蜡芽菌、3%高氯•毗虫麻、9%氟戊•灭多威、10%高氯•氧乐果、10%毗虫咻•灭多威、40%氧乐果、5%毒死蟀颗粒剂
2.已具有的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径
2.工作条件安徽大学生命科学学院承担了“211”三期建设项目“江淮流域生态安全与资源可连续运用”，拥有安徽省生态工程与生物技术重点实验室、安徽省中药研究与开发重点实验室、我院分子及细胞生物学实验室可运用的仪器有高效液相色谱仪、气相色谱仪、超声波细胞粉碎仪层层析、超滤设备；多功能电泳仪、柱层析分离设备、超速冷冻离心机、冷冻干燥设备、快速蛋白纯化系统、快速凝胶成像系统；紫外分光光度计、荧光分光光度计、酶标仪、荧光显微镜；气候培养箱、动物细胞培养室安徽大学现代技术中心还拥有电子显微镜、制备液相色谱、核磁共振仪、红外光谱仪等仪器设备安徽陆野农化技术中心是公司自主创新的研发基地和人才培养基地，具有农药成分分析所需的仪器设备，重要涉及光谱分析类等离子体发射光谱、原子吸取分光光度计、中红外光谱仪质谱分析类高效气质联用仪、高效液相色谱仪、液质联用仪图谱分析类薄层扫面仪水分检测类水分测定仪样品解决与制备类旋转蒸发仪、干燥设备、蒸储水制备装置、分析天平、、粉碎机等可运用的外单位仪器设备流式细胞仪、激光共聚焦显微镜中国科技大学生命科学学院分子生物学实验中心提供尚缺少的实验条件:
3.申请者和项目组重要成员的学历和研究工作简历近期承担的与本项目有关的各级科研项目、发表与本项目有关的重要论著和获得学术奖励情况及在本项目中承担的任务
3.申请人简介黄蒋女，博士，专家，硕士生导师1983年7月毕业于安徽大学生物系动物专业，同年留校任教.曾在德国海登堡大学进修发育生物学，回国后从事细胞生物学与发育生物学的教学与科研工作，中国科学技术大学生命科学学院攻读在职博士
2023.7—
2023.7美国Emory大学药理系博士后现为安徽省科学技术协会委员、安徽省细胞生物学学会常务理事、安徽省中青年学科带头人培养对象，安徽省首届陈香梅教育奖获得者，安徽大学生命科学学院细胞与分子生物学实验室主任，细胞生物学硕士点负责人发表的相关论文已完毕的研究项目获奖情况1“藻胆蛋白色基多肽光敏剂抗肿瘤特性的研究”获2023年度安徽省高校优秀科技成果三等奖K2023-3-5-1第一名2海洋生物活性蛋白和多肽的规模制备及其药源生物的快繁技术国家海洋局海洋创新成果二等奖B,第七名在本项目中承担的任务项目的设计与执行陆合文，工程师，总经理安徽省化工研究院工程师，安徽陆野责任有限公司总经理毕业于自主开发的研究项目有
（1）
0.5%辣椒碱水乳剂2023-4通过成果鉴定，成果登记号本项目属于新型绿色生物农药和农药新剂型的研究辣椒碱从辣椒中提取，本产品为稳定乳状液，它是将辣椒碱原药、高渗剂睡酮、乳化剂、少量溶剂乙醇和水在高剪切搅拌的情况下形成的一种水包油型高分散度、稳定的均相制剂由于溶剂是乙醇，无其它有毒的有机溶剂，使得该产品为更加绿色环保的水性化制剂产品，对环境无污染，是一种抱负的无公害绿色农药
0.5%辣椒碱水乳剂重要用于蔬菜、棉花、果树等作物害虫的防治，防效好，持效期长，杀虫谱广，使用安全，有助于保护环境，对天敌安全，也可其他作物害虫重要技术指标辣椒碱含量，%
0.5±
0.07pH值范围
4.0~
7.0倾倒性倾倒后残余物，%W
3.0洗涤后残余物，%W
0.5乳液稳定性（稀释200倍）合格持久起泡性（Imin后）,mL W20低温稳定性合格热贮稳定性合格该产品使用方便，持效期长，有助于环境保护，经济、社会和生态效益显著，具有较好的推广应用刖景
（2）
4.5%高效氯氟菊酯水乳剂（2023-4通过成果鉴定，成果登记号）本项目属于拟除虫菊酯农药新剂型、新品种的研究，其产品为稳定乳状液，它是将高效氯氟菊酯原药、麻醉剂、高渗剂曝酮溶于少量有机溶剂所得到液体分散在水中形成的一种水包油型高分散度、稳定的均相制剂
4.5%高效氯氟菊酯水乳剂重要用于蔬菜、棉花、果树等作物害虫的防治，防效好，持效期长，杀虫谱广，使用安全，有助于保护环境，对天敌安全，也可其他作物害虫重要技术指标高效氯氟菊酯总含量，％
4.5±
0.4pH值范围
4.0~
7.0倾倒性倾倒后残余物，%W
3.0洗涤后残余物，％W
0.5乳液稳定性（稀释200倍）合格持久起泡性（Imin后）,mL W20低温稳定性合格热贮稳定性合格本成果配方合理，剂型新奇，工艺先进，居国内领先水平产品使用方便，持效期长，有助于环境保护,具有较好的推广应用前景刘凤才OOOOOOOOO李玉成，男，博士，专家，硕士生导师李玉成，男，博士，专家，硕士生导师*论文作者.题目.刊名.年份.卷（期）.页码填表说明
一、填写申请书前，请先查阅安徽省教育厅科研项目申请办法及规定申请书各项内容要实事求是，逐条认真填写表达要明确、严谨，笔迹要清楚易辨外来语要同时用原文和中文表达第一次出现的缩写词，须注出全称
二、申请书打印时用纸，于左侧装订成册报送原件一份A4
三、封面右上角学科评审组由申请者选择填写，教育厅编号由教育厅统一填写申请者承诺我保证上述填报内容的真实性假如获得资助，我与本项目组成员将严格遵守安徽省教育厅科研项目管理有关规定，切实保证研究工作时间，按计划认真开展研究工作，准时报送有关材料申请者（签章）年月日2024918专著作者.书名.出版者.年份
四、产学研合作项目可行性报告（本节可单独撰写，作为申请书附件材料）
1、项目的产业化基础（分段论述，字数不限，可加页）
（1）合作公司的技术创新、生产和销售的能力，以及相关领域研发基础和研发队伍情况；安徽陆野农化有限责任公司是国家发改委农药定点生产厂家，市、区政府部门重点扶持公司，现有职工125人，其中管理和工程技术人员20多人公司拥有先进的生产、检测设备，依托安徽省化工研究院、河南省农科院、安徽大学生命科学学院等科研单位，不断研制开发新产品通过几年发展，公司由建厂时单一品种，发展成拥有三大系列十多个品种，以加工和复配为主的农药、肥料生产公司公司的重要产品有
2.5%高渗高效氯氟菊酯乳油、40%高渗辛硫磷乳油、3%辛硫磷颗粒剂、5%氟铃服乳油、含氨基酸水溶肥料等目前，公司产品已远销河南、河北、江苏、山东、重庆、广东、江西、湖南等10多个省市自治区，深得广大经销商和农民的信赖和好评，公司生产呈现勃勃生机被授予亳州市农业产业化龙头公司目前已有2项自主研发的产品通过了成果鉴定
（1）
0.5%辣椒碱水乳剂
（2）
4.5%高效氯氟菊酯水乳剂安徽陆野农化有限责任公司正以“开拓、进取、求实、创新”的精神，在政府有关部门的大力支持下，与时俱进，抓住机遇，加速技术改造和产品结构调整创新，力争发展成为拥有杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂和肥料五大系列二十多个品种的科技型公司，为安徽农药及肥料工业的发展、为农业增产增收做出应有的奉献
（2）双方合作基础、已完毕的研究开发工作及中试情况和鉴定年限；安徽陆野农化有限责任公司与安徽大学生命科学学院在巢湖水化蓝藻作为生物农药的开发运用方面的合作已有一年多时间，目前已基本完毕了微囊藻藻胆蛋白对果蝇光活化杀虫效果实验、小鼠的急性毒理实验、巢湖蓝藻的采集、解决方法、藻胆蛋白分离方法的实验室阶段的研究，已写成2项专利正在申请中在中试方面，正在进行微囊藻藻胆蛋白分离纯化设备的定制及生产工艺流程的设计；在对实蝇光敏杀虫剂研制方面，正在联合省农科院的专家开展诱捕饲料配方及实蝇田间实验的研究
（3）技术或工艺特点以及与现有技术或工艺比较所具有的优势；A.在微囊藻藻胆蛋白分离方法方面传统的方法一般涉及反复冻融，冷冻离心、硫酸钱盐析、透析、上柱脱盐，多次梯度洗脱、冷冻干燥等，工艺繁琐、得率低、成本高、并且无法大量制备，严重限制了藻胆蛋白制品的推广使用本项目正在研制的方法采集微囊藻，晒干粉碎后成干藻粉，加入磷酸盐缓冲液搅拌抽提，用板状初过滤弃沉淀，然后将滤液依次通过2um和
0.45Dm微滤器进行微滤解决，得到澄清的藻提取液，使用超滤装置截留分子量lOkDa截留下的藻胆蛋白溶液添加等体积蒸储水后继续超滤，如此反复多次,除去微囊藻毒素；浓缩的藻胆蛋白溶液冷冻干燥后得到蓝色的藻胆蛋白干粉.B.藻胆蛋白光敏杀虫剂作用方面焰红染料B及其同荧光素钠混配的农药制剂Sure dye已在美国获得专利保护Sure dye饵制剂已在危地马拉被用于防治地中海实蝇目前赤薛红B作为杀家蝇幼虫的药剂已在美国环保局获准登记,实现了商品化对服食赤薛红B500-2023mg/mL的实蝇光照6h后，死亡率随着给药剂量的增长和光照时间的延长而增长用自然光对果蝇所做的实验结果显示在光照强度为40J/cm2,有效作用浓度范围为250ug/nil-1000ug/ml,小鼠的急性毒理实验的安全剂量为小于或等于5g/kg,致死剂量为大于或等于8g/kg藻胆蛋白溶液因此，藻胆蛋白光敏剂的有效浓度是焰红染料B的千分之一,且安全有效4关键技术的突破对行业技术进步的重要意义和作用，对相关产业或行业的影响、对经济社会可连续、协调发展的影响，与本地区优势的关联限度、对本地区优势资源综合运用或优势产业技术提高的影响A.改善后的藻胆蛋白提取工艺省去了使用大量的硫酸镂沉淀蛋白的环节，利于环保及规模化生产B.在藻胆蛋白光敏杀虫剂对环境影响方面尽管许多染料，如焰红染料B对蚊蝇有很强的杀虫活性，但是它们对有脊椎动物的毒性却不尽如人意一种家蝇田间收集品系在摄食浓度增长、光接触5小时选择压力下,代后抗性呈现48倍而天然产物来源的藻胆蛋白光敏剂自身是植物叶绿体中捕光天线蛋白，对动物、植物比较安全，在实蝇后代证明不会产生抗性OOOOOOOOOOC.与本地区优势的关联限度、对本地区优势资源综合运用或优势产业技术提高的影响产品投放市场后，可以取代部分传统化学农药，有助于环境保护和人体健康，对调整我国农药产品结构、剂型结构，发展我国生物农药水乳剂产业，促进农药行业技术进步和产品升级换代，发展生态农业和绿色食品，提高农产品国际竞争力，促进国民经济发展，保护环境等，均具有十分重要的意义，社会效益和生态效益显著
2.项目市场概述（分段论述，字数不限，可加页）
（1）项目产品国内外市场容量、发展状况、发展趋势；杀虫剂是防治病虫灾害、保证农业丰收的重要手段长期以来，由于大量使用化学农药进行害虫控制，不仅导致了对生态环境的污染，也使得害虫的抗药性大大增强，导致化学农药用量进一步增长为解决这一问题，人们探索合理运用生态的新方法来有效控制害虫因此在实际应用当中，不易产生残留及生物富集现象，并且由于其成分相对复杂，害虫不易产生抗性，是化学农药较为抱负的代替品所谓光活化杀虫剂即为在无光照条件下对害虫无活性或活性很低，但在日光或特定波长的人工光（特别是近紫外光）照射下杀虫活性大幅度增长的一类物质目前，这类杀虫剂有望成为传统化学杀虫剂的替代物光活化杀虫剂在可见光照射下迅速失活，加上它们在黑暗条件下缺少明显的毒性，因而减少了它们对环境产生重要影响的风险所以，从安全和环境方面考虑，光活化杀虫剂不仅提高了杀虫剂的药效，并且避免了在环境中的持久残留，符合无公害农药所规定的环境和谐性；并且由于光活化农药产生的活性氧在细胞上的生化作用位点较多，害虫不易产生抗性，同时也正是这种特殊的作用方式，决定了它与传统农药之间不会产生交叉抗性
（2）产品的细分市场定位，国际国内同类产品技术性能比较优势；目前，国内市场高效、低毒、低残留农药已成为用户首选的主导产品生物农药是无公害农产品生产的重要保证农业部第274号公告，2023年6月30日起，不得在市场上销售含高毒有机磷农药的混配制剂我国在淘汰高毒农药之后，必将留下巨大的市场空间，为高效、低毒、安全的生物农药新剂型提供了良好的发展机遇近年来，随着环境保护和绿色食品的发展，对生物农药的需求越来越大藻蓝蛋白是螺旋藻中所具有的一种重要的捕光色素蛋白，在辅助激光照射后产生活性氧等自由基，每2-3个自由基可杀伤1个细胞由于其安全性高，且无痛无副作用，其作为“绿色农药”及抗肿瘤光敏剂的研发意义重大
（3）项目实行风险及应对措施；OOOOOOOOOOOOO
（4）市场和社会效益预测水华蓝藻藻胆蛋白蛋白每吨成本价为46020元，根据市场情况，初拟定出厂价为6万元/吨，每吨利税4350元如以年产销1000吨计，则年新增销售收入为963万元，利税435万元左右，经济效益和社会效益十分显著
3.产业化方案分段论述，字数不限，可加页.1公司现有的生产条件；安徽陆野农化技术中心具有农药成分分析所需的仪器设备，重要涉及光谱分析类等离子体发射光谱、原子吸取分光光度计、中红外光谱仪质谱分析类高效气质联用仪、高效液相色谱仪、液质联用仪图谱分析类薄层扫面仪水分检测类水分测定仪样品解决与制备类旋转蒸发仪、干燥设备、蒸储水制备装置、分析天平、、粉碎机等OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO2需要完善的生产条件和新增设备、仪器选型；本项目所需要的设备烘干机、板状过滤设备、筒状超滤设备、粉碎机、冻干机3项目的产能规模、建设的重要内容及重要技术经济指标、建设地点；OOOOOOOOOOOOOOOOO4项目实行与进度计划安排、建设期的组织管理等OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO合作公司所在市级科技管理部门审核意见杀虫剂是防治病虫灾害、保证农业丰收的重要手段长期以来，由于大量使用化学农药进行害虫控制，不仅导致了对生态环境的污染，也使得害虫的抗药性大大增强光活化杀虫剂即为在无光照条件下对害虫无活性或活性很低，但在日光或特定波长的人工光照射下杀虫活性大幅度增长的一类物质从安全和环境方面考虑，光活化杀虫剂不仅提高了杀虫剂的药效，害虫不易产生抗性，并且避免了在环境中的持久残留，符合世界农药剂型发展方向，并符合当前《产业结构调整指导目录》亳州为全国著名的“中药材基地”，在中草药种植与栽培过程中更需要安全环保的“绿色农药”来保障种植的中药材质量微囊藻藻胆蛋白光敏杀虫剂的研究，无论是对于水华蓝藻的变废为宝，还是“绿色农药”的研制都具有重要的意义安徽陆野农化有限责任公司是国家发改委农药定点生产厂家，市、区政府部门重点扶持公司，被授予亳州市农业产业化龙头公司公司拥有先进的生产、检测设备，依托安徽省化工研究院、河南省农科院、安徽大学生命科学学院等科研单位，不断研制开发新产品现已发展成拥有三大系列十多个品种，以加工和复配为主的农药、肥料生产公司该产学研合作将会促进我市生物农药的发展批准安徽陆野农化有限责任公司参与申请该产学研合作项目单位负责人（签章）单位（公章）
五、经费预算支出科目金额（万元）计算根据及理由
1、合计
3.
572、科研业务费
0.65学术交流车旅费、专家评审费
3、实验材料
2.28分离基质、实验动物、试剂耗材，细胞株
4、仪器设备费
0.50水、电费、仪器维修费
5、实验室改装费
0.
006、协作费
0.14测试费
7、项目实行费
0.357%科研管理费
8、其他
1.08研究生劳务费3人x3年xO12万/人/年注预算支出科目按下列顺序填写
1、科研业务费；
2、实验材料费；
3、仪器设备费；
4、实验室改装费；
5、协作费；
6、项目实行费
八、推荐意见
六、申请者正在承担的其他项目（各厅局、省部委级科研项目的名称及编号、任务来源、起止年月、负责或参与以及与本申请项目的关系等情况）
七、申请者承担（负责或参与）教育厅科研经费项目的情况批准号项目名称起止年月负责或参与进展或完毕情况2023KJ087A
2023.1—负责人已完毕重点项目藻蓝蛋白光敏剂的肿瘤-
2023.12成果证书（08-559-01）靶向性研究（主持）（不具有高级专业技术职务的申请者，须有两名具有高级专业技术职务的同行专家推荐推荐时，请认真负责地介绍申请者及其项目组成员的业务基础、研究能力、科研态度及研究条件等项目成员不能做推荐者）推荐者（签章）所专业技术职务专长在单位所在单位推荐者（签章）所专业技术职务专长在单位所在单位项目名称微囊藻藻胆蛋白光活化杀虫剂的研究A、重大项目B、重点项目C、一般项目D、自筹经费项目类别BE、专项研究任务是否产学研项目否是、否学科2106060研究类型B A、基础研究B、应用基础研究C、应用研究负责人姓名黄蓿性别女民族汉出生日期1963-02行政职务实验室主任专业职务专家研究专长细胞生物学最后学历博士研究生最后学位博士担任导师硕导起止年月2023-01至2023T2电子邮件工作单位安徽大学联系电话通讯地址合肥肥西路3号安徽大学龙河校区邮政编码230039重要参与者点击添加参与者性别出生日期姓名专业职务研究专长学历学位工作单位签字安徽陆野农化责陆合文男1969-07工程师农药配方大学本科学士任有限公司博士研究安徽大学资环学李玉成男1963-02专家环境学博士生院大学本科安徽陆野责任刘凤才男1977-09工程师提取工艺学士有限公司研究实习员细胞生物学硕士研究安徽大学生命科汪宇男1987-07学士生学学院研究实习员硕士研究安徽大学生命科武子涵女1988-01生物技术学士生学学院
九、申请者所在单位及合作单位的审查与保证申请者所在单位学术委员会的审查意见（涉及对项目的意义、特色和创新之处及申请者的研究水平与学风签署具体意见）
2、合作单位的审查意见与保证批准参与合作研究，保证对参与合作研究人员时间及工作条件的支持、督促其按计划完毕所承担的任务需要说明的其它问题无合作单位公章年月日申请者所在单位领导的审查意见及保证已按填报说明对申请人进行了资格审查，对申请书内容进行了审核，批准学术委员会的审查意见，并保证在项目获得资助后做到以下几点1保证对研究计划实行所需的人力、物力和工作时间等条件给予支持2严格遵守教育厅项目管理、财务等各项规定3督促项目负责人和本单位项目管理部门按教育厅有关规定及时报送有关报表和材料需要说明的其它问题单位负责人签章单位公章年月日
十、学科评审组评审意见学科组人数实到人数表决结果赞成票反对票弃权票建议资助金额（单位万元）（表决未通过项目不填此栏）主审专家建议立项意见主审专家签字学科组长签字年月日年月日
1、选题不妥，不符合立项条件；
2、项目论证不充足或文献资料占有量局限性；
3、项目负责人精力或水平不适宜承担此项目；
4、项目组力量偏弱、人员结构不合理或分工不妥；
5、项目预期成果不明确或明显偏离实际；评
6、不具有完毕本项目所需的其他必备条件；审未
7、通过比较，本项目有更合适的承担人；通其它因素（请予以说明）过因素主审专家签字学科组长签字年月日年月日硕士研究安徽大学生命梁杰男1988-01学士研究实习员细胞生物学生科学学院预期成果申请发明专利2项，发表研究论文2篇以上申请经费（单位万元）5巢湖水华蓝藻95%以上是铜绿微囊藻，具有丰富的藻胆蛋白，重要含藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，其中，藻蓝蛋白（含四叱咯结构藻蓝素）占90%以上的比例，具有很强的光吸取与电子传递效率，具有光敏剂的优良特性研摘本实验拟通过抽提、粗过滤、微滤、超滤脱毒、低温静置离心、真空干燥究等提取纯化方法从干化解决后的微囊藻中分离出的藻胆蛋白，HPLC检测藻毒素内的含量，并对其光动力学杀伤效果（PDT）进行体外培养细胞学检测，流式细胞容仪进行细胞周期、凋亡分析；然后，将藻胆蛋白混入培养基喂养果蝇，经光照和解决后观测其对成虫、幼虫体长、存活率及繁殖率影响，荧光显微镜观测藻蓝意蛋白在体内分布吸取情况，电镜检测PDT对器官组织的影响，并与光活化染料义要赤鲜红B（EB）、四口比咯光敏剂Photofrin进行比较；在实蝇杀虫剂配方的研制方面，有针对性地选择实蝇饵料、并进行藻胆蛋白与实蝇饵料的配比及实蝇光活化杀虫效果实验，为微囊藻藻胆蛋白作为光敏杀虫剂这种绿色农药的应用奠定基础填写简表注意事项
一、简表内容将输入计算机，必须逐项认真填写，采用国家公布的标准简化汉字
二、凡选择性栏目，将相应提醒符A、B等之一填入该栏
三、部分栏目填写规定项目名称应准确反映研究内容和范围，最多不超过40个汉字（含标点符号）基础研究拟以结识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目的的研究活动应用基础研究指有广泛应用前景，但以获取新原理、新技术、新方法为重要目的的研究应用研究为某种具体实用目的提供技术管理、方法和途径的研究学科填报到三级学科申请经费以万元为单位，用阿拉伯数字表达，注意小数点起止年月起始时间从次年的1月算起，终止时间为完毕年度的12月重要参与者指在项目组内对学术思想、技术路线的制定、理论分析、对项目的完毕起重要作用的人员，本人应在申请书上署名研究内容和意义写出小于1000字的摘要
一、立论依据涉及项目的研究意义和必要性、国内外研究现状和发展趋势分析，并附重要参考文献及出处产学研项目还要填写对项目及产品基本情况介绍，涉及项目产品的重要应用范围、技术创新点、项目成熟限度、项目完毕时所处阶段等内容简介字数不限光活化杀虫剂是近几年发展起来的一种新型、高效、低毒农药，这类农药的特点是在生物环境中无所不在的自然因子一光和氧的作用下能极大地提高其毒杀害虫的效果它具有传统杀虫剂无法比拟的优点，因此被人们冠以“绿色农药”的美称焰红染料B及其同荧光素钠混配的农药制剂Sure dye已在美国获得专利保护Sure dye饵制剂已在危地马拉被用于防治地中海实蝇目前赤薛红B作为杀家蝇幼虫的药剂已在美国环保局获准登记，实现了商品化对服食赤群红B500-2023mgPmL的实蝇光照6h后，死亡率随着给药剂量的增长和光照时间的延长而增长尽管许多染料对蚊蝇有很强的杀虫活性，但是它们对有脊椎动物的毒性却不尽如人意一种家蝇田间收集品系在摄食浓度增长、光接触5小时选择压力下，代后抗性呈现48倍因此，天然产物来源的光敏剂研制越来越受到人们的关注本课题组的研究发现，来源于蓝藻的藻胆蛋白在辅助激光照射后产生活性氧等自由基，每2-3个自由基可杀伤1个细胞由于其安全性高，其作为“绿色农药”的研发意义重大
1.1水华蓝藻蛋白及藻毒素简介水华蓝藻是指水体的富营养化导致异常繁殖生长的浮游水生植物通常引起水华爆发的蓝藻是微囊藻水华微囊藻的重耍种类有铜绿微囊藻Microcystis,aeruginusa＞绿色微囊藻M.viridis、惠氏微囊藻M.wesenbergii、水华微囊藻M.f losaguae、害鱼微囊藻M.ichthyoblabe.其中,以铜绿微囊藻最为常见微囊藻中最常见的细胞内毒素为环肽类素的微囊藻毒素microcystin,MC,又称肝毒素目前，至少有60多种异构体被分离，存在最普遍、含量较高、毒性较大的有MC-LR、RR、YR,其中，L、R和Y分别为亮氨酸、精氨酸、酪氨酸［1］2023年WHO《饮用水卫生基准》中将水中MC-LR的安全限值暂定为1ug/I;同时，暂定微囊藻毒素允许日摄取量安全限值为
0.04ug/kg・d微囊藻中藻胆蛋白含量可达细胞干重的10%20%.藻胆蛋白是藻类中捕光色素蛋白的总称，其重要功能作为〜辅助色素提高光合作用电子传递效率Shirley Paps等人的研究表白微囊藻藻胆蛋白重要为C-PC和APC,其中，和PC占90%以上的比例沈强等人采用从昆明滇池机械收获的产毒水华蓝藻为材料，通过采用抽提、粗过滤、微滤、超滤脱毒截留分子量100kda、低温静置离心、真空干燥等提取纯化方法，从1kg微囊藻粉中制备纯度A620/A280高达
1.80的57g藻蓝蛋白干粉，小鼠急性毒性实验显示，纯化的藻蓝蛋白无毒性［2］；ID50大于
3.71g/kg,而对照原料藻粉的ID50为
0.10g/kg,并初步通过食品安全性毒理学评价程序
1.2藻蓝蛋白结构与色基的光谱特性
1.3藻胆蛋白光敏作用与活性氧
1.5四毗咯化合物的光动力灭蝇效果
1.7本项目的研究目的与意义本实验拟在不同的时间段采集微囊藻，通过对藻胆体密度分析及藻胆蛋白含量测定，拟定微囊藻的最佳采集时间；对经脱毒解决分离出的藻胆蛋白、多聚体及单体的稳定性、光谱特性、作为光敏剂在分子水平及细胞水平诱导产生的活性氧ROS的量进行分析，HPLC检测藻毒素的含量，并对其光动力学杀伤效果进行体外培养细胞学检测然后，将藻胆蛋白混入培养基喂养果蝇，根据藻蓝蛋白可以被诱发产生荧光的特性，用荧光显微镜观测藻蓝蛋白在体内分布吸取情况，拟定给药时间；经光照解决后观测其对成虫、幼虫体长、细胞分裂指数、存活率及繁殖率影响，ELISA方法检测藻毒素在果蝇体内的含量，并与光活化染料赤鲜红BEB、四咄咯光敏剂Phot丘in进行比较，为微囊藻的合理运用，以及作光敏杀虫剂、荧光探针等奠定理论基础重要应用范围藻胆蛋白可溶性粉剂可用于实蝇的防治技术创新点项目成熟限度项目完毕时所处阶段等内容简介参考文献
二、研究方案
1.总体思绪、研究目的、研究内容和拟解决的关键问题分段论证，字数不限，可加页产学研项目还要填写1项目依据的技术原理，涉及文献、专利，或发明等；2国内外相关技术的研究、开发现状的介绍、分析；3采用的现有成熟关键技术、已攻克的关键技术、待研究的关键技术等；4预计项目完毕时计划解决关键技术及达成的技术性能指标、实现的质量标准类型、标准名称指标要尽也许量化，该指标为验收考核指标
1.1总体思绪为有效地运用微囊藻藻蓝蛋白，本项目拟在不同的时间段收集蓝藻，拟定含高藻胆蛋白及低藻毒素采集的最佳条件；在藻蓝蛋白分离纯化过程中随着藻毒素的检测通过在细胞水平对藻胆蛋白光敏作用产生活性氧ROS的产率、对培养的果蝇细胞、幼体、成体的成活率、繁殖率的检测，找到藻蓝蛋白光敏剂克制果蝇生长的最佳剂量与光照条件通过对PDT作用后的细胞周期及形态学分析，了解微囊藻藻蓝蛋白光敏作用机理；运用藻蓝蛋白可被光激发而产生红光的特性，观测其在昆虫各组织代谢及分布规律；同时，选择几种实蝇进行藻胆蛋白与饵料的配方实验，为微囊藻藻胆蛋白光敏杀虫剂的大田实验奠定基础
1.2研究目的1弄清光照强度对微囊藻藻胆蛋白及藻毒素含量的影响，拟定含高藻胆蛋白及低藻毒素采集的最佳条件2通过对活性氧ROS的产率、果蝇细胞、幼体、成体的成活率、繁殖率及细胞形态学分析，找到藻蓝蛋白光敏剂克制果蝇生长的最佳剂量与光照条件3优化藻胆蛋白与实蝇进行饵料的配方，为藻胆蛋白光敏杀虫剂的田间实验奠定基础
1.3研究内容1在不同的时间段收集巢湖微囊藻，通过藻胆体在细胞内的密度分布、藻毒素含量的检测，拟定微囊藻采集的最佳条件2优化微囊藻藻胆蛋白的分离及除去藻毒素的方法，并对微囊藻C-PC的稳定性、光谱特性、得率进行分析3藻胆蛋白光敏剂克制果蝇细胞生长效果的检测细胞水平以光活化染料赤鲜红BEB、四毗咯光敏剂Photofrin为对照，检测微囊藻OPC PDT作用对昆虫细胞生长的克制率，拟定IC50荧光显微镜进行细胞凋亡的观测，流式细胞仪检测PDT作用后的细胞凋亡率，同时，适当添加微量藻毒素，观测其对细胞的毒性及对藻蓝蛋白光敏作用的影响。
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