霉菌和酵母菌检验方法验证报告

方法验证报告文件编号方法名称霉菌和酵母菌检验方法化妆品安全技术规范2015第五章6霉菌和酵母方法依据菌检验方法分析项目霉菌和酵母菌编制/日期审核/日期批准/日期方法验证报告

一、方法依据/原理

1.1方法依据化妆品安全技术规范2015第五章6霉菌和酵母菌检验方法

1.2原理化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃±2℃培养5d,计算所生长的霉菌和酵母菌数

二、使用范围

2.1适用于化妆品霉菌和酵母菌的测定

三、设备情况表1使用仪器设备一览表是否满足预期设备名称型号设备编号是否校准校准有效期用途电子天平■是口否2022/7/29■是口否立式压力蒸汽灭菌器■是口否2022/7/29■是口否电热鼓风干燥箱■是口否2022/7/29■是口否数显恒温水浴锅■是口否2022/7/29■是口否霉菌培养箱■是口否2022/7/29■是口否超净工作台■是口否2022/7/29■是口否表2标准物质和关键物料登记表名称生产厂家规格/纯度批号有效期状态■正常可用口孟加拉红培养基异常

四、环境条件情况表3环境条件日期时间要求温度/℃实测温度/℃要求湿度/%实测湿度％是否满足预期用途■是□否■是口否

五、人员能力情况表4相关人员人员学历专业相关检测经历年限

六、方法验证/确认情况

6.1实验步骤

6.

1.1样品前处理液体样品水溶性的液体样品，用灭菌吸管吸取10mL样品加到90mL灭菌生理盐水中，混匀后，制成110检液

6.

1.

1.2油性液体样品取样品10g,先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80,在40℃—44℃水浴中振荡混合lOmin,加入灭菌的生理盐水75mL（在40℃—44℃水浴中预温），在40℃—44c水浴中乳化，制成110的悬液

6.

1.

1.3膏、霜、乳剂半固体状样品亲水性的样品称取10g,加到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min用其上清液作为1:10的检液o疏水性样品称取10g,置于灭菌的研钵中，加10位灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入10mL灭菌吐温80,研磨待溶解后，加70mL灭菌生理盐水，在40℃—44℃水浴中充分混合，制成110检液

6.

1.

1.4固体样品称取10g,加到90mL灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上清液作为110的检液使用均质器时，则采用灭菌均质袋，将上述水溶性膏、霜、粉剂等，称10g样品加入90mL灭菌生理盐水，均质Imin一2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品，加10mL灭菌液体石蜡，10mL吐温80,70mL灭菌生理盐水，均质3min—5nlin

6.

1.2操作步骤

6.

1.

2.1样品稀释，取1:

10、1:

100、1:1000的检液各1mL分别注入灭菌平皿内，每个稀释度各接2个平皿，注入融化并冷至45c±1℃左右的虎红培养基，充分摇匀凝固后，翻转平板，置28℃±2℃培养5d,观察并记录另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入15mL孟加拉红培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置28℃±2℃培养箱内培养5d,为空白对照

6.

1.2计算方法先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数判定结果时，应选取菌落数在5个一50个范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g（或每mL）检样中所含的霉菌和酵母菌数其他范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之

6.

1.4菌落计数及报告方法

6.

1.

4.1首先选取平均菌落数在5个一50个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数报告之（见表1中例1）

6.

1.

4.2若有两个稀释度，其平均菌落数均在5个—50个之间，则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2,应报告其平均数，若大于2则以其中稀释度较低的平皿的菌落数报告之（见表1中例2及例3）若所有稀释度的平均菌落数均大于50个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例4）

6.

1.

4.4若所有稀释度的平均菌落数均小于5个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1例5）

06.

1.

4.5若所有稀释度的平均菌落数均不在5个一50个之间，其中一个稀释度大于50个，而相邻的另一稀释度小于5个时，则以接近5个或50个的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例6）

6.

1.

4.6若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g或每mL小于lOCFUo

6.

1.

4.7菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示见表1报告方式栏在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度表1细菌计数结果及报告方式不同稀释度平均菌落数两稀释度菌霉菌和酵母菌菌落总数报告方式数之比CFU/mL或CFU/g例次CFU/mL或CFU/g1234567注CFU-菌落形成单位每g或每mL化妆品含霉菌和酵母菌数以CFU/g mL表示

6.2实验结果不同稀释度平均菌落数两稀释度菌报告方式CFU/mL特性值例次数之比霉菌和酵母菌菌落总数1300-4500CFU/mL或CFU/g CFU/mL

七、结论

7.1本实验操作人员已接受相关培训，熟悉和掌握方法原理、操作步骤及流程，可按方法要求独立完成实验操作

7.2验过程中所用的仪器、试剂、耗材及环境条件均符合方法相关要求

7.3头验空白无异常，特性值均在i300-4500CFU/mL范围内,满足要求

7.4本实验室具备该项目的检测能力

八、附件原始记录。