中国农业大学本科生“URP”立项申请书

中国农业大学本科生立项申请书“URP”项目名称奶牛乳房炎源性产酸克雷伯菌的耐药特征分析请人高健工作单位动物医学院联系电话电子信箱填表日期

2018.

04.12中国农业大学教务处制项目名称奶牛乳房炎源性产酸克雷伯菌的耐药特征分析项目起止时间2018年5月-2019年4月项目申请人情况姓名高健性别出生日期

1981.12最后学历专业技术博士研究生讲师从事专业兽医产科学与学位职务

一、项目概况乳房炎是奶牛养殖场中最常见的一种疾病，给养殖者造成了巨大的经济损失克雷伯菌是我国牛场中主要的乳房炎致病菌，其引起的乳房炎通常临床症状很严重，容易造成奶牛淘汰或死亡，并且对抗生素治疗的效果很差申请者在前期的流行病学调查中发现，产酸克雷伯菌在引起乳房炎的克雷伯菌中占比很高，这个报道在国内外尚属首次目前，针对于产酸克雷伯菌的研究甚少，对其致病力和抗生素耐药性缺乏认识因此，本课题将首次对这种新颖而高度流行的乳房炎致病菌展开耐药性研究，拟用MIC法检测其对兽医临床常用抗生素的耐药性，并用PCR法探查与之相关的耐药基因存在状况本课题的研究结果可阐明我国奶牛乳房炎源性产酸克雷伯菌对常见抗生素的耐药性及其耐药基因的流行特征，将为规模化牛场针对产酸克雷伯菌性乳房炎提供有效的治疗方案

二、实施计划及方案（明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法）本课题拟接收学生3名，要求对实验室内操作及学习具有一定兴趣第一阶段2018年5・7月筛选抗生素及耐药基因培养学生对生、英文科技文献的查找及阅读技能

（1）通过查阅资料，筛选产酸克雷伯菌耐药性实验中使用的抗生素种类；筛选相关耐药基因检测中的耐药基因种类

（2）配制抗生素母液，合成相关的引物培养学生称重、离心、过滤、灭菌等基本操作第二阶段2018年8・10月测定抗生素对产酸克雷伯菌的MIC值培养学生的微生物操作能力及细菌鉴定能力，及超净台内精细操作能力

（1）复苏冻存的产酸克雷伯菌菌株，冻融后划线接种于麦康凯培养基，并进行微生物特征确证

（2）稀释母液，用微孔板稀释法测定各种抗生素对产酸克雷伯菌的MIC值，分析耐药表型第三阶段2018年1L2019年1月测定产酸克雷伯菌的耐药基因培养学生积累分子生物学基础操作能力

（1）提取产酸克雷伯菌的DNA

（2）摸索PCR反应条件

（3）检测相关耐药基因的存在状况第四阶段2019年2月.5月分析整理数据、撰写结题报告及论文整理试验数据，进行统计分析，撰写核心期刊论文，锻炼学生数据处理能力及科技论文写作能力

三、项目实施的基础和条件项目实施基础申请人从事的研究方向为奶牛乳房炎新发病原菌致病机理及耐药性方向的研究，进行了大量的细菌鉴定、毒力分析及耐药性检测方面的工作在本研究中所需基础技术手段和操作过程方面（包括各类PCR操作、细菌培养、MIC法测定耐药性等）有较为丰富的操作经验，并在相关理论上具有较深的造诣同时，申请人长期为规模化奶牛场提供兽医咨询与技术服务工作，具有丰富的乳房炎防控及临床治疗经验，可使本研究更具有临床价值，能切实帮助一线兽医提升诊疗水平，帮助养殖场提高经济效益上述研究工作和前期准备工作为开展本项目研究打下良好的基础实施条件申请人工作的实验室为中国农业大学乳房炎微生物学实验室，近年来得到了长足的发展，实验室面积lOOn,具有梯度PCR仪、CO2培养箱、倒置显微镜、生物安全柜、电泳仪、凝胶图像分析仪、冷冻分析仪、全自动高压灭菌锅、核酸蛋白分析仪、酶标仪、紫外分光光度计及全自动生化分析仪等现代分析设备，仪器运转良好，均已经用在了研究团队现有的研究中，可从事临床微生物、生物化学、细胞培养、细胞和分子生物学等研究工作

四、学生提交的成果1篇核心期刊论文，1份实验结果分析报告

五、经费预算

1、材料费

0.60万元其中抗生素标准品

0.30万元无菌96孔板

0.10万元Taq-mix酶:

0.20万元

2、文献出版及专利申请费

0.20万元经费合计

0.80万元

六、学院URP领导小组意见签字（盖章）年月日。