《基本实验技术》课件

基本实验技术实验室与实验安全安全意识安全设备实验操作前需了解安全注意事项，佩熟悉实验室安全设备，如灭火器、急戴防护用品，如手套、眼镜等救箱等的位置和使用方法危险化学品正确识别和处理危险化学品，了解其性质和安全操作规程常见实验仪器设备显微镜离心机分光光度计pH计用于观察微小物体，如细胞、用于分离不同密度的物质，如用于测量物质的吸光度，可用用于测量溶液的酸碱度细菌等细胞、蛋白质等于定量分析仪器设备的使用与维护熟悉仪器1了解仪器的功能、操作步骤和注意事项正确操作2严格按照操作规程进行操作，避免错误使用定期维护3清洁、保养仪器，延长使用寿命仪器设备的使用与维护是保证实验顺利进行的关键了解仪器的功能和操作步骤，并严格按照操作规程进行操作，可以避免错误使用和意外事故定期对仪器进行清洁和保养，可以延长使用寿命，并确保仪器的精度和准确性实验数据的采集与处理数据分析1分析数据趋势、规律数据整理2分类、排序、汇总数据采集3实验仪器、软件记录常见材料的称量与配制称量溶解12准确称取所需材料是实验成功将固体材料溶解在合适的溶剂的关键使用合适的电子天平中，例如水或缓冲液根据材进行称量，并根据实验要求选料的性质选择合适的溶解方法择合适的称量精度，例如搅拌、加热或超声波处理稀释配制34根据实验需要将浓缩溶液稀释将所有材料按比例混合并配制到所需浓度使用移液管或移成最终的溶液或试剂确保混液器准确取样，并根据公式进合均匀并充分溶解行稀释缓冲溶液的配制选择缓冲剂根据实验需求选择合适的缓冲剂，如磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液等计算所需浓度根据公式计算所需缓冲液的浓度和体积称量溶质根据计算结果称量所需的缓冲剂和盐溶解溶质将称量好的溶质溶解于蒸馏水中，并定容至所需体积调节pH值用酸或碱调节溶液的pH值至目标值酸碱度的测定指示剂法1利用指示剂颜色变化判断溶液的酸碱度pH计法2利用pH计测量溶液的pH值电位滴定法3利用电极的电位变化指示滴定终点吸光度测定样品准备1将样品溶液稀释至适当浓度，并装入比色皿仪器校准2使用空白溶液校准分光光度计，确保仪器零点和光程一致测定吸光度3选择合适的波长，将样品溶液放入比色皿中，测定其吸光度值结果分析4根据吸光度值和已知标准曲线，计算样品中物质的浓度离心技术的应用细胞分离离心可以分离不同大小和密度的细胞，如血细胞分离蛋白质沉淀通过离心可以将蛋白质从溶液中沉淀出来，用于进一步纯化DNA/RNA分离离心可以将DNA或RNA从细胞裂解液中分离出来病毒分离离心可以将病毒从样品中分离出来，用于病毒研究和诊断层析技术的原理与应用分离原理应用范围利用不同物质在固定相和流动相广泛应用于生物化学、药物化学中的分配系数不同，将混合物分、食品科学等领域，例如蛋白质离成单一组分分离、纯化、分析分类根据固定相和流动相的性质、分离原理等进行分类，例如离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等色谱仪的使用原理1利用不同物质在固定相和流动相中的分配系数不同，从而实现物质分离的技术操作2样品制备、仪器设定、运行程序、数据分析维护3定期清洁、更换耗材、校准仪器电泳技术的原理与应用分离原理应用领域基于带电分子在电场中的迁移速度差异，实现样品中不同成分的广泛应用于生物学、医学、化学等领域，如蛋白质分析、核酸分分离析、基因分型等技术的原理与应用PCR聚合酶链式反应原理12PCR是一种体外扩增特定PCR利用DNA聚合酶在高DNA片段的技术，在生物学温下复制DNA片段，通过循研究、临床诊断、法医鉴定等环反应实现DNA的指数级扩领域发挥重要作用增应用3PCR可用于基因检测、疾病诊断、亲子鉴定、微生物检测、环境监测等多种应用领域流式细胞术的原理与应用单细胞分析多参数检测流式细胞术可以对单个细胞进行分析可同时检测细胞的多个指标，例如大，获得细胞的多种参数小、颗粒度、荧光强度等高通量分析可以快速高效地分析大量的细胞，提高实验效率免疫测定技术抗体-抗原反应灵敏度高免疫测定技术利用抗体与抗原之免疫测定技术灵敏度高，可以检间特异性结合的原理，检测生物测到微量物质，适用于多种疾病样品中的特定物质的诊断、治疗和研究应用广泛免疫测定技术在医学、农业、食品安全、环境监测等领域都有广泛的应用细胞培养基础细胞生长1提供适宜的生长环境，例如温度、pH值、营养物质等细胞形态2观察细胞的形态变化，判断细胞是否正常生长细胞污染3识别和防止细菌、真菌和病毒等污染，确保细胞培养的可靠性细胞培养操作步骤准备工作清洁实验室环境，灭菌培养基、器皿等细胞解冻将冻存的细胞快速解冻并转移至培养瓶细胞培养将细胞置于合适的培养条件下，定期更换培养基细胞传代当细胞生长到一定密度时，需要进行传代，以维持细胞生长状态细胞冻存将细胞用冻存液处理后，置于-80℃冰箱中长期保存细胞计数与细胞活力检测细胞计数细胞活力检测血球计数板是一种特殊的显微镜载玻片，用于细胞计数它具有常用方法包括台盼蓝染色法、MTT法、细胞活性染料法等这些刻度网格，可以帮助计数一定体积内的细胞数量方法可以区分活细胞和死细胞，帮助评估细胞的健康状态蛋白质的分离与纯化纯化目标蛋白质1获得高纯度蛋白质分离混合物2从细胞裂解液中去除不需要的蛋白质提取蛋白质3从细胞或组织中提取蛋白质酶活性测定选择合适的底物1根据酶的特性选择合适的底物，确保酶能够有效地催化底物的反应建立检测体系2选择合适的检测方法，例如光谱法、荧光法或化学法，来检测酶反应的产物或底物的变化进行反应3将酶和底物混合，在适当的温度和pH条件下进行反应，并记录反应时间分析数据4根据检测方法获得的实验数据，计算酶的活性，例如单位时间内底物的转化率或产物的生成量质量管理与实验记录实验记录质量控制数据分析详细记录实验过程和结果，确保实验的重复建立标准操作流程，定期进行质量检查，确对实验数据进行整理和分析，得出科学结论性和可追溯性保实验结果的准确性和可靠性，并进行有效的数据管理实验报告的撰写清晰准确1记录实验过程和结果，确保数据准确无误逻辑清晰2按照实验步骤顺序描述，体现实验思路语言简洁3避免冗长描述，重点突出实验结论常见问题与解决方案实验结果不理想仪器故障重复实验，检查试剂，优化实验联系维修人员，参考使用说明书条件实验数据分析困难寻求指导，学习相关软件，查阅文献实验操作演示与实践通过实际操作，加深对实验技术的理解和掌握，提升实验技能和独立操作能力以实际案例为导向，重点讲解关键步骤和注意事项，并提供操作指导和技巧鼓励学生积极参与实践，并及时解答问题，帮助学生克服操作困难总结与展望学习内容未来展望本课程涵盖了基础实验技术，从实验室安全到细胞培养、蛋白质希望大家通过这门课程，提升实验操作能力，为未来的科研工作分析，以及常见的实验仪器设备使用打下坚实基础问答交流与讨论欢迎大家积极提问，我们一起探讨！下次课程预告时间:地点:下周二下午2:00-4:00教学楼401教室内容:实验操作演示与实践课程信息课程时间每周星期四下午2:00-课程地点生命科学学院101实验室4:00课程教材《现代生物学实验技术》。