《培养基及制备》课件

培养基及制备培养基是微生物生长繁殖的必需物质基础，本课件将讲解培养基的分类、成分、制备方法以及常见培养基的应用课程简介培养基制备技术了解培养基的定义、作用、分类和掌握培养基的配制方法、灭菌技术种类，为微生物培养提供基础和无菌操作，确保培养基的质量和安全性微生物培养学习细菌、真菌、动物和植物细胞的培养方法，掌握不同微生物的培养条件和特点培养基的定义和作用定义作用培养基是指人工配制的，供提供微生物生长所需的营养微生物、植物或动物细胞生物质，如碳源、氮源、无机长繁殖的营养物质混合物盐、生长因子等，并控制适宜的值和渗透压pH重要性培养基是微生物研究、生物技术、医学诊断和生物制品生产等领域的重要工具培养基的分类按物理状态分类按化学成分分类按用途分类固体培养基天然培养基基础培养基•••液体培养基合成培养基选择培养基•••半固体培养基半合成培养基鉴别培养基•••富集培养基•细菌培养基固体培养基液体培养基半固体培养基含有琼脂，可形成固体培养基，适合观不含琼脂，呈液体状态，适用于大量培含有少量琼脂，呈半固体状态，用于观察菌落形态养细菌察细菌的运动性细菌培养基的组成成分营养物质水碳源、氮源、无机盐、生长因细菌生长和代谢都需要水，水子等，提供细菌生长所需的营是培养基的重要组成部分养物质缓冲剂维持培养基的稳定，保证细菌在最佳范围内生长pH pH细菌培养基的种类基础培养基选择培养基提供细菌生长必需的营养物质抑制某些细菌生长，促进特定，例如牛肉膏蛋白胨培养基细菌生长，例如麦康凯培养基鉴别培养基富集培养基根据细菌的代谢特点，使不同促进特定细菌大量繁殖，例如细菌产生不同的颜色或形态变厌氧培养基化，例如伊红美蓝培养基细菌培养基的配制方法称量1根据配方精确称取各种成分溶解2将成分溶解于蒸馏水中，加热至完全溶解调值pH3使用酸碱溶液调节培养基值至合适范围pH分装4将配制好的培养基分装到培养皿或试管中灭菌5对培养基进行高压蒸汽灭菌，杀死微生物无菌操作的重要性防止污染保证实验安全无菌操作可以有效地防止外来微生物进入培养基，确保培养基无菌操作可以有效地预防实验过程中微生物感染，保障实验人的纯净性和实验结果的准确性员的安全无菌操作的基本步骤消毒灭菌1确保所有器材和环境处于无菌状态操作环境2选择无菌操作台或区域操作步骤3遵循规范的无菌操作步骤无菌操作的注意事项环境清洁火焰灭菌12保持工作区域清洁，避免灰使用酒精灯或本生灯对工具尘和细菌污染进行火焰灭菌，确保彻底杀死细菌操作规范仪器消毒34遵循标准无菌操作流程，避对所有接触培养基的仪器进免交叉污染行消毒，防止污染常见的无菌操作设备无菌手套酒精灯防止操作人员的手接触到培养基或利用火焰的热量，将空气中的微生器皿，避免污染物杀灭，创造局部无菌环境高压灭菌锅利用高温高压蒸汽灭菌，可杀灭各种细菌、真菌和病毒细菌分离培养操作流程取样1从待检样品中取适量样品，并将其转移到培养基中稀释2将样品在无菌水中进行稀释，以降低细菌浓度，方便后续操作接种3将稀释后的样品接种到培养基上，通常使用平板划线法或倾注法进行接种培养4将接种后的培养基放入培养箱中，在适宜的温度和条件下进行培养，以使细菌生长繁殖观察5观察培养基上的细菌生长情况，并对其进行计数和形态学观察鉴定6根据细菌的形态学特征、生理生化特性等进行鉴定，确定细菌的种类细菌培养基的灭菌方法高压灭菌干热灭菌紫外线灭菌利用高温高压蒸汽杀灭微生物，是最常利用高温干热空气杀灭微生物，适用于利用紫外线照射杀灭微生物，适用于空用的灭菌方法耐高温的玻璃器皿和金属器械气和物体表面消毒常见的灭菌方法高温灭菌化学灭菌辐射灭菌过滤灭菌高温灭菌是利用高温杀死微化学灭菌是利用化学试剂杀辐射灭菌是利用射线杀死微过滤灭菌是利用滤膜将微生生物的方法，包括干热灭菌死微生物的方法，常用的化生物的方法，常用的射线包物截留的方法，常用于热敏和湿热灭菌学试剂包括酒精、过氧化氢括紫外线、射线、γ射线等性物质的灭菌X、甲醛等培养基的保存与管理培养基应储存在阴凉干燥处，避免培养基应贴上标签，标明名称、配阳光直射，并定期检查制日期、有效期等信息建立培养基管理制度，定期对培养基进行质量控制培养基的质量控制无菌性检测理化指标检测性能验证确保培养基无细菌、真菌等微生物污染检测值、渗透压、成分浓度等，确保使用标准菌株或细胞进行培养，验证培pH，以保证实验结果的可靠性培养基的理化性质符合要求养基的生长促进能力和结果稳定性培养基的使用注意事项选择合适的培养基严格无菌操作根据细菌或真菌的种类，选择培养基制备和使用过程中，必相应的培养基，确保营养需求须严格遵守无菌操作规范，防和生长环境符合要求止污染影响实验结果适宜的温度和时间定期检查和更换根据微生物的生长特性，控制定期检查培养基的状态，如颜培养温度和时间，确保其正常色变化、浑浊度等，及时更换生长和繁殖失效或污染的培养基细菌培养观察及鉴定形态观察培养特征12通过显微镜观察细菌的形态观察细菌在培养基上的生长，如球菌、杆菌、螺旋菌等特征，如菌落大小、颜色、形状、边缘等生化反应血清学反应34利用细菌的生化反应，如糖利用抗原抗体反应进行细菌-发酵、酶活性等进行鉴定鉴定，如凝集反应、沉淀反应等细菌生长曲线及生长特点时期特点迟缓期细菌适应环境，数量增长缓慢对数期细菌快速繁殖，数量呈指数增长稳定期细菌繁殖速度减缓，死亡率增加衰亡期细菌死亡速度超过繁殖速度，数量快速下降细菌生长影响因素营养物质温度值氧气pH细菌需要碳、氮、磷、硫等不同的细菌有不同的最适生大多数细菌在中性或微碱性大多数细菌需要氧气来进行营养物质来生长和繁殖长温度，温度过高或过低都环境中生长良好，过酸或过呼吸作用，但也有厌氧菌在会抑制细菌的生长碱都会影响细菌的生长无氧环境中生长细菌培养基的选择原则细菌种类培养目的12选择适合目标细菌生长的培根据不同的实验目的，选择养基，例如，需氧菌需要氧合适的培养基，例如，分离气，厌氧菌则需要无氧环境培养需要选择选择性培养基培养条件3考虑培养温度、湿度、值等条件，选择符合要求的培养基pH常见细菌培养基介绍普通肉汤培养基营养琼脂培养基血琼脂培养基麦康凯培养基适合多种细菌的培养，简单基础培养基，可用于多种细富含营养，适合培养需氧和选择性培养基，用于分离培易制备菌的培养兼性厌氧菌养革兰氏阴性菌真菌培养基的特点生长速度慢温度要求较高真菌生长速度通常比细菌慢，需要大多数真菌最适生长温度为25-更长的培养时间℃，需要控制培养温度30营养需求复杂真菌需要多种营养物质，包括碳源、氮源、无机盐等真菌培养基的组成碳源氮源提供真菌生长所需的碳素来源，例如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等提供真菌生长所需的氮素来源，例如蛋白胨、酵母膏、牛肉膏等无机盐生长因子提供真菌生长所需的无机盐类，例如磷酸盐、硫酸盐、氯化物提供真菌生长所需的维生素、氨基酸等等常见真菌培养基介绍培养基培养基培养基PDA SDAMEA马铃薯葡萄糖琼脂培养基，适于多种真沙堡培养基，用于培养致病性真菌，例麦芽汁琼脂培养基，适用于各种真菌的菌生长，特别是霉菌和酵母菌如曲霉菌和毛霉菌培养，特别是酵母菌动物细胞培养基的特点复杂成分严格的质量控制动物细胞培养基包含各种必由于动物细胞对培养环境非需的营养物质、氨基酸、维常敏感，培养基的质量和无生素和无机盐，以支持细胞菌性必须严格控制，以确保生长和代谢细胞的健康和生长种类繁多根据细胞类型和研究目的，有各种类型的动物细胞培养基可供选择，例如基础培养基、无血清培养基和特异性培养基动物细胞培养基的组成基础培养基血清提供细胞生长所需的必需营养提供生长因子、激素、粘附因物质，如氨基酸、维生素、无子等，促进细胞生长和增殖机盐等缓冲液维持培养基的值稳定，保证细胞的正常生长pH常见动物细胞培养基介绍DMEM DulbeccosModified RPMI1640MEM MinimumEssentialEagle MediumMedium常用于免疫细胞培养，尤其适合悬浮生广泛应用于哺乳动物细胞培养，尤其适长的细胞基本培养基，适合各种细胞类型，常用合贴壁生长的细胞于研究工作植物细胞培养基的特点植物特异性细胞壁存在包含植物生长所需的特定营养物质植物细胞壁的存在需要考虑酶解或，如植物激素和微量元素机械方法去除或破坏生长速率差异与动物细胞相比，植物细胞生长速率较慢，需要优化培养条件植物细胞培养基的组成碳源氮源提供能量和碳骨架，如蔗糖、葡萄提供蛋白质、核酸、氨基酸的合成糖、果糖等原料，如硝酸盐、铵盐、氨基酸等维生素无机盐作为酶的辅酶，参与细胞代谢，如维持细胞的渗透压、值，如钾、pH维生素族、维生素等钙、镁、磷、硫等B C常见植物细胞培养基介绍培养基培养基培养基MS B5N6由和于年研制，由于年研制，主要用于由于年研制，专门为水稻细胞Murashige Skoog1962Gamborg1968Chu1978是应用最广泛的植物细胞培养基之一，单子叶植物的培养，例如水稻、小麦等培养而设计，在水稻遗传转化等领域应适用于多种植物的培养用广泛。