《培养基及制备》课件2

培养基及制备培养基是微生物生长和繁殖的基础，其制备是微生物学实验的关键步骤培养基的定义人工配制的营养物质提供生长所需物质用于培养微生物或细胞的营养物包括碳源、氮源、矿物元素和生质混合物长因子种类多样根据用途和培养对象的不同，有固体培养基、液体培养基和半固体培养基培养基的组成成分碳源氮源矿物元素生长因子提供细胞生长所需的碳骨架和为细胞提供合成蛋白质、核酸提供细胞生长所需的无机盐类一些微生物自身不能合成，但能量例如葡萄糖、蔗糖、等生物大分子的原料例如，例如磷酸盐、硫酸盐、氯必需的物质，例如维生素、乳糖等蛋白胨、酵母浸粉、氨基酸等化物等氨基酸等碳源能量来源细胞结构为微生物提供生长所需的能量构成微生物细胞的物质基础生物合成参与微生物体内各种生物大分子的合成氮源有机氮源无机氮源包括蛋白质、氨基酸、肽类等，微生物可以直接利用包括硝酸盐、铵盐等，微生物需要先将其转化为氨才能利用矿物元素必需元素微量元素来源矿物元素是微生物生长不可或缺的营微量元素如铁、锌、锰、铜、钴等，培养基中的矿物元素通常来自无机盐养成分一些元素如磷、钾、硫、镁虽然含量少，但对微生物的生长也至，例如磷酸盐、硫酸盐、氯化物等、钙等是构成细胞组分和参与代谢过关重要程的必需元素生长因子维生素氨基酸嘌呤和嘧啶碱维生素对于微生物的生长和代谢至关重要某些微生物不能合成某些氨基酸，必须从这些物质是核酸的组成部分，对于微生物，它们参与多种酶的活性，促进细胞生长培养基中获取例如，某些细菌需要谷氨的核酸合成和遗传物质复制至关重要例和繁殖例如，维生素B12对细菌的生长酸、赖氨酸等氨基酸才能正常生长如，腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶和繁殖至关重要培养基的种类固体培养基液体培养基加入琼脂或明胶等凝固剂制成，用于无凝固剂，用于培养微生物并进行液培养细菌等微生物体发酵半固体培养基加入少量凝固剂，用于观察微生物的运动性或保存菌种固体培养基固体培养基细菌生长含有琼脂或其他凝固剂，在培养用于分离培养细菌，观察菌落形皿或试管中凝固成固体状态态，进行菌种鉴定等培养基种类常用的固体培养基包括肉膏蛋白胨琼脂培养基、营养琼脂培养基等液体培养基液体培养基优点应用液体培养基以水为基础，含有溶解的营养物•便于观察微生物的生长状况用于微生物的培养、发酵、生物制药等领域质，适合微生物的生长和繁殖•易于进行后续处理，例如发酵和提取产物半固体培养基特点用途含琼脂量较低，培养基呈半固体状态观察细菌的运动能力，例如鞭毛的运动，以及培养厌氧菌等培养基的配制过程称量1根据配方称量所需成分溶解2将成分溶解于蒸馏水中调节3调节pH值和渗透压灭菌4使用高压蒸汽或过滤灭菌配制固体培养基称量1根据配方准确称取所需成分溶解2将称好的成分溶解于蒸馏水中灭菌3将溶液置于高压蒸汽灭菌器中进行灭菌冷却4将灭菌后的培养基冷却至50-55℃倒平板5将冷却后的培养基倒入无菌培养皿中凝固6在室温下静置冷却至固化配制液体培养基称量根据配方，准确称取所需各种成分溶解将称取的成分溶解于蒸馏水中，充分搅拌使其完全溶解定容将溶液定容至所需体积，并用蒸馏水补充至刻度线灭菌将配制好的液体培养基进行灭菌，以杀灭其中的微生物冷却灭菌后，将培养基冷却至室温，即可使用培养基的灭菌方法高压蒸汽灭菌过滤灭菌利用高温高压蒸汽杀灭微生物，适用使用滤膜过滤，去除液体中的微生物于大多数培养基，适用于热敏性培养基辐射灭菌利用射线杀灭微生物，适用于固体或粉末培养基高压蒸汽灭菌高温高压灭菌效果好12利用高温高压蒸汽杀死微生物能够有效杀灭大多数微生物，，包括细菌、真菌、病毒等适用于培养基、器械等物品的灭菌操作简便3使用高压蒸汽灭菌锅，操作简单方便，但需注意安全操作过滤灭菌原理方法利用孔径小于细菌大小的滤膜，将细菌截留在滤膜上，使滤液达常用的过滤灭菌方法包括微孔滤膜过滤、超滤、纳滤等到无菌状态适用于热敏性物质，例如维生素、抗生素、酶等培养基的保存低温冰箱保存室温保存大多数培养基可在4°C冷藏保存，延长使用寿命某些培养基可以在室温下保存，但需注意有效期室温保存适宜温度避光保存室温保存通常指20-25°C，可根光线会影响培养基的成分，应避据具体培养基类型调整免直射阳光或强光照射干燥通风保持培养基干燥通风，避免潮湿或霉变低温冰箱保存温度时间将配制好的培养基放入4℃的低温大多数培养基可在低温冰箱中保冰箱中保存存数月至一年注意在使用前，应将培养基从冰箱中取出，在室温下回温，避免冷藏的培养基直接使用培养基的检验指标pH值渗透压影响微生物的生长和代谢影响细胞的吸水和失水营养成分含量影响微生物的生长速度和产物合成值pH酸碱度适宜范围12培养基的pH值是指其酸碱度，大多数细菌适宜的pH值范围为影响微生物的生长和代谢

6.5-

7.5，真菌为

4.5-

6.0调节3用酸或碱调节培养基的pH值，确保其符合微生物的生长要求渗透压定义影响渗透压是指溶液中溶质的浓度对水的吸引力，它影响着微生物的渗透压过高或过低都会对微生物产生不利影响，导致细胞失水或生长和繁殖过度吸水营养成分含量蛋白质碳水化合物维生素和矿物质提供必要的氨基酸，用于细胞生长和修复为微生物提供能量来源参与微生物的代谢过程，维持生长和繁殖培养基的质量控制微生物污染检测pH值检测营养成分检测灭菌检查高压蒸汽灭菌过滤灭菌通过高温高压蒸汽杀灭微生物利用滤膜截留细菌等微生物无菌操作灭菌设备无菌环境使用高压蒸汽灭菌器、干热灭菌在无菌操作台或超净工作台等无器等灭菌设备对培养基、器皿进菌环境中进行操作，避免微生物行彻底灭菌污染无菌操作技巧熟练掌握无菌操作技巧，例如火焰灭菌、酒精擦拭等，减少污染风险培养基的使用注意事项选择合适的培养基灭菌彻底12根据微生物的种类和培养目的确保培养基在使用前进行彻底选择合适的培养基类型的灭菌处理，防止污染无菌操作适宜的培养条件34在培养基的使用过程中，保持为微生物提供合适的培养条件无菌操作，避免污染，如温度、pH值和通气量等培养基配制实验操作步骤称量1根据配方准确称取各种成分溶解2将成分溶解在蒸馏水中，加热溶解固体成分调整pH3用酸或碱调节培养基pH至适宜范围分装4将配制好的培养基分装到培养瓶或培养皿中灭菌5用高压蒸汽灭菌或过滤灭菌方法灭菌结论培养基是微生物生长和培养的基础掌握培养基的配制和灭菌方法对于微生物学研究至关重要。