中国药科大学毒理复习纲要

中国药科大学毒理复习纲要毒理复习纲要季老师部分

一、名词解释1）蓄积毒性当较长时间连续反复给药，或者说给药的时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力时，出现药物进入机体的速度或总量超过排出的速度或总量的现象这时，药物就有可能在体内逐渐增加并贮存起来产生毒性2）选择毒性一种化学物质只对某种生物或机体内某一器官产生损害作用，而对其它种类或器官无损害3）最大无作用剂量（EDO或ECO）:指药物在一定时间内，按一定方式与机体接触，按目前最灵敏的检测方法或观察指标，不能观察到任何损害作用的最高剂量（当药物的剂量减到一定量，但尚未到零时，生物学变化已达到零，即不能再观察到药物所引起的生物学变化，此剂量即为最大无作用剂量）4）中毒阈剂量也叫最小有作用剂量，是能使机体在某项观察指标发生异常变化所需要的最小剂量，即能使机体开始出现毒性反应的最低剂量5）急性毒作用带Zac:是半数致死量与急性阈剂量的比值，公式Zac=LD50/Limac6）慢性毒作用带Zch:是急性阈剂量与慢性阈剂量的比值，公式:Zch二Limac/Limch7）QAU:质量保证部门（Quality AssuranceUnit）的简称是负责保证安全性研究机构的各项研究工作符合本规定要求的机构8）SOP:标准操作规程（Standard OperatingProcedures）的简称是GLP中最重要的工作激素使卵泡分泌雌激素，引起排卵和维持黄体并分泌孕激素血液中性激素和促性腺激素的水平可反馈性（负反馈）作用于大脑皮质、下丘脑和垂体的特定部位，影响它们的分泌活动，是精子或卵子的生成正常，并维持第二性征9）反应停事件1956年联邦德国生产了一种新的镇静剂，即反应停（沙利度胺），经常规毒理学方法检测，认为是安全的该药上市后，广泛用于早孕反应此后，陆续出现反应停致畸的事件，主要是短肢样畸形,称海豹胎到1961年底，全世界由此致畸的婴儿达1万例以上对药物致畸作用的警惕始于此，此后，美国和欧洲相继立法，把药物致畸作用的研究作为药物安全性评价的一部分10）细胞凋亡在一定的生理或病理条件下，细胞遵循自身的基因程序，激活核酸内切酶，自动结束生命过程，最终细胞从群体脱离，或裂解为若干凋亡小体，被其他细胞所吞噬（细胞生物学中的定义细胞凋亡是多细胞生物在发育过程中，一种由基因控制的主动的细胞生理性自杀行为）11）激素干扰物又叫内分泌干扰物是指一类能干扰激素代谢而产生不良反应的化合物12）植物性拟雌激素植物中的很多天然物质具有拟雌激素活性，这些物质通过食物及饲料进入人体及动物体内，对机体产生影响如很多黄酮类物质

二、问答题

1、肿瘤的致病因素⑴环境中致癌因素（环境化学物质如内分泌干扰物、物理性致癌因素如电离辐射、生物性致癌因素如病毒）；⑵医源性致癌如x射线等；⑶生活方式（吸烟、喝酒、饮食、化妆品）；⑷职业因素；⑸病理因素如慢性炎症；⑹社会心理因素

2、影响肿瘤发生发展的内在因素有哪些？1）遗传因素对于单基因常染色体显性遗传疾病如视网膜母细胞瘤等，遗传因素其决定作用对于单基因常染色体隐性遗传疾病如着色性干皮病，遗传因素不直接决定肿瘤的发生，仅决定肿瘤的易感性但是大多数情况下，遗传因素和环境因素在肿瘤的发生中起协同作用，而且环境因素更加重要2）免疫因素当免疫缺陷时，诱发肿瘤的敏感性明显增高宿主和肿瘤间的作用是相互的，一方面，宿主可以通过识别肿瘤抗原，启动免疫机制限制与杀灭肿瘤；另一方面，肿瘤可以破坏宿主免疫功能，从而免疫逃逸，得以继续增殖生长3）激素因素4）性别与年龄因素5）种族因素

3、化学致癌物代谢活化的特点有哪些？1）代谢以氧化过程为主2）代谢活化主要在肝脏，但也可在多种组织、器官中进行，有组织器官特异性（P450氧化酶系在大多数组织细胞中都存在，某些组织细胞还含有特殊的酶）3）代谢酶的活性存在种属、品系、家族和个体差异，个体间可相差30〜100倍

4、简述DNA修复和化学致癌的理论化学物可与DNA的碱基，戊糖或磷酸发生反应，形成稳定的等价加合物，也可迅速导致碱基脱氨或水合作用以及DNA断裂、碱基丢失、DNA双螺旋扭曲变形，引起移码突变，DNA链内交联等尽管DNA易受到亲电子物质和自由基的攻击，但是DNA是相对稳定的，原因在于在长期的进化过程中，细胞形成了一套有效的DNA修复系统，以保持遗传稳定性和正常功能但是DNA聚合酶在修复过程中并非绝对按照其模板上的顺序，因此存在错误配对形成突变的可能，特别是在切除大片断的时候Bp20oDNA损伤如果不能得到修复或修复不正确，损伤可以经DNA复制传到子代细胞中，引起基因突变和细胞转化，成为发生肿瘤的潜在危险发生基因突变的可能性有如下几种

①修复发生错误；

②当DNA损伤不被修复系统所识别或损伤水平太高，超过了修复的能力，DNA损伤不会被修复；

③当修复系统异常时，如存在DNA损伤修复缺陷时,某些损伤不会被修复综上所述化学致癌物作用于机体能否引发癌症，既取决于致癌物对DNA的损伤，也取决于机体对损伤DNA的修复能力

5、简述细胞凋亡和化学致癌理论细胞凋亡是在一定的生理或病理条件下，细胞遵循自身的基因程序，激活核酸内切酶，自动结束生命的过程，最终细胞从群体脱离，或裂解为若干凋亡小体，被其他细胞所吞噬以p53为例DNA受损时，p53基因编码的蛋白质水平升高，阻断细胞周期的循环，使细胞停留在G1期，使DNA在复制之前有充分的时间修复当DNA受损严重无法修复时,p53蛋白持续升高并诱导细胞凋亡,以免受损DNA传入子代细胞突变后的p53会出现相反作用，DNA损伤时细胞周期不能暂停,使受损DNA无充分的修复时间；也不引起细胞凋亡，如此继续复制，导致突变细胞增多，为癌变创造了必要的条件细胞凋亡的存在可抑制肿瘤的发生和发展，一旦细胞凋亡被抑制，可使正常细胞转化为肿瘤细胞的机率增加

6、简述化学致癌三阶段理论化学致癌至少有三个阶段启动阶段、促癌阶段和进展阶段1）启动阶段化学致癌物作用于DNA,造成DNA损伤，DNA损伤经细胞分裂增殖（一到数次）被固定下来，导致基因突变，使细胞发生了不可逆的遗传性改变，但此刻细胞并不表现出肿瘤细胞的生物学特性启动细胞不一定都能存活下来，其他转归

①被机体的免疫系统清除；

②通过细胞凋亡而消失；

③在组织稳态因素控制下，保持休眠状态2）促癌阶段促癌物通过特定受体而影响信息传递，从而可逆地增加或减弱基因表达，促进已突变的启动细胞迅速分裂增殖，形成良性肿瘤3）进展阶段在肿瘤形成的促癌阶段中或之后，细胞表现出复杂的基因改变（染色体的结构变异、大段丢失、易位或嵌入），细胞形态或行为发生变化，如生长加速、高度的侵犯性、转移能力、对激素的反应性以及生化、免疫性能改变等，从而获得了恶性肿瘤细胞的特性

7、检测药物致癌的方法有哪些，最具说服力的是哪一个？检测药物致癌的方法有1）致突变试验比如Ames试验，SOS显色试验，UDS试验，果蝇伴性隐性致死试验，微核试验等2）短期致癌试验如哺乳动物培养细胞恶性转化试验和动物短期致癌试验3）动物长期致癌试验又叫哺乳动物终生致癌试验最具说服力的是动物长期致癌试验

8、试述长期致癌试验的设计原则和基本要求长期致癌试验耗费人力、财力、物力较大，时间较长在长期动物试验前，可用致突变试验作初筛，必要时进行短期致癌试验，短期筛检试验阳性的受试物，若有重要使用价值，应安排哺乳动物长期致癌试验根据结果，推测对人致癌的危险性⑴试验动物的选择

①种属选用两种啮齿类的动物，可选用大鼠，小鼠等

②品系要选择敏感、自发肿瘤低、生活力强的品系⑵动物年龄选用刚断奶的幼年动物，不迟于出生后7~9周幼年动物肝药酶和免疫系统的发育还不完善，对受试物较敏感可保证有较长的试验观察期，使致癌性较弱，潜伏期较长的致癌物有充分发挥作用的机会⑶动物数量每组动物至少雌雄各50只⑷动物性别为了接近人类实际情况，应选用同等数量的雌、雄两性动物⑸给药途径原则上与临床拟给药途径相同口服给药可采用喂饲法和灌胃⑹剂量选择和分组至少设高中低三个剂量组设立高剂量的原则一般先进行短期预试验，根据其结果，同时参考长期毒性试验结果来确定高剂量低剂量临床拟用剂量的1~3倍中间剂量与高低剂量成等比级数关系另设空白对照组和溶媒或赋形剂对照组必要时可设阳性对照组一般选用与受试物结构相近的已知致癌物作阳性对照物⑺试验期限动物正常寿命的大部分时间或终生另外，试验开始后不久若发生大量动物死亡时，应提早结束试验⑻观察与检查一般观察，大体解剖和病理组织学检查⑼统计分析肿瘤发生率和潜伏期（io）结果判断:A.给药组肿瘤发生率显著高于对照组自发肿瘤率；B.给药组肿瘤发生的潜伏期显著短于对照组；C.给药组肿瘤发生部位多于对照组；D.给药组肿瘤类型与对照组不同（对照组应有历史对照资料）；符合上述情况之一，并有统计学意义时可判为阳性，如有明显的剂量反应关系，结果更可靠M）结果评价从动物实验结果推论对人体致癌性应极为慎重一种动物试验结果为阳性时，预示该受试药对人可能有致癌潜力两种动物试验结果皆为阴性时，可初步认为该受试药对动物和人都没有致癌性

9、生殖与发育？生殖是人和哺乳动物繁衍种族的生理过程，包括配子的产生、配子的释放、性周期和性行为、卵细胞受精、受精卵卵裂、胚泡形成、受精卵着床、胚胎形成、胚胎发育、器官形成、胎儿发育、分娩和哺乳、出生后发育直至性成熟，又繁殖下一代生殖过程是一个连续的过程，分为生殖（从配子产生到受精卵形成止）和发育（从受精卵形成到性成熟止）两个方面，但又不能截然分开生殖是对亲代而言，发育是对子代而言

10、胚胎发育分为几个时期？哪个时期对致畸物最敏感？⑴着床前期受精卵在着床前迅速分裂呈一个中空的球状物，即胚泡（约含1000个干细胞）人类为最初的ll~12do⑵胚胎期（器官形成期）细胞频繁分化、移行，形成大部分器官人类为妊娠第3~8w此期对致畸物特别敏感，容易诱发器官结构畸形，又称致0畸敏感期⑶胎儿期是胎儿生长和功能成熟期人类是妊娠第9~41w此期对致o畸物不敏感，但可诱发生长迟缓和功能缺陷⑷新生儿期是新生儿对子宫外生活适应的时期组织器官继续发育成熟，功能继续完善人类是从出生到出生后1m化学物可通过母乳对新生儿造成损害，主要影响生长和功能成熟

11、发育毒性主要表现在哪些方面？⑴死亡

①着床前期死亡在人类不易察觉；动物形成早起吸收胎

②胚胎期死亡在人类表现为流产；动物形成晚期吸收胎

③胎儿期死亡死胎⑵畸形器官形态、结构的异常，包括外观、内脏和骨骼畸形⑶生长迟缓胎儿的生长发育较正常胎儿缓慢（胎儿的平均体重低于正常对照组胎儿平均体重2个标准差），表现在体重、身长和骨骼钙化等方面⑷功能发育不全生化、生理、代谢、免疫、神经系统、行为等方面的缺陷或异常某些功能缺陷要等出生后一定时间才能发现

12、激素干扰物的作用方式有哪些？⑴作为类固醇受体的配体起作用；⑵阻断类固醇受体；⑶改变类固醇激素代谢酶；⑷扰乱下丘脑、垂体激素释放

13、影响药物的致畸因素有哪些？⑴种属差异和个体差异⑵接触药物的时间（是否会？是什么？）器官形成期（胚胎期）最敏感⑶接触药物的剂量典型的致畸作用的剂量-效应曲线斜率很大，从“无作用到100%胚胎死亡，剂量仅相差2~4倍⑷药物的理化性质

14、种属差异和个体差异产生的原因有哪些？⑴胚胎发育的遗传特征不同；⑵化学物在母体和胚胎体内代谢过程不同；⑶物种的胎盘构造差异使化学物透过胎盘的速度和量不同

15、检测药物生殖发育毒性的试验方法有哪些？阐述试验目的和给药时间一代三段试验一般生殖毒性试验，致畸试验和围产期毒性试验一般生殖毒性试验目的检测药物对生殖细胞（精子、卵细胞）的发生，卵细胞受精、着床、以及胚胎早期发育阶段的影响并作出评价给药时间雄性交配前60-80天（大鼠的精原干细胞发育成精子至少需要56天），雌性交配前14天（相当于卵子发育的一个多周期）连续给药交配后，雌性动物继续给药至妊娠第7~10天为止致畸试验（申报第L2类新药必须要！）目的评价药物的发育毒性特别是致畸性染毒时间选择胚胎对致畸物的易感期即器官形成期连续给药大鼠孕第6~15天，小鼠孕第5~14天，家兔孕第6~18元围产期毒性试验目的检测药物对胎鼠发育后期、母代分娩过程给药时间围绕分娩前后及哺乳期在妊娠最后1/4时间开始给药，直到幼鼠断奶大、小鼠妊娠第15d开始给药，至分娩后21d（小鼠）和28d（大鼠）家兔妊娠第22天开始给药,至分娩后31do

16、试述致畸试验的设计原则和基本要求目的评价药物的发育毒性特别是致畸性

①动物一般选用两种哺乳动物，一种啮齿类，另一种非啮齿类常选大鼠、小鼠和家兔雌性动物宜选成年未怀孕过的动物

②动物受孕及检查方法查找阴栓和阴道分泌物涂片查找精子

③剂量分组至少分高、中、低三个剂量组高剂量组应有母体毒性反应，或为最大给药量低剂量组应无母体和胚胎毒性反应设阴性对照组（溶剂与赋形剂），必要时设阳性对照组

④每组受孕动物数大鼠和小鼠15-20只,家兔8~10只

⑤染毒途径原则上与临床上拟用的给药途径相同，但不宜采用腹腔注射

⑥染毒时间选择胚胎对致畸物的易感期即器官形成期连续给药大鼠孕第6~15天，小鼠孕第5~14天,家兔孕第6~18天

⑦观察和检查李永齐老师部分

1、常见的肝损伤类型有哪些？

①脂肪肝当脂肪含量超过肝湿重的5%或组织学上超过1/3,则为脂肪肝

②肝细胞死亡包括坏死和凋亡坏死表现为细胞肿胀，破裂，细胞核分裂和炎症细胞的流入；而凋亡则表现为细胞萎缩，细胞核分裂，凋亡小体的形成不引发炎症

③胆小管胆汁郁积外源性化学物质对胆红素正常代谢过程干扰或阻断是胆汁郁积性损害的机理，胆汁排泄减少是其主要机理

④胆管损伤也称胆管损伤性胆汁郁积有价值的生化指标碱性磷酸酶ALPO

⑤肝硬化

⑥肿瘤

2、肝损伤评价中最常用的血清酶学指标有哪些？

①天冬门氨酸转氨酶AST;

②丙氨酸转氨酶ALT;

③碱性磷酸酶ALPO

3、试述神经毒性损伤的特点1）受损表现出现早临床表现有综合功能紊乱（精神活动和行为异常）和传导功能紊乱（感觉过敏或迟钝、麻痹、运动失调、异常姿态和异常动作）2）发育中的神经系统对某些类型的损伤非常敏感神经毒性可发生在生命周期的任何阶段，而且其损伤后果有可能在发育成熟后才表现出来3）直接损害和间接损害外源化合物直接作用，缺氧、缺血和缺糖则是间接作用4）基本生命活性物质常是神经毒作用的靶部位如递质合成前体、合成酶、受体等5）神经元再生能力差功能的恢复依赖于受损神经分支的再生长和存活细胞再连接6）轴突再生能力差7）长神经干的再生需要较长时间修复需要轴浆运输，需要较长时间8）其他阈值、非线性剂量反应关系、年龄因素的影响

4、简述下列药物的神经毒性和作用机制1）可卡因对CNS产生兴奋作用,还可使人致痫机理抑制突触前膜摄取单胺类神经递质的酶，增加突触间隙多巴胺/去甲肾上腺素的浓度引起中毒2）利血平可致抑郁机理耗竭中枢神经递质如去甲肾上腺素和多巴胺，而这些递质能调节人的情感，因此导致抑郁3）吗啡（自己写的）可致欣快感，而且产生呼吸抑制机理:吗啡作为外源性化合物与M受体结合，M受体与G蛋白耦联，发挥对细胞膜离子通道、细胞内钙离子浓度以及蛋白磷酸化的作用主要有两条直接的调节通路:

①关闭突触前膜电压敏感钙离子通道，减少神经递质释放；

②开放突触后膜钾离子通道，使突触后膜处于超极化状态，从而抑制冲动传导4）异烟阴可致精神错乱、不安、欣快、失眠和健忘症机理异烟月井和VB6结构相似，因而竞争同一酶系或结合成腺，由尿排出，降低了VB6的利用，而VB6是氨基酸代谢的辅酶，从而引起氨基酸代谢障碍，产生周围神经炎；当VB6缺乏时，谷氨酸生成GABA减少，从而产生了一系列症状如中枢兴奋、失眠、烦躁不安等5）氨基苗类抗生素

①具有前庭毒性和耳蜗毒性机理内耳淋巴液药物浓度过高，损害内耳柯蒂器内、外毛细胞的糖代谢及能量代谢，导致内耳毛膜上钠钾离子泵发生障碍，从而使毛细胞受损

②可致神经肌肉损害机理与突触前膜上〃钙结合部位〃结合，当神经冲动到达神经末梢时,钙离子内流受阻，从而阻止Ach的释放，因此导致神经肌肉综合征，进而导致神经肌肉损害

5、试述影响神经毒性作用的因素1）药物分子构型和理化性质2）生物因素

①不同区域的神经组织细胞对药物（包括毒物）存在敏感性的差异

②神经系统的发育程度对神经性毒物敏感性不同

③种族和民族差异如异烟月井的乙酰化代谢分为快代谢和慢代谢

④种属差异由于解剖、生理或生化背景不同，神经性毒物对人软件9）近似致死量近似致死量ALD是介于最小致死量MLD与最大非致死量MNLD之间的剂量其中，MLD是指药物在最低剂量组的一群实验动物中仅引起个别动物死亡的剂量，在急性毒性试验中可表示为LD10或LD5;MNLD实际上是急性毒性试验中以死亡为毒效应时的一种最大耐受量,指药物不引起实验动物死亡的最大剂量，可以表示为LD0o10）SPF动物:是无特殊病原体（Specific PathogenFree）动物的缩写指机体内无特殊的微生物和计生虫存在的实验动物11）移码突变指DNA链中的碱基序列中丢失一个或几个碱基，或插入一个或几个化合物分子，结果使突变位点以下的碱基序列发生变更，以致使三联密码转录和翻译时，发生较多遗传信息的改变12）染色体畸变是某一个或几个染色体结构或数目发生变化，用光学显微镜可以直接进行观察包括染色体数目的畸变和染色体结构的畸变13）多倍体正常的生殖细胞染色体为单倍体，体细胞为双倍体，在突变细胞中，染色体可以成整倍的发生变化，以致形成三倍体、四倍体等二倍体以上统称为多倍体14）间接致突变物有的药物，本身不引起突变，必须在体内经过代谢活化后才具有致突变作用，则称为间接致突变物15）微核骨髓细胞经致突变物作用，具染色体发生畸变以致断裂,其断裂的碎片在分裂间期留在了子代细胞内形成规则的一个或几个圆形或椭圆结构的小块物质，由于它比普通细胞核要小，故称之为微核16）程序外DNA合成S期是细胞有丝分裂正常合成DNA的时期但如果DNA受损后，较敏感，猴、狗、猫次之，兔、大鼠、小鼠又次之

⑤年龄影响3）外界因素如温度、湿度、空气成分、噪声、昼夜、季节、生活方式、心理因素等

6、简述神经毒性作用的研究方法现代研究方法包括形态学、生理学、电生理学、生物化学、分子生物学和脑成像等

（一）建立模拟人体神经系统病变的动物模型如电刺激、士的宁制造惊厥模型，MPTP制造震颤麻痹模型等

（二）形态学方法观察病理形态和组织化学改变，依次从肉眼、光镜、电镜和组织化学的角度，综合考察，明确神经毒性作用的部位和机制

（三）电生理学方法脑电图、诱发电位、肌电图、膜片钳等明确神经毒性作用的病理生理变化，明确作用机制

（四）生化学方法神经病理变化和神经生化学变化是密切相关的，其中一些敏感指标被作为神经毒性标记在临床和研究中应用神经的能量代谢、糖、蛋白质及脂肪含量，RNA和DNA及脑磷脂等含量会发生改变，可以测定各种成分的含量来反映病变有无及程度相关生化学指标溶酶体酶、3葡萄糖醛酸酶、如半乳糖苗酶及酸性磷酸酶相关递质有5-HT、多巴胺、NA

（五）神经细胞培养来源脑、脊髓、后根神经节、感觉传导神经节，培养后利用电生理、形态学及生化检查等多种手段进行机制探讨

（六）神经学检查神经学检查常提示神经毒性作用部位，大部分检查可在人或动物中进行,但精神状态和感觉功能的检查多数只能在人身上进行，常见的检查有颅神经功能、运动功能、反射活动和步态异常类型作用类别反应性细胞相关抗体特点T型I速发型、过敏反应T2IgE迅速H型、依赖反成型.、趾型，影响细胞，破坏细胞II型细胞毒型、细胞溶TH2IgM IgG解型型，in免疫复合型、血管TH2IgM IgG抗原抗体复合物不能被吞炎性变态反应噬，在组织中沉着而引起局部炎症反应型迟发型无IV一种细胞免疫反应，发病T1TDH缓慢，与抗体无关，也不需要补体参与，而是细胞T介导的组织损伤

①免疫球蛋白浓度测定；

②T细胞和B细胞浓度测定；

③皮肤无变态反应性；

④体外试验；

⑤免疫抗核抗体分析以下三题自己发挥吧~~~

9、现怀疑某一新上市药物具有神经毒性，请设计实验来研究该药物毒性及作用机制

10、请谈谈你对内分泌系统的认识

11、有人认为肥胖是一种内分泌肿瘤endocrine tumor,请谈谈你的看法DNA的修复合成可以发生在S期以外的时期因此叫程序外DNA合成这是致突变的检测方法之

一二、问答题

1、损害作用具有哪些特点？

①机体的正常形态、生长发育出现不可逆的变化，寿命缩短；

②机体功能容量或对额外应激状态代偿能力的降低，导致机体对其他某些环境因素不利影响的易感性增高；

③机体维持稳态能力的降低是不可逆的；

④从机体代谢过程生化变化角度来看⑴随着药物和机体接接触剂量的增加，机体对该物质的代谢转化速率降低或体内该物质消除变慢；⑵关键酶被抑制，或某些酶系统相对活力改变；⑶由于酶被抑制，某些天然底物浓度上升，或在负荷试验中对专一性底物的代谢能力下降，如ChE

02、毒性作用的分类及常用参数？毒性的作用分为

①局部作用和全身作用；

②可逆作用和不可逆作用；

③速发作用和迟发作用常用参数分为毒性上限指标、毒性下限指标和毒作用带毒性上限指标，常用的有以下几种

①半数致死量LD50或半数致死浓度LC50;

②最小致死量MLD或最少致死浓度MLC;

③最大耐受量MTD或最大耐受浓度LCO,其中以LD50（LC50）最为常用毒性下限指标包括急性阈剂量Limac、慢性阈剂量Limch、最大无作用剂量或浓度EDO/ECO.最小有作用剂量（中毒阈剂量）毒作用带（急性毒作用带Zac和慢性毒作用带Zch）也可表示毒性作用

3、比较A型损害反应和B型损害反应的异同点A型是一种一过性的，在常用治疗剂量下出现的药理作用的延伸,而B型则是完全异常的A型损害反应B「反卜可预测性+-+发生率小低死亡率低高治疗调整剂最停药

4、实验动物按微生物控制标准的分级？国外清洁级动物CL、SPF级动物、无菌动物GF和悉生动物GN国内普通级动物CV、清洁级动物CL、SPF级动物和无菌动物GFO

5、长毒试验中主要的血液生化学指标及其意义？我国药政部门规定需测定的血液生化学指标至少应包括天门冬氨酸氨基转移酶AST,丙氨酸氨基转移酶ALT,碱性磷酸酶ALP,尿素氮BUN,肌酎Crea，总蛋白TP,白蛋白Alb,血糖Glu，总胆红素T-BIL,总胆固醇T-CHO反映肝功能指标ALT——含量和肝损伤程度基本相关，肝早期变化的指标；ALP—活性增强说明肝功能障碍，胆汁郁积,活性下降说明营养缺乏；TP—主要反映白蛋白、球蛋白含量；Alb下降说明肝损伤，但是TP可不变,白球比反映肝病的后期指标；T-BIL——上升说明肝胆管堵塞和肝损伤反映肾功能指标NPN约占BUN的一半，上升说明泌尿道阻塞或肾组织压力增加，下降说明过分饮水，严重损肝Glu上升说明胰岛功能不足，肾上腺功能亢进，反之下降；Crea上升说明肾功能严重损伤肌酸磷酸激酶上升说明肌肉异常，心肌梗死，肺循环异常AST上升反映心脏病变

6、基因突变有哪些常见的类型？基因突变是指组成一个染色体的一个或几个基因发生变化，这种变化不能用光学显微镜直接观察到基因突变可分为点突变pointmutation和移码突变frameshift mutation点突变即碱基取代型突变，又可分为转换型transition和颠换型transversion

7、Ames试验原理及方法评价？原理Ames试验法是利用组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌突变株为测•试指示菌，观察其在某药物作用下回复突变为野生型的一种测试方法组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌在His-的培养基上不能生长，但是加有致突变原的培养基上培养，则可使突变型产生回复突变成为WT,于是能在His-培养基上产生菌落,通过计数菌落，就可以估算药物诱变性的强弱另外检测系统中还包括大鼠的肝微粒体酶S9体外代谢活化系统，使药物在体外受到与体内类似的氧化活化作用，故可测试出间接诱变原方法评价（我自己写的，需要大家补充）目前公认作为筛选可能有致•突变作用的化学药物是一种可靠的方法

①Ames试验是利用微生物作为诱变指示剂，它们具有繁殖快、个体数量多以及容易观察检出等特点，而且方法较为敏感、检出率高、试验周期短、费用也较低

②但是微生物是单细胞生物，与哺乳动物以及人类有较大差别，比如核结构不同、DNA裸露而且数量少、分子小、对化学诱变原不能进行代谢活化或降解以及缺乏免疫系统等当然，目前检测系统中会加入大鼠的S9以检测间接诱变原但是尽管如此，由于微生物本身的自发突变率也高，容易出现假阳性或者假阳性干扰结果因此，Ames试验可以作为初步筛检，最终结论需结合体内实验综合分析，做出判断

8、Ames试验菌株鉴定及试验方法？菌株鉴定试验前必须进行菌株的基因型鉴定、自发回变数鉴定及对鉴别性致突变物的反应菌株组醺酸需要突变突变因子自发回变菌落数Rfa uvrBRTA97++++90-180+TA98++15-60+TA100++75〜200+TA102+-240〜360野生型—一-—1）基因型鉴定:

①组氨酸营养缺陷鉴定（组氨酸需求试验）His-strain只能在有His的培养基上生长,在没有His的培养基上不能生长结果对照平皿无细菌生长，含His平皿有细菌生长

②深粗糙型rfa鉴定（结晶紫抑菌试验）深粗糙型突变的细菌，缺乏LPS屏障，因此，一些大分子物质能进入菌体结果在结晶紫溶液渗透区出现抑菌，证明试验菌株有rfa突变存在，意味结晶紫大分子进入菌体并杀死细菌

③uvrB缺失的鉴定（紫外敏感试验）uvrB缺失，即切除修复系统缺失，此特性一般较稳定，不易丢失结果如果经UV照射部分无细菌生长，而覆盖的一般有细菌生长，则说明对UV敏感，也即此菌株具有urvB缺失的特性

④R因子的鉴定带有R因子的菌株具有抗氨莘青霉素的特性，据此以鉴别R因子的存在，TA102菌株含PAQ1质粒（含抗四环素因子）2）自发回变数测定试验菌株在保存或培养过程中能产生自发回变不同菌株的自发回变有一定的范围3）对鉴别性致突变物的反应试验菌株对不同致突变物的反应不同，应该在有和没有代谢活化的条件下鉴定各试验菌株对致突变物的反应试验方法掺入法和点试法（自己看书扩充）

9、微核试验的原理和方法？原理骨髓细胞经致突变物作用，其染色体发生畸变以致断裂,其断裂的碎片在分裂间期留在了子代细胞内形成规则的一个或几个圆形或椭圆结构的小块物质，由于它比普通细胞核要小，故称之为微核所以观察骨髓细胞中的微核率，有助于检查药物是否具有致突变作用方法骨髓直接涂片法1）骨髓涂片处死小鼠，取股骨，把肉剔干净，用纱布擦净，纵形剪去股骨1/4~1/3,用大头针挑出骨髓，放在已滴好一小滴小牛血清的载玻片上（血滴宜滴在载玻片的一端），另取一块边缘整齐的盖玻片拉片，晾干2）固定甲醇中固定5~10分钟，晾干3）染色:Giemsa染色10-30分钟,洗脱,晾干4）^^片5）镜检油镜

10、果蝇伴性隐性致死试验的原理和结果判断？原理果蝇伴性隐性致死试验sex-linked recessivelethal test,SLRL是利用隐性基因在伴性遗传中的交叉遗传而设计的雄性果蝇X染色体的突变传给F1代雌性果蝇，F1代雌性果蝇为杂合型，不能表达；而F2代雌性果蝇又传给F2代雄性果蝇，F2代雄性果蝇为半合型,能表达所以如果亲代雄性果蝇接触药物后X染色体出现隐性致死突变，则F1代雌性果蝇不表达，而F2代雌性果蝇中因有一半接受了这个已发生突变的X染色体，结果F2代雄性果蝇数目与雌性果蝇少了一半果蝇是现代遗传毒理学上常用的实验昆虫，对药物的代谢酶与哺乳动物相似，且世代周期短，繁殖率高，饲养简单是该法的优点结果判断记录受试染色体数，给药的和无生育力的雄性数，F2代培养群的数目，每一生殖细胞期检测的带有致死基因的染色体数，求出致死突变率致死突变率二％100受试染色体数致死管数1）致死突变率大于自然突变率的2倍，并有剂量反应关系时记为阳性，或用适当统计方法确定2）在F2代，有一支培养管中，若雌雄蝇合计有20只以上而未发现有雄蝇者为阳性，反之，有2只以上雄蝇者为阴性3）在F2代，有一支培养管中，若雌雄蝇合计少于20只，或只有一只雄果蝇者为可疑，需观察F3代4）仅存雌雄果蝇亲本而无子代者为不育

11、啮齿类动物显性致死试验的原理.如何鉴别活胎、早期死亡胚胎和晚期死亡胚胎？原理显性致死试验是观察哺乳动物生殖细胞染色体损伤的一种方法生殖细胞在减数分裂期和受精期最易发生突变，突变后失去与异性生殖细胞结合的能力，或者结合后会出现发育不正常的胚胎，以致造成总着床数减少或早期胚胎死亡率及畸胎等现象鉴别

①活胎成形、色鲜红，有自然运动，机械刺激后有运动反应

②早期死亡胚胎早期死胎胎盘小，不明显，颜色紫红，无自然运动

③晚期死亡胚胎晚期死胎有明显完整的胎盘，呈灰暗色，无自然运动

12、SOS显色试验的原理及评价？原理通过直接监测DNA受损后的SOS修复反应来检测遗传毒性SOS Chromotest是一种特异性的如半乳糖苗酶（％Galactosidase）诱导试验一旦DNA损伤，组成该系统的RecA蛋白即转化为RecA蛋白水解酶,此酶分解阻遏蛋白，使受阻遏的SfiA基因去阻遏，并启动lac基因转录翻译，产生Gal,此酶分解邻硝基苯B-D-半乳糖昔ONPG，产生黄色可溶性物质评价

①快速，方便，7h;

②灵敏，被测试细胞只要产生或不产生SOS反应，测0D值；

③准确，直接，测定的是遗传物质对细胞原发的直接反应产物，阳性结果可信朱燕老师部分

一、名词解释1）肯定的人类致癌物有足够的流行病学证据，支持因素接触与癌症发生的因果关系，这样的一类致癌物叫肯定的人类致癌物2）非遗传毒性致癌物部分致癌物用常规的致突变试验不能检出致突变性，但可促进细胞增殖诱发肿瘤由于其不直接作用于遗传物质，称为非遗传毒性致癌物，如免疫抑制剂，石棉等3）直接致癌物不需代谢活化即具有亲电子活性，能与亲核分子（包括DNA）共价结合形成加合物而诱导细胞癌变，如致癌性烷化剂和金属致癌物4）间接致癌物需在体内代谢活化后才具有致癌活性活化前的间接致癌物叫前致癌物，经活化代谢后的产物称为终代谢物，在活化过程中的中间产物叫近似致癌物5）促癌物本身不具有致癌性，单独作用不会诱发肿瘤，但当它与致癌物共同作用，或在致癌物作用之后，反复作用于细胞，具有促进启动细胞发展成为肿瘤的作用6）原癌基因细胞中存在的核酸水平及蛋白质产物水平与病毒癌基因高度相似的DNA序列称为原癌基因7）抑癌基因拮抗癌基因作用的一类基因，在正常细胞中能抑制细胞增殖和促进细胞分化8）下丘脑-垂体-性腺轴下丘脑弓状核分泌促性腺激素释放激素GnRH经垂体门脉系统至腺垂体远侧部，刺激腺垂体远侧部的黄体生成素细胞和卵泡刺激素细胞分别分泌黄体生成素LH和卵泡刺激素FSHFSH、LH作用于性腺Male FemaleFSH促进曲细精管的增生和精子的成熟使卵泡成长发育LH刺激睾丸间质细胞发育和分泌雄。