显微镜的构造和使用实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除显微镜的构造和使用实验报告篇一显微镜的结构和使用学生实验报告顺河中学学生实验报告科目生物实验名称:显微镜的结构和使用年（班）级:填报告人:实验日期同组实验人:指导教师篇二实验一普通光学显微镜的构造和使用实验一普通光学显微镜的构造和使用、目的要求如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系，当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样就减低了视野的照明度（图1-2）0（图1-D利用油镜不但能增加照明度，更主要的是能增加数值孔径，因为显微镜的放大效能是由其数值孔径决定的所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度（称为镜口角）的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质的折射率所得的乘积，可用下列公式表示:nA=n•sin a式中nA二数值孔径；n二介质折射率；a二最大入射角的半数，即镜口角的半数因此，光线投射到物镜的角度愈大，显微镜的效能就愈大（图III-5）,该角度的大小决定于物镜的直径和焦距同时，a的理论限度为90，sin90°=1,故以空气为介质时（n=l）,数值孔径不能超过1,如以香柏油为介质时，则n增大，其数值孔径也随之增大如光线入射角为120,其半数的正弦为sin60°=

0.87,则以空气为介质时:nA=lXO.87=

0.87以水为介质时nA=l.33X

0.87=

1.15以香柏油为介质时nA=

1.52X

0.87=

1.32显微镜的分辨力是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力它与物镜的数值孔径成正比，与光波长度成反比因此，物镜的数值孔径愈大，光波波长越短，则显微镜的分辨力愈大，被检物体的细微结构也愈能明晰地区别出来因此，一个高的分辨力意味着一个小的可分辨距离，这两个因素是成反比关系的，通常有人把分辨力说成是多少微米或纳米，这实际上是把分辨力和最小分辨距离混淆起来了显微镜的分辨力是用可分辨的最小距离来表示的式中入二光波波长我们肉眼所能感受的光波平均长度为

0.5511m,假如数值孔径为

0.65的高倍物镜，它能辨别两点之间的距离为

0.42nni而在

0.42Hm以下的两点之间的距离就分辨不出，即使用倍数更大的目镜，使显微镜的总放大率增加，也仍然分辨不出只有改用数值孔径更大的物镜，增加其分辨力才行例如用数值孔径为

1.25的油镜时，能辨别两点之间的因此，我们可以看出，假如采用放大率为40倍的高倍物镜nA=

0.65,和放大率为24倍的目镜，虽然总放大率为960倍，但其分辨的最小距离只有

0.42um假如采用放大率为90倍的油镜nA=l.25,和放大率为90倍的目镜，虽然总的放大率为810倍，但却能分辨出

0.22um间的距离

四、器材显微镜、香柏油、

4897.jpg〃style二〃max-width:450Pxwidth=〃450Px〃alt二〃显微镜的构造和使用实验报告〃title二〃显微镜的构造和使用实验报告〃/乙醇-乙醛混合液、擦镜纸、吸水纸等细菌三种形态的染色标本

五、操作步骤

1.观察前的准备

11、显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地将显微镜搬运到实验桌上2将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约10cm左右，右侧可放记录本或绘图纸3调节光照:不带光源的显微镜，可利用灯光或自然光通过反光镜来调节光照，光线较强的天然光源宜用平面镜；光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，但不能用直射阳光，直射阳光会影响物像的清晰并刺激眼睛将10X物镜转入光孔，将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置，用左眼观察目镜中视野的亮度，转动反光镜，使视野的光照达到最明亮最均匀为止自带光源的显微镜，可通过调节电流旋钮来调节光照强弱凡检查染色标本时，光线应强；检查未染色标本时，光线不宜太强可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器、旋转反光镜调节光线

2.低倍镜观察镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯因为低倍镜视野较大，易于发现目标和确定检查的位置将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处在物镜正下方，转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察

3.高倍镜观察在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜较好的显微镜,低倍、高倍镜头是同焦的，在转换物镜时要从侧面观察，避免镜头与玻片相撞然后从目镜观察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节粗调节旋钮，慢慢下降载物台直至物像出现，再用细调节旋钮调至物像清晰为止，找到需观察的部位，并移至视野中央进行观察,并准备用油镜观察

4.油镜观察1用粗调节器将镜筒提起约2cm,将油镜转至正下方2在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油3从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜头几乎与标本相接，应特别注意不能压在标本上，更不可用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头

（4）从接目镜内观察，进一步调节光线，使光线明亮,再用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野出现物像为止，然后用细调节器校正焦距如油镜已离开油面而仍未见物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作至物像看清为止

5.观察完后复原下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许乙酸乙醇混合液擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭2—3下即可，（注

1.掌握普通光学显微镜的基本构造、使用方法、保护要点

2.掌握普通光学显微镜油浸系的原理

3.使用油镜观察几种细菌的基本形态

二、显微镜的基本构造显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成（图-1）4学显微镜的构造（图1T）

1.物镜转换器

2.接物镜

3.游标卡尺

4.载物台

5.聚光器

6.彩虹光阑

7.光源

8.镜座

9.电源开关

10.光源滑动变阻器

11.粗调螺旋

12.微调螺旋

13.镜臂

14.镜筒

15.目镜

16.标本移动螺旋意向一个方向擦拭）将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，再将载物台下降至最低，降下聚光器，反光镜与聚光器垂直，最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中

六、注意事项

1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，本学期一直使用本台显微镜

2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件，以免损坏

3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度

4.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面

5.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图

6.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿

七、实验报告

1.油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？

2.使用油镜时，为什么必须用香柏油

3.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？

4.绘出细菌的几种基本形态篇三实验—一显微镜的构造及使用方法实验一显微镜的构造及使用方法

一、目的要求

1.了解显微镜的构造、性能及成像原理

2.掌握显微镜的正确适用及维护方法

二、实验器材

1.显微镜、纱布、绸布

2.酵母菌示教标本

三、普通光学显微镜简介微生物的最显著的特点就是个体微小，必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构熟悉显微镜并掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段显微镜可分为电子显微镜和光学显微镜两大类光学显微镜包括明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、立体显微镜等其中明视野显微镜为最常用普通光学显微镜，其它显微镜都是在此基础上发展而来的，基本结构相同，只是在某些部分作了一些改变明视野显微镜简称显微镜

（一）显微镜的构造普通光学显微镜的构造可以分为机械和光学系统两大部分图1-1显微镜构造

1.目镜

2.镜筒

3.镜臂

4.标本片移动钮

6.粗细调焦钮

7.聚光镜调节钮

8.底座

9.反光镜

10.虹彩光圈H.聚光器

12.载物台

13.物镜

14.转换器

1.机械系统1镜座base在显微镜的底部，呈马蹄形、长方形、三角形等2镜臂Ann连接镜座和镜筒之间的部分，呈圆弧形,作为移动显微镜时的握持部分3镜筒Tube位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道镜筒的上端可插入接目镜，下面可与转换器相连接镜筒的长度一般为160mm显o微镜分为直筒式和斜筒式；有单筒式的，也有双筒式的

（4）旋转器nosepiece位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘有34个孔，用于安〜装不同放大倍数的接物镜

（5）载物台stage是支持被检标本的平台，呈方形或圆形中央有孔可透过光线，台上有用来固定标本的夹子和标本移动器

（6）调焦旋钮包括粗调焦钮coarseadjustmentknob和细调焦钮Fineadjustmentknob,是调节载物台或镜筒上下移动的装置

2.光学系统

（1）接物镜objectivelens,常称为镜头，简称物镜，是显微镜中最重要的部分，由许多块透镜组成其作用是将标本上的待检物进行放大，形成一个倒立的实像，一般显微镜有34和物镜，根据使用方法的差异〜可分为干燥系和油浸系两组干燥系物镜包括低倍物镜（4〜10x）和高倍物镜（4045x）,使用时物镜与标本之间的介质〜是空气；油浸系物镜（9（n00x）在使用时，物镜与标本之间加有一种折射率与玻璃折射率几乎相等的油类物质（香柏油）作为介质

（2）接目镜eyepiecelens通常称为目镜，一般由23块〜透镜组成其作用将由物镜所形成的实像进一步放大，并形成虚像而印入眼帘一般显微镜的标准目镜是10x

（3）聚光镜condenser位于载物台的下方，由两个或几个透镜组成，其作用是将由光源来的光线聚成一个锥形光拄聚光镜可以通过位于载物台下方的聚光镜调节旋钮进行上下调节，以求得最适光度聚光器还俯有虹彩光圈（Irisdiaphragm），此调节锥形光拄的角度和大小，以控制进入物镜的光的量

（4）反光镜反光镜是一个双面镜，一面是平面，另一面是凹面，起着把外来光线变成平行光线进入聚光镜的作用使用内光源的显微镜就无需反光镜

（5）光源日光和灯光均可，以日光较好，其光色和光强都比较容易控制，有的显微镜采用装在底座内的内光源

（二）显微镜的成像原理显微镜的放大作用是由物镜和目镜共同完成的标本经物镜放大后，在目镜的焦平面上形成一个倒立的实像，再经目镜的进一步放大形成一个虚像，被人的眼睛所观察到图1-2显微镜成像原理

（三）显微镜的性能

1.分辨率和数值口径衡量显微镜性能好坏的指标主要是显微镜的分辨率，显微镜的分辨率Resolvingpower是指显微镜将样品上相互接近的两点清晰分辨出来的能力它主要取决于物镜的分辨能力，物镜的分辨力是所用光的波长和物镜数值口径的函数分辨力用镜头所能分辨出的两点间的最小距离表示，距离越小，分辨能力越好可用公式表示Dl2n.A物镜的数值口径numbericalaperture,简写为n.A表示从聚光镜发出的锥形光柱照射在观察标本上，能被物镜所聚集的量可用公式表示n.Ansinn——标本和物镜之间介质的折射率0——由光源投射到透镜上的光线和光轴之间的最大夹角光线投射到物镜的角度越大，数值口径就越大如果采用一些高折射率的物质作介质，如使用油镜时采用香柏油作介质，则数值口径增大，从而提高分辩能力物镜镜筒上标有数值口径，低倍镜为

0.25,高倍镜为

0.65,油浸镜为

1.25o这些数值是在其它条件都适宜的情况下的最高值，实际使用时，往往低于所标的值

2.放大倍数、焦距和工作距离显微镜的放大倍数是武物镜和目镜放大倍数的乘积放大倍数一样时，由于目镜和物镜搭配不同，其分辨率也不同一般来说，增加放大倍数应该是尽量用放大倍数高的物镜物镜的放大倍数越大，焦距越短，物镜和样品之间的距离（工作距离）便越短

（四）显微镜的使用指南

1.观察前的准备显微镜的安置取放显微镜时应一手握住镜臂、一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘夕4cm镜检时姿势要端正

1.机械装置镜座base和镜臂arm镜座位于显微镜底部，呈马蹄形，它支持全镜镜臂有固定式和活动式两种，活动式的镜臂可改变角度镜臂支持镜筒镜筒bodytube是由金属制成的圆筒，上接目镜，下接转换器镜筒有单筒和双筒两种，单筒又可分为直立式和后倾式两种而双筒则都是倾斜式的，倾斜式镜筒倾斜45°双筒中的一个目镜有屈光度调节装置，以备在两眼视力不同的情况下调节使用转换器nosepiece为两个金属碟所合成的一个转盘,其上装3—4个物镜，可使每个物镜通过镜筒与目镜构成一个放大系统节钮、调节虹彩光的大小，使视野内的光线均匀、亮度适接通电源，根据所用物镜的放大倍数，调节光亮度调宜

2.显微观察1接通电源，采用白炽灯为光源时，应在聚光镜下加一蓝色的滤色片，除去黄光一般情况下，对于初学者，进行显微观察时应遵从低倍镜到高倍镜再到油浸镜的观察程序，因为低倍镜视野较大，易发现目标及确定检查的位置2低倍镜观察，将做好的酵母标本片固定在载物台上，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处在物镜的正下放旋转旋转器，将10x物镜调至光路中央旋转粗调焦钮将载物台升起，从侧面注视小心调节物镜接近标本片，然后用目镜观察，慢慢降载物台，使标本在视野中初步聚焦，再使用细调节钮调节图像清晰通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本个部位，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察的结果调焦时只应降载物台，以免一时的误操作而损坏镜头注意无论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以减少眼睛的疲劳，也便于边观察边绘图记录

（3）高倍镜观察，在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置对聚光镜光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节钮使物像清晰，仔细观察并记录如果，高倍镜和低倍镜不同焦，则按照低倍镜的调焦方法从新调节焦距

（4）油浸镜观察，在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域，用粗调焦钮先降载物台，然后将油镜转到工作位置在待观察的样品区域加一滴香柏油，从侧面注视，用粗调节钮将载物台小心地上升，使油浸镜浸在香柏油并几乎与标本片相接将聚光镜升至最高位置并开足光圈慢慢地降载物台至视野中出现清晰图像为止，仔细观察并作记录

3.显微镜的维护

（1）观察结束后，先降载物台，取下载玻片

（2）用擦镜纸分别擦拭物镜和目镜3用擦镜纸拭去镜头上的油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯4清洁显微镜的金属部件5将各部分还原，将物镜转成“八”字形，同时把聚光镜将下，以免物镜和聚光镜发生碰撞危险6把显微镜放回原处

四、实验报告

1.根据讲义报告，对照实物，熟悉显微镜的构造

2.按显微镜的使用方法，分别用低倍镜和高倍镜对酵母细胞示教标本进行观察

3.哪个物镜的工作距离最短

4.有哪些部件可以调节视野中光的强弱？

5.有哪些方法可以提高显微镜的分辨率？

6.为什么在用高倍镜和油镜观察标本之前要先用低倍镜进行观察载物台stage又称镜台，为方形或圆形的盘，用以载放被检物体，中心有一个通光孔在载物台上有的装有两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有的装有标本推动器，将标本固定后，能向前后左右推动有的推动器上还有刻度，能确定标本的位置，便于找到变换的视野调焦装置是调节物镜和标本间距离的机件，有粗动螺旋coarseadjustment即粗调节器和微动螺旋fineadjustment即细调节器，利用它们使镜筒或镜台上下移动，当物体在物镜和目镜焦点上时，则得到清晰的图像

2.光学系统物镜objective物镜安装在镜筒下端的转换器上，因接近被观察的物体，故又称接物镜其作用是将物体作第一次放大，是决定成像质量和分辨能力的重要部件物镜上通常标有数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主要参数如nAO.30；10X；160/

0.17；16mm其中“nAO.30”表示数值孔径numericalaperture,简写为nA,“10X”表示放大倍数，“160/

0.17”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度mm,16mm表示焦距目镜ocularlens装于镜筒上端，由两块透镜组成镜把物镜造成的像再次放大，不增加分辨力，上面一般标有7X、10义、15X等放大倍数，可根据需要选用一般可按与物镜放大倍数的乘积为物镜数值孔径的500—700倍，最大也不能超过1000倍的选择目镜的放大倍数过大，反而影响观察效果聚光器condenser光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射标本，增强照明度和造成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力聚光器由聚光镜和虹彩光圈irisdiaphragm组成，聚光镜由透镜组成，其数值孔径可大于1,当使用大于1的聚光镜时，需在聚光镜和载玻片之间加香柏油,否贝U只能达至Ui.0o虹彩光圈由簿金属片组成，中心形成圆孔，推动把手可随意调整透进光的强弱调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，可得到适当的光照和清晰的图像光源lightsource较新式的显微镜其光源通常是安装在显微镜的镜座内，通过按钮开关来控制；老式的显微镜大多是采用附着在镜臂上的反光镜，反光镜是一个两面镜子，一面是平面，另一面是凹面在使用低倍和高倍镜观察时，用平面反光镜；使用油镜或光线弱时可用凹面反光镜滤光片filter可见光是各种颜色的光组成的，不同颜色的光线波长不同如只需某一波长的光线时，就要用滤光片选用适当的滤光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的，分别透过不同波长的可见光，可根据标本本身的颜色，在聚光器下加相应的滤光片

三、油镜物镜的基本原理微生物学研究用的显微镜的物镜通常有低倍物镜16mm,10义、高倍物镜4mm,40—45X和油镜

1.8mm,95—100X三种油镜通常标有黑圈或红圈，也有的以“ol oilimmer-sion字样表示，它是三者中放大倍数最大的根据使用不同放大倍数的目镜，可使被检物体放大1000—2000多倍从图in-3中可看出油镜的焦距和工作距离（标本在焦点上看得最清晰时，物镜与样品之间的距离）最短，光圈则开得最大，因此，在使用油镜观察时，镜头离标本十分近，需特别小心使用时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n=l.52,与玻璃相同当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。