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专题一植物专题试验一植物细胞有丝分裂的制片与观测摘要本试验选用大蒜作为试验材料,通过对大蒜根尖的培养获得生长旺盛的植物分生组织,然后对根尖细胞进行前处理、固定、解离、染色、压片来观测细胞有丝分裂的全过程关键词有丝分裂间期前期中期后期末期a bstract:i n this expe r im㊀nt,we c h ose a Ilium s a tivum as t he m a terial.we go t a lot o f activ i ty flo r i s ti c ce11s through c ult i v ating the r oot s of aIlium sativum,t hen we d i sp o sed the c ells in orderto o bse r ve the whole proce sses of th e mit o si s.ke ywor d s:mi t o s i s interphase pr o ph ase met a p hasea n aph a s e telo pha试验原理有丝分裂是植物体细胞进行的一种重要分裂方式有丝分裂的目的是增长细胞的数量而使植物有机体不停生长在有丝分裂过程中,细胞核内的物质能精确的进行复制,然后有规律的均匀分派到两个子细胞中去植物有丝分裂重要在根尖、节间、茎日勺生长点、芽及其他分生组织里进行将生长旺盛的植物分生组织经取材,固定、解离、染色、压片,可以观测到细胞有丝分裂日勺全过程试验用品大蒜固定液由的乙醇和冰乙酸以匕例配置,all iumsa t ivum2n=16,c arn oy95%I3:Itm1m的石炭酸品红,水浴锅,显微镜,剪刀,矿泉水瓶,蒸储水1/1he1,试验环节、果蝇日勺一对唾腺染色体为白色透明状,是其辨别与其他部位日勺一种明显特性
3、在压片的时候应垂直按压,且不要使载玻片与盖玻片之间发生滑动在压片时时侯4力度要合适,防止将其唾腺染色体压断试验二果蝇的三点测交试验摘要果蝇是研究遗传学欧经典材料,由于它轻易采集、培养;d ros oph ila mel a nog asterI它繁殖率高,生活周期短,一般天能繁殖一代;它的染色体数目是本试验选用果10—142n=8蝇为试验材料理解其喂养条件,性状识别,观测完毕三点测交时研究关键词果蝇三点测交abstract:dros ophila melano gaster is a c1as si cmaterial ofs tudying gen etics.first ly,i t is eas y forus to collecta nd to feed,secondl y,as weal1kn ow,d rosophila me1anog a ster has a2n number of8,w hichmeans w e co uId ea sy to obs erve i t,fur thermor e,it alsohas nu merous ofgene muta ti ons.f i nally,its bioc yc1e is very sho r t,t herefo r e it ca n gen e ratea gen eration inonly10-14days.i n this e xperiment we performed the th r ee-p oint m a ppi ng in dr o sophila me1ano gaster.ke ywordsdro sophil amel a nogas te r three-po i n tmapping试验原理两个基因在同一条染色体上呈链锁状态时基因间常常发生互换,互换之可作为两基因间日勺距离三个基因在一条染色体上时,通过三点测交可确定三个基因在染色体上的位置次序和基因间的相对距离试验用品黑腹果蝇(d ros ophil ame1ano g a st er),野生型形状为红眼(+)、长翅(+)、直刚毛(+);三隐性突变型为白眼(w)、短翅(m)、卷刚毛(sn)恒温箱,培养瓶,显微镜,乙醛试验措施、试验果蝇的培养(指导老师完毕)1分别培养两种果蝇,天后,出现幼虫,去亲本7-
8、选择亲本2特性雄蝇雌蝇个体小大腹部条纹35腹部末端圆尖性梳有无性状选择红眼、长翅、直刚毛白眼、短翅、卷刚毛(一定要为处女蝇)、亲本杂交3把挑选的雌雄果蝇分别放入同培养瓶内进行杂交,每瓶对培养瓶放入®温箱培养3-
525、清除亲本4果蝇杂交天后,见到幼虫和蛹出现,清除亲本7-8f
1、观测代果蝇性状5fl再过天,检查代成蝇性状理论上雌蝇所有是红眼,长翅,直刚毛,基因型为杂合的;4-5f1雄蝇所有是白眼、短翅、卷刚毛、测交6从中选出对果蝇放入同培养瓶内进行杂交,培养瓶放入旗温箱培养天,见到f13〜5257〜8有蛹出现时去亲本、代果蝇的观测与记录7f2待蛹羽化成成虫时,通过观测其刚毛形态,眼睛颜色,翅膀大小来确定代勺表型试验成f2H果、代果蝇时记录与分析1f2用于测交的雌果蝇是三个基因的杂合体,减数分裂形成配子时,同源染色体之间又发生互换的也许,任何两个基因之间均有也许发生互换;雄性果蝇只产生两种配子,这两种配子只对代的果f2蝇有性别影响,没有性状上的影响,因此代的表型有8种,其中6种是重组合,2种是亲组合测交后裔表型观测数重组发生在m-s ns n—w m-w+++102000++s n1010100+m+2929029+m sn2202222w msn42000w++4204242+s n2727027w+1919190总计
8593120293、三点测交图距2讨论、在观测代果蝇的性状时,若观测成果与理论相符,即雌蝇所有是红眼,长翅,直刚毛且雄1fl蝇所有是白眼、短翅、卷刚毛,试验可继续进行假如不是预期成果,试验不能盲目往下进行、观测要勤,要及时清除亲本,防止子代和亲代杂交,影响试验成果
2、在开始挑选亲本时,乙酸的量要合适,防止因剂量过大导致亲本死亡判断果蝇与否死亡重3要看其翅膀与否向上翘起,若向上翘起则表明果蝇已经死亡、在转换培养基的过程中,若果蝇不幸飞出则要立即处死,绝不能手软,防止导致试验室其4他果蝇的污染专题三动物专题试验一小鼠骨髓细胞染色体的制片与观测摘要小鼠繁殖周期短,繁殖能力强,是研究分子以及遗传学的经典试mus muse ulus2n=40验材料本试验采用小鼠骨髓细胞作为试验材料,因具有旺盛区分裂能力,通过对其进行离心、I低渗、固定、滴片、染色来观测其染色体日勺形态构造关键词骨髓细胞染色体abstractmu smuseulus whos ecells inbone ma r rowhaveapowerful energyin d ivisio n,is a classicmat e ri a1i n1e arn ing gene tics.i nthis exper i me nt,we chose the bone-marr ow-cell ast he material.we got a loto fa c ti vi tycells from its bone marrow.then we dispose dt he h cells inordert oo bserve t he structur eof the c hr omoso me.k eywords:bo ne marr owchromosom e试验原理染色体是细胞分裂时期遗传物质存在欧特定形式,是染色体紧密包装的成果此时染色体抵I达最大收缩,具有经典的形态小鼠骨髓细胞具有旺盛的分裂增殖能力,把秋水仙素注入小鼠体内,破坏细胞分裂过程中的纺锤体形成,把分裂固定在中期将小鼠解剖,取出骨髓细胞,经低渗、固定、滴片、染色等处理之后,可观测到小鼠的染色体试验用品小鼠(mus musculus)>秋水仙素溶液、生理盐水、低渗溶液、g ie msa磷酸缓冲液,离心机,解剖剪,烧杯,显微镜,甲醇一冰醋酸(1:1)固定液试验措施、药物日勺配制(由指导老师完毕)1秋水仙素溶液称的秋水仙素,用生理盐水溶解10m g100ml生理盐水
8.5gnacl,溶解在1000ml蒸储水中,浓度是
0.85%低渗溶液
5.59gkcl,用1000ml蒸储水溶解,浓度是0075%、秋水仙素的注射(由指导老师完毕)2按每克体重约日勺剂量,在处死小白鼠前经腹腔注射秋水仙素秋水仙素日勺作用是破5pg2h坏细胞分裂中纺锤体的形成,积累细胞中期分裂相、解剖小鼠3颈椎脱臼法处死小白鼠,(用手捏住小白鼠头日勺后部,并用力下压;另一手抓住鼠尾,用力向后上方拉,便可使小白鼠日勺颈椎脱臼,瞬时死亡)立即取下两后肢连同关节头的股骨和胫骨,剔净其上欧肌肉搜集骨髓细胞用柠檬酸钠溶液洗净股骨和胫骨,剪去关节头,暴露骨髓腔I2%将吸有适量柠檬酸钠溶液的注射器时针头从股骨和胫骨的一端插入骨髓腔中,用柠檬酸钠溶2%2%液将骨髓吹洗入离心管中,反复冲洗至骨髓腔呈白色为止、离心4离心管配平后,离心弃去上清液100Or/m i n10mi n,、低渗处理5向细胞沉淀中加入低渗液轻轻敲打离心管底部,使其充足接触,并在冰浴中低渗处理5ml372Om i no、固定6低渗处理后,离心弃去上清液,沿管壁加固定液,立即将细胞团吹散打匀,1000r/mi n10min,静置然后离心反复一次15min,、制细胞悬浮液7视离心管底细胞多少再加入甲醇-冰醋酸()固定液滴,吹打成悬液1:12-
3、滴片8将载玻片在洁净冰水中预冷,取出后平放在桌面用吸管吸取滴细胞悬液,从载玻片上方合2适高度处滴到载玻片和处,并立即对载玻片上的细胞悬液吹气,将细胞悬液吹散吹匀,然1/32/3后置空气中自然干燥载玻片充足干燥后,平放,用新鲜配制时日勺磷酸缓冲液覆盖载玻片,染色1:10giemsa1流水缓缓冲去多出染液,再用吸水纸吸干多出水分,晾干后即可镜检0min,、镜检10采用弓〃字形观测法,即保证不遗漏每一种细胞试验成果根据上述试验措施,得到了图济从图中可以清晰地看到小鼠的染色体数为,且所有为端1,2n=40着丝点讨论、在取骨髓细胞时,应将胫骨两端切掉,使之相通在用生理盐水冲洗时应从上往下冲,并且反1复冲洗,直至红色褪去为止、在滴片的时候为了让细胞破裂、分散得更好,滴管与载片之间应保持至少的距离,让细胞21m摔破因本人在滴片的时侯距离不够长,从而导致细胞没有破裂,从而没有观测到预期的成果(上图摘自同组同学孙海汐的图片)、滴完片子后,一定让片子自然干燥后才能染色,否则细胞和染色体会漂浮在液面上,水洗5时会被冲掉,影响试验效果、染色时间大概为左右,染色过深或过浅都会影响最终的试验成果415min试验二人染色体的制片与观测I摘要人的外周血中具有丰富的处在分裂间期日勺淋巴细胞,当通过特殊刺激可使其进入分裂期,再用秋水仙素处理便可得到大量中期分裂相的细胞本试验采用人外周血作为试验材料,通过对其I进行离心、培养、秋水仙素处理、低渗处理、预固定、二次固定、滴片、染色处理来观测其染giemsa色体勺形态构造H关键词外周血细胞染色体ab stra c tthere are a lot o f homeocy tein humanblood,whi ch can a cce ssto ce11d ivisionwhengiven ai rritati on.in this experiment,we choseh uman b1ood ce11as the mater i a
1.we gota lot o factivi tycel1s from i t.t hen we disp o sed thehcell sin or d er toobserv ethe st rueture o f thechromo some.key word sblood cellc hromosome试验原理人体外周血中的淋巴细胞几乎都处在分裂间期当在培养基中加入植物性血球凝集素(pha)时,这种淋巴细胞受到刺激转化为淋巴母细胞,进入分裂期通过短期培养后,用秋水仙素处理就可获得大量处在分裂中期的细胞,制片后可以清晰地对染色体进行观测试验用品人外周血、肝素、染液、双抗、磷酸缓冲液、秋水仙素、植物性血球凝集素()培giemsa pbspha,养基,小牛血清,青霉素,链霉素,ml99,离心机,甲醇-冰醋酸(3:1)固定液,显微镜试验措施、无菌处理(指导老师完毕)1所有用器药物均应消毒,培养基、、双抗用过滤方式灭菌ph a、培养基配制(指导老师完毕)2取小牛血清青霉素、链霉素肝素滴,ml994m1,1ml,
0.04ml,3-4pha置于培养瓶中
0.3ml、采血3无菌条件下静脉取血放入培养液中
0.2-
0.3ml、培养6细胞在福箱中培养期间常常摇动培养瓶3772h,、秋水仙素处理5培养左右,加入秋水仙素溶液,以获得较多的中期相,摇匀后,继续培养,可进行染色68h I44h体制片、低渗处理6培养物倒入离心管中,1000r/转离心8分钟去掉上清液,沉淀物为红细胞和白细胞,然后加入少许预热的小心用吸管吹气混匀后,放入旗温箱中低渗分钟左右,低渗
370.075m kc1,3720H勺作用在于使红细胞破碎,白细胞膨胀破裂,最终导致染色体分散、预固定7加入1ml新配制的甲醇-冰醋酸
(31)固定液,均匀后立即以100Or/转离心7分钟,用吸管吸去所有上清液,轻弹离心管底部,使沉淀成糊状、第一次固定8加入固定液,用吹管吹打均匀,固定分钟,以转离心分钟,去掉上清液5ml151000r/
7、第二次固定9反复上述操作过程,去掉上清液,视管底细胞多少加入新鲜固定液,制成悬浮液、滴片I0玻片洗净后放于冰箱中冰冻,滴片时用吹管吹取细胞悬浮液,滴于载片上,滴片高度应少高些,每张片滴滴,滴后用嘴吹,有助于细胞分散,滴片后斜放,在空气中干燥1-
3、染色II giemsa取张片,用染液和磷酸缓冲溶液配成时工作液,滴于载片上染色分钟,自来1-2gi emsa1:1015水冲洗后镜检试验成果通过上述试验措施,得到图册从图中可以清晰地看到人日勺染色体数为22n=460讨论、在滴片的时候为了让细胞破裂、分散得更好,滴管与载片之间应保持至少时距离,让细胞11m摔破本次试验吸取上次试验的教训,因此获得了较为成功的制片、滴完片子后,一定让片子自然干燥后才能染色,否则细胞和染色体会漂浮在液面上,水洗时2会被冲掉,影响试验效果、染色时间大概为左右,染色过深或过浅都会影响最终的试验成果315mi nJ、在取血时,手一定要轻,防止红血细胞混到血清中
4、加固定液时,一定要边加边用食指弹拨离心管,让细胞充足散开,防止细胞汇集5试验三人染色体的分带染色法摘要染色体分带技术是鉴定单个染色体和染色体组的一种手段,它运用特殊的染色措施使染色体产生明显的染色的暗和染色的命带相间附带型形成了鲜明的染色体个体性,本试验因用吉姆萨染液,故称为带g—关键词吉姆萨染液胰蛋白酶a bstr a c tt hete ch nolog y0f d etachi ng chr om0some band is an imp0rtant m e thodtoid entif ye achc hr0mo someorc hrom0s0me set t h roughusing sp ec i a1c0lora nt.because i t canmakethe chr omosome s how twok indsofdifferent be1t s.in this experiment we usegiems a,s0i tcan becalledg-belt.key word sgiemsa tr ypsase试验原理生根、取材与固定
1.采用水培法于暗处使大蒜生根,每天换水两次天后,根长至左右上午
42.0cm用剪刀将根尖剪下,并直接放入固定液中固定,以保持细胞真实的生活状态,防止操作过程中10:00对细胞生活状态日勺破坏本次试验固定期间为14h解离与水洗
2.本次试验采用了酸解法使细胞散开将日勺放入恒温水浴锅中,将固定好1m o1/1hc160M日勺根尖放入.解离用清水冲洗解离后日勺材料次,洗去表面日勺并引起后低渗,利于4mino5hcI,压片染色、压片与镜检、拍照
3.截取根尖上分生组织左右于载玻片上,用镣子将分生组织碾碎;滴上石炭酸品红染1/3色染完后,盖上盖玻片,用解剖针轻敲盖玻片几次,以增强细胞扩散程度试验成果5min通过上述试验措施获得了一系列分裂日勺照片,如图所示从这一系列图片我们可以看到有i—1丝分裂是一种持续时过程,各期的特性如下所述间期interphase图i-1a所示,有丝分裂间期染色体以染色质形式存在,染色质缠绕成丝状的无规线团I前期P roph as e图i-lb所示,染色体螺旋化,由无规线团逐渐变成比较清晰的染色体,核膜核仁消失中期:图所示,染色体在分裂中期有序地排列在赤道板上,数目清晰,是m㊀taph ase i—1c染色体形态观测的最佳时期后期图所示,姐妹染色单体开始分离并在纺锤丝的牵引下移向两极末期anaphas㊀i—1dtelophase图i-le所示,染色体继续走向两极,同步染色体也开始解螺旋,由染色体状态逐渐变为无序线团,核膜核仁复现人染色体通过胰蛋白酶处理后,染色体上日勺蛋白质被酶水解只留下裸露的在吉姆萨染液dna,的过程中,不同样的碱基在吉姆萨中着色深浅不同样,因此会看到颜色深浅不一时带纹试验用品吉姆萨染液胰蛋白酶溶液pb s试验环节、胰蛋白酶处理1将上次试验制得的人染色体的片子取出在室温下将玻片标本浸入胰蛋白酶工作液中处理秒左右
25、漂洗2再在中漂洗秒p bs
30、染色3在染液中染分钟左右giem sa
7、水洗4玻片标本在细流自来水下冲洗直至水流不再有颜色为止,在冲洗标本时,不要冲洗标本的正面,以防染色体被水流冲洗掉,空气干燥、镜检5采用弓〃字形观测法,即保证不遗漏每一种细胞成果通过上述试验措施,得到图而从图中可以清晰地看到人的染色体数为且有明显的带32n=46,纹.讨论、玻片标本在胰蛋白酶溶液处理前须在皿箱内处理天左右,才可以得到满意的1374成果、用胰蛋白酶处理染色体的时间要恰当,方可使染色体外表面的蛋白质水解
2、染色时间不要太长,以防因时间过长而导致染色体没有明显分带,所有染色体染色过深
3、在挑选染色体时,尽量挑选染色体比较长的,这样使分带愈加明显4试验四日勺粗提取dn a摘要鸡血红细胞与人的红细胞不同样,存在细胞核,当中含丰富的有并且鸡血细胞极易dna,吸水胀破本试验以鸡血为试验材料,运用在不同样浓度的下溶解度不同样欧措施来粗dn anac1J提取dn a o关键词红细胞dn aabstrac t:d if fe rent from human blood,th ered blo odcel1in chick has nucleus,where thereare numer ousofd na.in this exp eriment wech osethe chick b1ood asthe materi ala nddisposed itin order to abstr actthe dna.key wordsdn ared cel1试验原理鸡血红细胞与人的红细胞不同样,存在细胞核,当中含丰富的有并且鸡血细胞极易吸水胀dn a,破首先破坏细胞膜,然后通过高速离心,由于欧分子量较大,因此会下沉,这样反复多次dn aJ可得到较粗的而后运用在不同样浓度日勺下溶解度不同样的措施来粗提取dnao dna nacl dn ao试验用品柠檬酸钠、、二苯胺、、离心机、冰10%2mol/1nacl
0.15mol/1nacl pbs乙醇、纱布、蒸储水、玻璃棒、鸡血、烧杯试验措施、取鸡血1杀活鸡取鸡血,同步放入抗凝剂柠檬酸钠溶液详细制备措施如下取质量浓度为的柠O.lg/m1檬酸钠溶液置于烧杯中,注入新鲜的鸡血(约)同步用玻璃棒搅拌,使血液与100ml,500ml180ml,柠檬酸钠溶液充足混合,以免血液凝结、离心2将血液倒入离心管内进行离心,用使血细胞沉淀于离心管底部1000r/minW^5min,破碎细胞,释放3^dna鸡血细胞中的与核蛋白结合,位于鸡血细胞的细胞核中,正常状况下是不会释放出来时dna为了使从细胞核中释放出来,需要向鸡血细胞液中加入蒸偏水,并且搅拌,从而使血细胞膜和dna核膜胀破用玻璃棒搅拌可以加速细胞的破裂注意应沿一种方向迅速搅拌,但也不能太快太猛,防止打碎一般的鸡血细胞液加入蒸储水搅拌释放出来的大量和dna5-10ml20ml5mino dn a rna往往与蛋白质结合在一起,用单层纱布进行过滤,除去某些颗粒较大日勺杂质、溶解细胞核内日勺4dna在浓度较高的溶液中核蛋白轻易解聚,游离出的溶解在溶液中在溶液中加入1nacl dna40—60体积浓度为日勺溶液,搅拌m12mol/1nacl1m in、的析出5dna J将溶液中的与其他杂质分离,加蒸偏水减少溶液浓度,使析出缓慢贴壁加入蒸J dnanacl dna储水,并轻轻地沿一种方向不停地均匀搅拌,以利于分子的附着和缠绕使dna溶液於终浓度为加水过程分多次进行,当总加水量为左右nac1I
0.1—
0.2mol/lo80ml时,已基本析出用层纱布对稀释液进行过滤,滤去蛋白质,搜集日勺黏稠物dna2dna dna、的)初步纯化6dna将黏稠物再溶解,继续用的溶液溶解黏稠物,仍旧沿一种方向不停dna2mol/1nacl20ml dna搅拌,使充足溶解,以免损失用层纱布进行过滤,滤去杂质,搜集具有的滤液向滤液dna2dna中贴壁缓慢加入等倍体积的冰乙醇,并用玻璃棒朝一种方向缓慢、均匀地搅拌,溶液中会出现I dna丝状物,卷起用的溶液溶解丝状物,并加入二苯胺
0.02m1/I nacl1ml、欧鉴定7dna J同步将对照组(只含二苯胺试剂)与试验组水浴加热进行显色反应试验成果通过一段时间后试验组溶液变蓝,对照组溶液颜色不变讨论、在取鸡血时时侯,同步用玻璃棒进行搅拌,使血液与柠檬酸钠溶液充足混合,以免血液凝结
1、由于溶液中含量较少,过滤时应在不溢出时基础上,使滤液尽量多地透过纱布,尽量防止2dna挥霍、试验中应以同一方向搅拌溶液,以防止被打断3dna试验五血影的制备摘要鸡血红细胞与人的红细胞不同样,存在细胞核.本试验以活鸡血为原料通过多次的)离心,I学会粗略日勺提取细胞膜的措施关键词细胞膜红细胞abstractd iffere nt fromhumanb1ood,the redb loodcell inch ickhasnucleus.in th ise xperimentwe chosethechi ckblood asthemat eri a1an ddis poseditinorde rtoabs trac tthe cellm embra ne.key wor ds:cel1membran ered ce11试验原理鸡血细胞的细胞膜具有选择透过性,较大的物质一般状况下不会从细胞膜透出若采用溶液作用于细胞,便可以变化细胞膜的通透性,使其通透性增大,从而可以通过高速离心的措5P
7.6施使与细胞质分离,制备血影试验用品柠檬酸钠,溶液10%pbs,5P
7.6试验措施、离心1取血液加入倍体积时,装入离心管进行时间为分钟时离心10ml2pbs1000r/mi n,
5、取沉淀,再次离心2倒出上清液,反复第一步、混合3沉淀中加入倍体积的溶液,混合均匀后在常温中静置20I5p
7.625min、离心4装入离心管进行时间为分钟欧离心miOml15000r/min,20I、镜检5去掉上清液,取出红色沉淀上层,在显微镜下进行观测试验成果通过上述试验措施,得到了图济4讨论、在取鸡血的时候,同步用玻璃棒进行搅拌,使血液与柠檬酸钠溶液充足混合,以免血液凝1I结、在加入低渗液时,一定要边加边搅拌,使红细胞与低渗液充足接触
2、在取细胞膜的时候,要取最上表层,不要获得过多防止细胞内容物影响试验成果3专题四链抱霉的杂交及四分子分析摘要粗糙链抱霉属真菌类,是进行四分子遗传学分析的好材料本专题ner ospora c rassa I选用粗糙链抱霉赖氨酸缺陷型和野生型为试验材料,对杂交所得后裔的体现型进行观测分析,进I而理解次序排列的四分体的遗传学分析措施关键词链狗霉互换abstractner osporac rassa isagood ma teria1to tetrad anal y sis.in thisexp er ime nt weobserve dthesecond divisi on segreg ationof game togamy bythe lys+and1ys-.then weanalyz ed theresu1ts inorderto ca1culat ethe dis tance bet we enthe geneand thecent rome re.key wo rdsnero sp oracrassa,cro sso ver试验原理粗糙链抱霉的菌丝体是单倍体,每一菌丝细胞中具有几十个nerosp ora cra ssaJ细胞核粗糙链胞霉的菌株有两种不同样的接合型,它们受一对等位基因控制不同样接合型菌株日勺细胞接合产生有性胞子,这过程称为有性生殖通过对粗糙链也霉的赖氨酸缺陷型和野生型杂交所得后裔的体现型的分析,理解次序排列的四分体的遗传学分析措施,进行有关基因叫着丝粒距离日勺计算和作图试验用品粗糙链抱霉(ners pora eras sa),琼脂、蔗糖、赖氨酸、玉米粒、土豆、5%次氯酸钠(naclo),试验措施、制备培养基(由指导老师完毕)1野生型菌株培养基
1.
1.将马铃薯洗净去皮取加水,煮熟,然后用纱布过滤,弃去残渣,滤200g,1000ml2%琼脂,蔗糖,煮融,分装到试管中而后在磅压力下消毒分钟,取出成为斜面备20g830用培养缺陷型菌株培养基
1.
2.制作措施与野生型菌株的培养基相似成分如下土豆蔗糖琼脂配200g,20g,20g,1加入赖氨酸000ml20ml杂交培养基
1.
3.将玉米在水中浸软,破碎,每试管放2—3粒,加入少许琼脂(0・1克左右),再放入一小片经多次折叠日勺滤纸(长约厘米),加上棉塞,消毒,不需摆斜面3-
4、菌种活化(由指导老师完毕)2为使菌种生长得更好,先要进行菌种活化把野生型和赖氨酸缺陷型菌种从冰箱中取出,分别接在两支完全培养基试斜面上,崛箱培养天左右培养到菌丝的上部有分生抱子产生
285、菌种杂交(由指导老师完毕)3同步在杂交培养基上接种两亲本菌株日勺分生抱子或菌丝,端箱进行混合培养在杂交后255天就能看到许多棕色日勺原子囊果出现,后来原子囊果变大变黑成子囊果,在天左右,就-77-14可在显微镜下观测、制片观测4取一载玻片,滴滴%次氯酸钠,然后用接种环从长有子囊果欧试管中挑出子囊果放在载玻25I片上,用另一载玻片盖上,用手指压片,将子囊果压破,置显微镜下检查观测子囊中子囊抱子日勺排列状况试验成果通过上述措施得到了图Ml一般的子囊胞子类型有++++----;----------------------------------++++;++--++-++;++--一一++;--++++-名称体现型数值亲本++++--------++++94々一++--■++---++-—++23-+----4-+7一一++++--7重组值=互换值/总数*1/2=
14.1%讨论、如图所示有些子囊中日勺子囊抱子尚未成熟,全为灰色;有些赖氨酸缺陷型的子囊1Ml胞子也成熟了,全为黑色、有时观测到欧子囊抱子的排列为++++--++,++-----2I I-+-——+++,-+++---+,这样日勺状况日勺出现是由于基因转变导致欧基因转变日勺频率因基因位点不同样而异,但一般极低I、在挑选子囊果时要挑选粒大、饱满并且外壳坚硬的,否则子囊果不成熟,外壳不够硬,子囊抱3子不会被压出来、在压片时,若事先用解剖针在子囊果外壳上刺出缺口,则会使子囊抱子很轻易被压出
4、在数子囊抱子时,要从一种方向之另一种方向有规则地数,以免数乱
5、压片日勺力度要合适,防止载玻片与盖玻片之间发生滑动,使子囊抱子互相重叠,影响观测6成果参照文献《遗传学试验技术》卢龙斗主编《遗传学试验措施和技术》北京大学生物系遗传学教研组编《遗传学试验原理和措施》梁学礼主编《人体及动物细胞遗传学试验技术》王子淑编著讨论
1、大蒜根尖的固定期间在上午900-1100和下午15:00-1700为最佳由于此时是大蒜分裂的高峰期、解离的时间要合适,大概由于解离时间的长短与试验成果日勺好坏有非常直接的影响,24min,时间过长,则不仅破坏分生组织之间的果胶与纤维素等物质,也使分生组织与伸长区脱离,染色效果将会减少,而过短,则又达不到分离细胞的成果、在切取根尖时大概切从根尖开始算往上左右,若切得太短,则只会看到成熟的根冠
31.5mm细胞,在视野中看不到分裂期细胞;若切得太长,则会看到有诸多伸长区的成熟细胞,从而影响试验成果、染色时间不合适过长或过短,染色过深或过浅都会影响最终的试验成果
4、压片时用拇指从上往下垂直用力且要防止载玻片与盖玻片之间的滑动,否则会使细胞之间重5叠,影响观测、观测时先用低倍镜找到分裂相的位置,再换高倍镜观测6试验二植物细胞减数分裂制片与观测KJ摘要本试验选用玉米雄花作为试验材料,首先将已固定好雄花的花药剥离出来,然后通过对花粉母细胞进行解离、染色、压片来观测细胞减数分裂日勺全过程关键词减数分裂细线期偶线期粗线期双线期终变期ab stract:in thisexp erimen t,we chosez ea maysas themate ri al.we gotalotof cellsin mei osis.then wedisposed thece11sin ordertoo bser vethewholeprocess esof the mei os is.key words:meiosis1e pton emaz ygonemapach ynemadip1onema diakineses试验原理减数分裂是生物在形成配子时的一种特殊欧分裂方式,是在性母细胞中进行的减数分裂产I生日勺每个子细胞染色体数目减少二分之一并且第一次分裂前期尤其长,其变化尤其复杂,包括同源染色体配对、互换与分离等试验用品玉米雄花(ze amays2n=20),c arnoy固定液(由95%欧I乙醇和冰乙酸以31欧I比例配置),铁矶,苏木精,恒温箱,冰乙酸,酒精灯,显微镜试验措施、取材与固定(指导老师完毕)1采集处在减数分裂时期的玉米雄花,采集时间为上午830—10:30和下午200-采集欧雄花直接放入新配制的固定液中固定一周(中间换固定液两次)4:00o IJ carn y、花药剥离2减数分裂是同步分裂,由于每朵小花中日勺所有花药都处在同一时期,因此剥离的量要充足,以J便在试验中能进行选择、媒染、复染花药3在不伤害花药的前提下,使用镒子与解剖针玻璃花药并放入硫酸高铁镂(铁矶)水溶液中进4%行媒染,时间为媒染后,彻底水洗除净花药表面的铁离子之后放入日勺苏木精中染4-24h
0.5%在陶箱中进行染完后再次彻底水洗除去表面染料4—24h
25、制片、镜检与拍照4取一枚花药于载玻片上,滴上一滴冰乙酸,并在酒精灯上加热秒钟材料加热之后,盖45%5上盖玻片,用滤纸折叠成两层盖在盖片上,进行压片试验成果通过上述试验措施得到如下图i-2讨论、在花药剥离时要注意将颖片剥离洁净,使用欧镜子和解剖针不可伤害花药,否则花粉母细1I胞会从伤口处外流,影响试验效果、在挑选花粉粒的时候,应挑选粒大且饱满的,粒小而瘪的花粉往往发育不良
2、媒染时间不合适过长或过短,染色过深或过浅都会影响最终的试验成果
3、压片时用拇指从上往下垂直用力且耍防止载玻片与盖玻片之间的滑动,否则会使细胞之间重4叠,影响观测、观测时先用低倍镜找到分裂相的位置,再换高倍镜观测
5、减数分裂过程是一种持续的过程,各时期之间没有明显的界线,只要符合这个时期的特性6I便可作为此时期的分裂相试验三植物细胞多倍体诱导日勺制片与观测摘要本试验选用大蒜作为试验材料,通过在培养液中施加秋水仙素的措施培养大蒜根尖细胞从而对其进行多倍体诱导,然后对根尖细胞进行固定、解离、染色、压片来观测细胞染色体加倍后日勺分裂相关键词多倍体秋水仙素a bstract:in thisexperime ntwe chosea11ium sativumasthematerial.we gotalotofactiv irtyfloris tic cellsthrough cu1tiva tingthero otsof aliiumsativum.then weput co Ichicineinto thewat er.after abo ut36hours,wedisposedthe polyploidcel1sinordertoobserve themselves.key words:po1y ploi dy colchicine试验原理多倍体是指细胞核内具有两个以上染色体组,它日勺产生出了自然发生外还可人工诱导诱导多倍体的措施有多种,本试验采用秋水仙素诱导它重要作用于细胞分裂过程中纺锤体的形成,使细胞分裂后期染色体不能分向两极而被阻截在中期,通过间期染色体复制,使染色体数目加倍试验用品大蒜固定液由的乙醇和冰乙酸以的比例配置,秋水仙allium sativum2n=16,car noy95%J3:1素,的石炭酸品红,水浴锅,显微镜,剪刀,矿泉水瓶,蒸储水试验措施imol/I hcl,、生根与秋水仙素处理1采用水培法培养大蒜,直至根长约向培养液中加入浓度为的秋水仙素,培养
2.0cm
0.1%36〜待根尖膨大时可取材固定48h、固定、解离同有丝分裂过程
2、制片3取根尖分生组织一部分放在一洁净的载片上,先用解剖针把材料碾碎并铺展开,然后滴上一滴石炭酸品红染色盖上盖片,进行压片5min,试验成果通过以上试验措施,制取了图i-3oa b图大蒜的染色体图白点示着丝点图是未加倍的大蒜细胞中的染色体i-3a:2n=16,I I图b4n=32,是经秋水仙素加倍后日勺大蒜细胞染色体讨论、染色体加倍的倍数多少与秋水仙素作用的时间有关若让染色体数目加倍,秋水仙素处理的1时间应不不大于等于细胞的一种分裂周期假如浸泡的时间不不大于细胞周期的二倍,则会出现八倍体若感爱好,可合适延长处理时间,观测试验成果、不应当观测到条染色体就认定此细胞为四倍体,由于染色体为细胞的分裂后期染色体2322n数也为条,此时的染色体不含姐妹染色单体而染色体为日勺细胞中期,具有对姐妹染色324n32单体、若大蒜根尖细胞被加倍,其尖端部膨大,是认定细胞加倍的理由之一
34、大蒜根尖欧I固定期间在上午900—1100和卜午15:00—17:00为最佳由于此时是大蒜分裂的高峰期、解离的时间要合适,大概由于解离时间的长短与试验成果的好坏有非常直接的54min,I I影响,时间过长,则不仅破坏分生组织之间的果胶与纤维素等物质,也使分生组织与伸长区脱离,染色效果将会减少,而过短,则又达不到分离细胞的成果、在切取根尖时大概切从根尖开始算往上左右,若切得太短,则只会看到成熟的根冠细
61.5mm胞,在视野中看不到分裂期细胞;若切得太长,则会看到有诸多伸长区的成熟细胞,从而影响试验成果、染色时间不合适过长或过短,染色过深或过浅都会影响最终的试验成果
7、压片时用拇指从上往下垂直用力且要防止载玻片与盖玻片之间的滑动,否则会使细胞之间重8叠,影响观测、观测时先用低倍镜找到分裂相的位置,再换高倍镜观测9专题二果蝇专题试验一果蝇唾腺染色体的观测摘要果蝇是研究遗传学日勺经典材料,它日勺染色体数目是droso phila melanogaster2n=8,易于观测,尤其是果蝇三龄幼虫阶段的唾腺染色体,其唾腺染色体巨大,又称巨染色体本试验通过对果蝇唾腺染色体进行处理和观测来探求染色体的构造关键词果蝇唾腺染色体abstract:dro sophi1ame1ano gaster isa classic materialof studyinggeneti cs.asweall kn ow,drosophila me1anogaster hasa2n numb㊀rof8,which meanswe couldeasy too bserv eit.es pecially fori ts1a rvalsa1ivary ch romoso me,itisvery hugeand c1ea r.so itis call edhugechromosome.in thisexperiment throu ghthe observationofthesal ivary ch romosometoex plo rethestru ctureof ch romoso me.k eywords:droso philame1anogastersa1iv ar ychromosom试验原理果蝇三龄幼虫阶段的唾腺染色体处在体细胞同源染色体的配对状态,多次复制而不分开,因而形成比一般体细胞根染色体长倍的不螺旋的巨大染色质,又称为多线染色体,此外上100-200面还常能看到带纹本试验即观测唾腺染色体的特性试验用品黑腹果蝇,培养基,生理盐水,解剖针,蒸储水,石炭酸品红,载玻drosophi1a melanogaster片,溶液显微镜he1lmol/1,试验措施、三龄幼虫日勺培养试验前将果蝇放入新培养基培养,十天左右123°G-25°C、解剖幼虫2把载玻片置于双筒镜下载玻片上滴加生理盐水一滴,取三龄幼虫放在其中,操作者两手各握一枚解剖针,左手解剖针压住幼虫后端处,固定幼虫右手的解剖针按住幼虫头部,用力向右拉,1/3把头部从身体拉开,唾腺随之而出,唾腺是一对透明欧棒状腺体I、解离3在载玻片上除去幼虫其他组织部分,还要把唾腺周围的白色脂肪剥离洁净,再把唾腺移到洁净的、预先准备的滴有区载玻片上,解离分钟I lmol/1hcl J2—
3、水洗4蒸储水洗涤次3—
4、染色压片5石炭酸品红染色分后盖上盖玻片,压片,吸去多出染液
5、显微镜观测6先于低倍镜下观测,寻找细胞,再于高倍镜下观测染色体形态特点唾液腺染色体约条长臂,5点状染色体附着在染色中心附近,很难看到在染色体臂上有深浅不
一、宽窄不同样、粗细不同样日勺带纹试验成果
1.通过上述试验措施获得了图iJ1o讨论、在挑选幼虫时,要挑选个体相对较大,活动能力相对较强的个体
1、在解剖时,头部解剖针的位置大概在果蝇口勺眼睛处,后端部解剖针的位置为果蝇身体2的处在拉伸果蝇日勺时候力度要合适,肠管、神经管等所有戳断从而影响视线1/3。
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