AAV的包装纯化浓缩方法总结

）离心完毕后，将超滤管底用注射器用的针头（单独订购的针1io ml头）刺破，弃掉滴下的前两毫升，收集第三毫升到第六或七毫升使用过的针头需要用原来的针头盖盖好，并置于专门的装有的瓶子中，集中丢84弃，避免人员被针头刺到）由于超声这一步及在用将和沉淀上清中的病毒时，2NaCI PEG8000都有染菌的可能性，因此收集的四或五毫升液体需先用的双抗处理IX373小时，用稀释至用的滤膜过滤，以达到1PBS+

0.001%PF6815ml,

0.2pm除菌的目的）将过滤后的液体置于的超滤管）中，离315ml Q00KD3500ref,4℃心如果体积还不到理想体积，需要将离下去的液体弃掉，向超滤30min0管中加入稀释，再次离心每次离心前均需将超滤管PBS+

0.001%PF68中液体颠倒混匀，配平后进行离心，相差以内，尽量在以内）

0.1g

0.02g时间长短可以根据溶液的粘稠程度而定（不论第一次凝缩离心后管中剩多少液体都应用稀释后再离心一次，防止碘克沙醇及PBS+

0.001%PF68酚红残留过多））将超滤管中剩下的液体反复吹打后吸至病毒储存管中，将一定体积4的加入至浓缩管中，反复吸打混匀后将液体吸出，一PBS+

0.001%PF68般情况下浓缩离心完成后将剩余的液体吸出后用AAV PBS+

0.001%PF68洗两次，每次用左右,一般清洗时小体积为PBS+

0.001%PF68150pl100成体积太小容易在反复吸打的过程中产生气泡影响病毒的收集，终在病毒收集管管壁标明名称和日期即使离心后浓缩管中剩余的病毒体积与合同要求体积相近，也应用的清洗一遍1003PBS+

0.001%PF68）吸3病毒液进行滴度检测，滴度检测完成后将滴度标至管壁510注意事项、第一次病毒包装滴度不够首先加包装盘数；若第二次包装滴度仍1然不够，要对该目的基因功能进行分析，很有可能是目的基因的问题、纯化灌柱子时，在加层碘克沙醇时可迅速加入，只吸260%

4.2ml即可，在加入其它层时，移液管中吸取的液体要比要求加入的液体体积多防止将后一点液体加至离心管中时将下层冲散灌注时将管1ml,子倾斜，但是不要让下层的液体倾斜至管口下缘顶，要有一小段距离/否则容易串层、浓缩时反复吸打时避免产生气泡，否则会影响病毒的回溶和收3集、包装病毒转染时，在吸取质粒前要充分混匀，在打开管盖4EP时要避免手指接触管盖的内部，防止质粒间的污染EP、在纯化的操作时，尤其是重悬细胞沉淀及沉淀时，要避5PEG8000免移液枪的枪杆接触离心管管壁，每操作完一个病毒要用50ml喷上酒精的纸擦拭，防止粘在枪杆上的病毒污染其他病毒75%。