《抗体制备课件》课件

抗体制备欢迎参加抗体制备课程本课程将深入探讨抗体的制备过程、技术和应用我们将从基础概念开始，逐步深入到高级主题课程概述基础知识1我们将介绍抗体和抗原的基本概念，为后续内容奠定基础制备过程2详细讲解从免疫到细胞融合的整个抗体制备流程技术与应用3探讨抗体纯化、检测技术，以及在医疗、科研等领域的广泛应用高级主题4深入探讨工艺优化、产业化生产等高级话题抗体的种类多克隆抗体单克隆抗体由多个细胞克隆产生，识别抗由单一细胞克隆产生，高度特B B原的多个表位异性，识别单一表位重组抗体嵌合抗体通过基因工程技术生产，可进行将人源和鼠源抗体基因片段重组结构改造和功能优化，减少免疫原性抗原的类型蛋白质抗原核酸抗原最常见的抗原类型，包括细胞表面受或片段，在自身免疫性疾病DNA RNA体、酶等中常见多糖抗原脂质抗原细菌细胞壁成分，常用于疫苗开发某些自身免疫性疾病中的重要抗原免疫小鼠的过程1234抗原准备初次免疫加强免疫血清检测选择合适的抗原，确保其纯通过皮下或腹腔注射抗原，每隔周进行一次加强免采集尾静脉血，检测抗体效2-3度和免疫原性激活免疫系统疫，提高抗体效价价，决定是否继续免疫脾细胞融合制备单克隆抗体脾脏取出从免疫小鼠体内无菌取出脾脏细胞制备制备单细胞悬液，与骨髓瘤细胞混合细胞融合使用聚乙二醇（）促进细胞融合PEG杂交瘤筛选使用培养基筛选融合成功的杂交瘤细胞HAT杂交瘤细胞的培养和筛选有限稀释法筛选ELISA将杂交瘤细胞稀释至每孔一个细利用酶联免疫吸附试验检测分泌胞，培养形成单克隆抗体的阳性克隆流式细胞术克隆扩增快速筛选和分选高产抗体的杂交将阳性克隆进行扩增培养，获得瘤细胞大量单克隆抗体抗体的纯化技术亲和层析离子交换层析凝胶过滤层析利用抗原抗体特异性结合，高效纯化目基于抗体分子表面电荷，分离不同等电点根据分子大小分离抗体，去除聚集体和降-标抗体常用蛋白、柱的蛋白质解产物A G抗体的活性检测ELISA WesternBlot检测抗体与抗原的结合能力和特异性评估抗体识别变性蛋白的能力流式细胞术免疫荧光检测抗体与细胞表面抗原的结合观察抗体在细胞或组织中的定位抗体的应用领域基础研究1蛋白质检测、定位和功能研究诊断2疾病标志物检测、病理分析治疗3肿瘤靶向治疗、自身免疫疾病治疗生物技术4蛋白质纯化、生物传感器单克隆抗体的制备流程抗原设计1选择合适的抗原表位，进行免疫原性预测小鼠免疫2制定免疫方案，进行多次免疫接种细胞融合3脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤杂交瘤筛选4筛选分泌特异性抗体的杂交瘤克隆抗体纯化5大规模培养杂交瘤，纯化单克隆抗体单抗的制备工艺种子库建立构建稳定的杂交瘤种子库，保证抗体质量一致性细胞培养优化培养条件，提高抗体产量抗体纯化多步层析纯化，确保抗体纯度质量控制进行活性、纯度和安全性检测细胞融合技术法电融合法PEG使用聚乙二醇促进细胞膜融合，利用电场促进细胞融合，效率较是最常用的方法高但操作复杂病毒介导法纳米材料法利用某些病毒的融合蛋白促进细新兴技术，利用纳米材料促进细胞融合胞融合杂交瘤细胞的培养优化温度控制调节pH保持°恒温，避免温度波动维持培养基在之间37C pH

7.2-

7.4氧气供应营养补充保证充足的氧气供应，促进细胞生长定期更换培养基，添加必要的生长因子抗体活性测定的方法法法表面等离子体共振ELISA WesternBlot直接检测特异性测定结合动力学•ELISA••间接评估交叉反应亲和力分析•ELISA••竞争•ELISA抗体纯化的常用技术亲和层析1高特异性，一步获得高纯度抗体离子交换层析2分离带电荷的蛋白质，去除杂质疏水相互作用层析3分离不同疏水性的蛋白质分子排阻层析4去除聚集体和降解产物抗体在医疗领域的应用肿瘤治疗自身免疫疾病靶向治疗、免疫检查点抑制剂抑制免疫反应，缓解症状传染病治疗诊断试剂中和病毒、细菌毒素疾病标志物检测、病理分析抗体在科研中的应用免疫组织化学免疫细胞化学研究蛋白质在组织中的分布观察蛋白质在细胞内的定位免疫沉淀流式细胞术研究蛋白质蛋白质、蛋白质相分析细胞表面标志物表达--DNA互作用抗体在工业领域的应用生物传感器蛋白质纯化环境污染物检测、食品安全检测利用抗体亲和层析纯化目标蛋白生物催化纳米材料抗体酶在有机合成中的应用抗体修饰纳米材料，用于靶向递药如何设计合适的免疫程序抗原选择1考虑抗原的免疫原性、纯度和稳定性佐剂选择2根据抗原类型选择合适的佐剂，增强免疫反应免疫路径3选择皮下、腹腔或静脉注射等合适的免疫路径免疫周期4制定初次免疫和加强免疫的时间间隔效价监测5定期检测血清抗体效价，调整免疫策略如何提高杂交瘤细胞的稳定性亚克隆培养条件优化12通过有限稀释法进行多次亚克调整培养基成分，添加生长因隆，筛选稳定高产克隆子，维持最佳生长环境冻存管理基因工程改造34建立完善的细胞库系统，定期利用基因编辑技术提高细胞稳复苏和冻存定性和抗体产量如何提高抗体的产量和纯度细胞培养优化生物反应器技术纯化工艺优化选择高产克隆使用灌流培养多步层析结合•••优化培养基配方控制溶氧和优化洗脱条件••pH•控制培养参数优化补料策略引入膜分离技术•••如何验证抗体的特异性和亲和力流式细胞术表面等离子体共振ELISA WesternBlot测定抗体与抗原的结合能力和检测抗体对变性蛋白的特异性分析抗体与细胞表面抗原的结测定抗体抗原结合的动力学参-交叉反应性识别合特性数如何评估抗体的生物学功能中和试验细胞功能实验评估抗体对病毒、细菌毒素的中研究抗体对细胞增殖、凋亡等的和能力影响体内动物实验组织切片分析评估抗体在活体内的治疗或诊断研究抗体在组织中的分布和靶向效果性如何对抗体制备工艺进行优化细胞筛选利用高通量筛选技术选择高产、稳定的细胞克隆培养工艺优化开发或灌流培养工艺，提高细胞密度和抗体产量fed-batch下游工艺优化优化纯化流程，提高产率和纯度，降低成本质量控制体系建立全面的质量控制体系，确保抗体产品质量一致性如何确保抗体制备的重复性标准操作规程（）关键参数控制SOP12制定详细的，规范每个操识别并严格控制影响抗体质量SOP作步骤的关键参数原材料管理过程分析技术34建立原材料质量控制体系，确引入在线监测系统，实时控制保原料一致性生产过程如何进行抗体产业化生产工艺放大1从实验室规模逐步放大到工业化规模生产GMP2按照标准建立生产设施和质量管理体系GMP自动化生产3引入自动化设备，提高生产效率和一致性供应链管理4建立稳定的原料供应和产品配送体系法规合规5满足各国监管要求，获得生产和销售许可如何降低抗体制备的成本提高产量原料循环利用优化细胞培养条件，提高单位体积产开发培养基循环利用技术，降低原料量成本自动化生产工艺优化引入自动化设备，减少人工成本简化纯化流程，提高产率，降低能耗抗体制备技术的未来发展趋势基因工程技术人工智能应用新型表达系统基因编辑技术优化抗体序列，提利用技术优化抗体设计和生产工艺，提开发植物、昆虫等新型表达系统，降低生CRISPR AI高亲和力和稳定性高效率产成本结语技术进步应用广泛抗体制备技术不断创新，推动生抗体在医疗、科研、工业等领域物医药产业发展的应用前景广阔跨学科合作持续学习抗体研究需要多学科协作，促进抗体领域发展迅速，需要不断学学科交叉创新习新知识和技能。