枸杞多糖对糖尿病大鼠血糖水平及机体免疫功能的影响

•3208•.论著.枸杞多糖对糖尿病大鼠血糖水平及机体免疫功能的影响李晓冰，陈玉龙，展俊平，谢忠礼，朱艳琴，沈小君，李瑞琴【摘要】目的探讨枸杞多糖对糖尿病大鼠血糖水平及机体免疫功能的影响方法从70只Wister雄性大鼠中随机选取12只为正常对照组，其余大鼠尾静脉注射链腺佐菌素制备1型糖尿病大鼠模型（造模组）造模第7天将血糖水平

11.1mmol/L的48只大鼠随机分为模型组、多糖高剂量组、多糖中剂量组和多糖低剂量组，各12只经干预实验，比较各组大鼠血糖水平、脾脏指数、胸腺指数、脾淋巴细胞刺激指数及外周血淋巴细胞亚群T结果造模初始造模组血糖水平较正常对照组升高，差异有统计学意义（P

0.01）,说明造模成功

（1）第2周和第4周多糖组血糖水平均较模型组降低（P

0.01）,但多糖组两两比较，差异无统计学意义（P

0.05）

（2）多糖组的胸腺指数和脾淋巴细胞刺激指数均较模型组升高，差异有统计学意义（P

0.01）

（3）多糖组的CD

3、CD4及CDJCD8值较模型组升高，多糖组的值较模型组CD降低，差异有统计学意义（P

0.05）结论枸杞多糖具有较好的调节血糖水平的作用，其降血糖作用可能与改善糖尿病大鼠免疫功能低下有关【关键词】枸杞多糖；糖尿病，1型；大鼠；抗原，分化，T淋巴细胞【中图分类号】R

587.1【文献标识码】A doi:

10.3969/j.issn.1007-

9572.

2013.

09.093李晓冰，陈玉龙，展俊平，等.枸杞多糖对糖尿病大鼠血糖水平及机体免疫功能的影响[J].中国全科医学，2013,16

（9）:3208-

3210.（]Influ Xiao-bing,CHEN Yu-long,ZHAN Jun-ping,et al.School ofenceof LyciumBarbarum Polysaccharideon BloodGlucose andImmune Functionof DiabeticRats LIBasicMedical Sciences,Henan Universityof TraditionalChinese Medicine,Zhengzhou450008,ChinaTo observethe influenceof lyciumbarbarum polysaccharideon blood glucose andimmune function of diabeticrats.[Abstract]Objective Methods12Wister rats were selectedfi*om70as thecontrol group.The otherratswereprepared fbrtype1diabetes mellitusafter receivingintravenous injectionof STZ.After sevendays,48rats withblood glucosel

1.1mmol/L wererandomlydivided intomodel group,polysaccharide highdose group,middle dosegoup andlow dosegroup witheach12rats.After interventionexperiment,the bloodglucose,spleen index,thymus index,spleen lymphocyteconversion rateand peripheral blood T lymphocyte werecomparedbetween each group.At thebeginning ofmodeling,the ratsused forthe modelingshowed significantly higher bloodResultsglucoseP

0.01,indicating successfulmodeling.1Compared withthe model group,the bloodglucose in polysaccharide groupat week2andweek4was reduced,but therewas nosignificant differencebetween polysaccharidegroupsP

0.

05.2Thymus indexand spleen lymphocytestimulation indexin polysaccharidegroup weresignificantly higherthan themodel groupP

0.

01.3The CD,CD and CD/CD inpolysaccharide348group weresignificantlyhigherthan themodelgroup,the CD,inpolysaccharidegroup wassignificantly lowerthan themodel groupP

0.

05.Lycium barbarumpolysaccharide canreduce bloodglucose level,and itmay bedue tothe improvementof immunefunctionofdiabeticConclusionrats.【Lycium barbarumpolysaccharides;Diabetes mellitus,type1;Rats;Antigens,differentiation,T-lymphoyteKey words1基金项目国家自然科学基金

（81173177）;河南省教育厅自然科学省实验动物中心提供动物许可证编号为SCXK（冀）2008-l-003o研究计划（2010B360015）;郑州市科技创新团队资助项目（121PCXTD520）,主要药物及试剂枸杞多糖（批号宁夏启元药业

1.2H22023655,河南中医学院博士基金2010（BSJJ2010-10）有限公司），四甲基偶氮坐盐II（Methyl ThiazolylTetrazol ium,MTT,作者单位450008河南省郑州市，河南中医学院基础医学院（李晓冰，美国公司），链服佐菌素公司）;Amresco（Streptozo-tocin,STZ,Sigma陈玉龙，谢忠礼，朱艳琴，沈小君，李瑞琴）；中国中医科学院中医临床基鼠淋巴细胞分离液（深圳达科为生物技术有限公司），抗大鼠础医学研究所（展俊平）；上海中医药大学（展俊平）、FTTC-CD3PE-CDPE-CY54大量临床及药理实验证明，枸杞多糖具有降低血糖水平的功效糖尿抗体（美国公司）葡萄糖试剂盒购于南京建成-CD eBioscience；病患者在持续高血糖水平状态下易出现大血管及微血管并发症，诱发各种感生物工程研究所染及酮症酸中毒，这些并发症的出现与糖尿病患者免疫功能低下密切相关动物造模及分组只大鼠适应性喂养随机选取只为

1.3703d,12然而，目前关于枸杞多糖的报道多集中于改善糖尿病症状，对于具体机制研正常对照组，其余大鼠尾静脉注射制备型糖尿病大鼠模型STZ1究较少本研究从免疫学角度探讨枸杞多糖治疗糖尿病的机作为造模组第天尾部取血测血糖水平，选取血糖水平6],

711.1材料与方法1的大鼠只，纳入实验]将只大鼠随机分为组，模型mmol/L48484动物大鼠只，全部雄性，体质量由河北

1.1Wister70（200±20）g,组12只、多糖高剂量组12只、多糖中剂量组12只、多糖低剂量两两比较，差异无统计学意义（P

0.05,见表1）组只多糖低、中、高剂量组按照预实验分别按、、12100200400枸杞多糖灌胃给药，正常对照组和模型组使用同体积mg/kg

0.9%表1各组大鼠不同时间点血糖水平比较（xis,mmol/L）氯化钠溶液灌胃次持续周各组末次给药后腹主动1/d,424hTable IComparison ofbloodglucoseat differenttime ineach group脉取血，无菌取脾脏、胸腺组另U只数第2周第4周检测指标与方法

1.4模型组

1219.5±

3.

219.6±

3.8血糖水平测定按试剂盒说明书测定不同时间段（造模第多糖低剂量组

1215.8±

3.

415.5±

3.0*

1.

4.1多糖中剂量组、周）血糖水平

1214.9±

2.5*

14.9±

3.4*24多糖高剂量组

1215.3±

3.6*

15.2±

2.6*脾脏、胸腺指数测定乙懒麻醉取血后，处死大鼠剥离

1.

4.2F值

7.

3308.279脾脏、胸腺，称重脾脏指数二脾脏质量/体质量，胸腺指数二P值

0.

0000.000胸腺质量/体质量注与模型组比较，*P

0.01脾淋巴细胞转化实验取各组大鼠只，无菌取出脾脏放

1.

4.36入盛有少量磷酸盐缓冲液（PBS缓冲液）的培养皿中，用5nd注射

2.34周后脾脏指数、胸腺指数和SI的比较4组大鼠4周后胸腺器针芯研磨脾脏，移入离心管中，用吸管吹打数次，目尼龙300指数和的比较，差异均有统计学意义〈SI（P

0.05）布过滤，离心收集细胞，红细胞裂解液裂解红1500r/min5min,2ml多糖组的胸腺指数和均较模型组升高且多糖中剂量SI（P

0.01）,细胞，用缓冲液洗遍，计数，调整细胞浓度义也,PBS32106/96组和多糖高剂量组的均较多糖低剂量组高，差异有统计学意义SI孔细胞培养板每孔取细胞悬液，力口含新生牛100U1100u110%见表（P

0.01,2）血清及青、链霉素的培养基，每份标本重复个孔，其RPMI-16406中个为试验孔，每孔加脂多糖，另外个为对照孔置培320U13表各组大鼠脾脏指数、胸腺指数及比较2SI（x±s）养箱中在饱和湿度二氧化碳、条件下，培养加5%（CO37℃48h,Table2Comparison ofspleen index,thymus index,spleenlymphocytestimulation入口避光培养离心吸弃上清液，MTT101,4h;（400g,10min）,indices ineachgroup再加入二甲基亚碉溶液于酶标仪上测定波（DMSO）100U1,组别只数脾脏指数胸腺指数（mg/g）（mg/g）si长为时的吸光度值计算脾淋巴细胞刺激指数570nm（As）模型组

120.38±

0.

080.47±

0.

070.74±

0.18（SI）=An/Ao多糖低剂量组

120.42±

0.

080.95±

0.18*

0.93±

0.32*

1.

4.4外周血T淋巴细胞CD

3、CD4及CDs亚群的检测抽取大鼠多糖中剂量组

120.44+

0.

061.30±

0.24*

1.22±

0.19**抗凝外周血2ml,用RPMI-1640稀释1倍在15ml离心管中加入3nl多糖高剂量组

120.45±

0.

101.14±

0.15*

1.24±

0.24**1淋巴细胞分离液将经过稀释的血液平铺在淋巴细胞分离液液面F值

2.

39672.

72716.779上层，室温，800g离心20min吸出淋巴细胞层，再加入lOmlRPMI-1640P值

0.

0810.

0000.000培养基洗涤250g离心10min收集细胞用含5%新生牛血清的注SI二脾淋巴细月螂IJ激指数；与模型组比较，*P

0.01；与多培养免疫荧光染色，避光反应加入缓冲RPMI-164040min,5nli PBS液，离心弃上清液，加入缓冲液重悬细胞，上350g5min

0.5ml PBS周后外周血淋巴细胞值的比较组大鼠周后外周血淋

2.44T44T机检测并分析巴细胞、及值的比较，差异均有统计学意义CD3CDCD CD4/CD848统计学方法采用进行统计学分析计量资料以

1.5SPSS

15.0（x多糖组的、及PV

0.05CD3CD CD/CD448土表示，采用检验；多组比较采用单因素方差分析，组间s）t值均较模型组升高多糖组的值较模型组降P

0.01；CD两两比较采用最小显著差法检验，以〈为差异有统计学意P

0.05低，差异有统计学意义见表P

0.05,3义结果2表各组大鼠外周血淋巴细胞、及亚群免疫状态比较3T CD3CD CDs4造模初始造模组血糖水平为较正常对照x±s

2.1（

18.8±

3.8）mmol/L,组血糖水平（

5.6±L0）niniol/L升高，差异有统计学意义（t=

3.15,Table3Comparison ofperipheralbloodTlymphocyteCD,CD,CD348andCD/CD ineach groupP

0.01）,说明造模成功且模型组血糖48组别只数CD%CD%CD%CD/CD水平为（

18.8±

3.8）mmol/L多糖低剂量组为（

18.5±

3.2）mmol/L、4848多糖中剂量组为多糖高剂量组为模型组

1248.5±

10.

833.2±

11.

726.4±

6.

21.7±

0.3（

18.5±

2.5）mmol/L.（

18.4±

2.7）多糖低剂量组

1261.0±

15.9*

44.4±16,7*

21.2±

3.4*

2.1±

0.3*组比较，差异无统计学意义具有可mmol/L,4（F=

0.291,P

0.05）,多糖中剂量组

1263.6土

20.1*

44.4±

13.5*

20.5±

5.5*

2.2±

0.4*比性多糖高剂量组

1267.2±

19.5*

47.3±

15.8*

19.9±

6.0*

2.4±

0.4**_不同时间点血糖水平的比较组大鼠在第周和第周血糖

2.2424F值

3.

6062.

8524.

5529.838水平的比较，差异均有统计学意义第（P

0.05）2P值

0.

0210.

0480.

0070.000周和第周多糖组血糖水平均较模型组降低但多糖组4（PV

0.01）,注与模型组比较，与多糖低剂量组比较，’P

0.01;P

0.05;与多糖中剂量组比较，*P

0.05例而枸杞多糖降血糖功效与提高免疫力之间是否存在某种关联，还有待于进一步研究讨论3参考文献胸腺是T淋巴细胞分化和发育的场所，是机体重要的中枢免1赵蕊，李青旺，张冰梅.枸杞多糖-4a改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗作用的研究中国畜牧兽医，疫器官脾脏是最大的淋巴器官，也是重要的外周免疫器官之一，[J].2009,369:37-

42.含有大量的T淋巴细胞、自然杀伤细胞及淋巴因子激活的杀伤细2刘宏靖，李宏辉，张延，等,枸杞多糖对糖尿病雄性大鼠生殖损伤的保护作用时珍国医国药,[J].2011,229:2167-

2168.胞等脾脏也是对血源性抗原产生免疫应答的场所，因此，胸腺王继红，刘学政，那东波.枸杞多糖对糖尿病视网膜病变保护作用3指数、脾脏指数间接反映了机体的免疫状况本研究显示，经9的研究进展辽宁中医药大学学报，[J].2010,126:47-

49.枸杞多糖干预后，多糖组的胸腺指数和均显著升高，且中、高SI侯阳，刘学政，王继红.枸杞多糖对糖尿病大鼠血糖水平、血脂及4剂量的枸杞多糖较低剂量的枸杞多糖更有利于改善SI血-视网膜屏障通透性的影响中华实验眼科杂志，[J].2011,淋巴细胞亚群是反映机体细胞免疫功能的重要指标之一，T2911:964-

967.是成熟淋巴细胞重要表面标志，成熟淋巴细胞按表型不同，CD TT王妲，糖尿病与感染中华内科杂志，5[J].1997,3610:716-

717.3可将其分为和淋巴CDSCD+CD8CDSCDCD8T赵云芳，李晓冰，李瑞琴，等，降压调脂胶囊对糖尿病早期肾损6细胞，这两类细胞又简称为CD+T淋巴细胞和CDT淋巴细胞CD/CDo害模型大鼠N0S和ETT表达的影响[J].中成药，2009,314:可直接反映宿主淋巴细胞亚群的紊乱状态，且在一定程度上可523-

526.T赵云芳，耿宏伟，李瑞琴，等.降压调脂胶囊对糖尿病早期肾损害间接反映细胞免疫功能情况通常认为比值上升提710CD/CD4O大鼠和表达的影响中国中医基础医学杂志，PKC TGF-31[J].2011,示免疫应答的正调节占优势，而比值下降提示免疫功能低下本173:284-

286.研究模型组明显下降，提示糖尿病大鼠细胞免疫功能低下CD,张旭，张国蓉，车伟，等，胶原蛋白多肽-格螯合物对糖尿病小鼠8经枸杞多糖干预后，多糖组均显著回升，说明枸杞多糖可部分CD,免疫力的影响中国实验动物学报，[J].2008,161:10-

13.提升高血糖大鼠的细胞免疫功能本研究中模型组大鼠较多糖组李淑子，金在久，张善玉，泽泻不同提取物对高脂血症小鼠血脂9大鼠的细胞下降，而细胞比例上升，值显著降低，CD4CD CD/CD及脂质过氧化的影响中国实用医药，[J].2008,332:

9.48提示糖尿病大鼠机体免疫力下降；经枸杞多糖干预后，较之模型10Woodland DL.Cell-mediated immunityto respiratoryvirus infections组，多糖组值显著上升说明枸杞多糖可促进辅助性淋巴[J].Curr OpinImmunol,2003,154:

430.CD/CD,T赵宏艳.灵芝多糖对荷瘤小鼠肠道黏膜免疫功能的影响中细胞增长，对糖尿病大鼠免疫紊乱有调节作用11H22M.国中医科学院，

2008.综上所述，枸杞多糖可在一定程度上提高糖尿病大鼠的胸腺收稿日期修回日期2013-01-06;2013-06-15指数和改善糖尿病大鼠外周血淋巴细胞、及亚群比SI,T CD3CD CD4O本文编辑李晨关注中国全科医学微博传播全科医学服务理念松博池址/http://weibo.eom/u/chinagpgp博客地址/1874203。