常用消毒方法资料

糖度计溶液得浓度用密度法来表示，即用密度计测定糖水得浓度则用糖度计Sacchrometer、波林糖度计Balling或白利糖度计Brix测定,其中最常用得就是白利糖度计测定糖液用得3种密度计得标度完全一致，均直接表明了糖液浓度得质量百分率相对密度就是任何溶液得质量与同容积水得质量得比值，它随温度变化而变化，因此测定时必须校正温度3种糖度计在使用时也必须校正温度各种糖液密度计上每一表度相当于1%蔗糖溶液得质量百分率即使糖得种类不同，只要浓度相同,它们各自得相对密度就会非常接近例如每100mL含糖量为10g得糖液，相对密度20/4°C几乎都等于

1、0386,因此，糖液密度计可用于测定任何糖溶液得浓度为了准确起见，每支糖度计得标度范围以10糖度即浓度变化为10%为宜波美计标度由于能转化为密度读数，所以也可用以检测糖水浓度,但从该表上不能直接读得糖液浓度百分率，需要进行转换纯糖溶液内可溶性固形物全为糖类，故能测定糖液浓度，使用时要注意温度得校正Brix波美度就是以100克蔗糖水溶液中所含得蔗糖含量为标度如果样品所含得可溶性固体分得主要成分为砂糖,BRIX值可叫做糖度如果测量包含糖以外得可溶性固体得样品,BRIX值可叫做样品中可溶固体得综合浓度采用固体菌种接种固体三角瓶:加水120%培养48小时

3、帘子曲培养基85%放皮』0%豆粕，稻壳5%,

0、5%氢氧化钠，加水120%,控制水分约60%培养48小时

4、通风曲池款皮95%5%稻壳,要求入池水分60%o

四、操作工艺

1、采用无菌接种操作将保藏固体斜面转接至生产固体斜面，于35℃培养72小时

2、取一环固体斜面菌种采用无菌操作接种至液体三角瓶（500毫升三角瓶装液体80-100毫升）35℃培养48小时定期摇动

3、液体三角瓶摇匀后转接至固体三角瓶每个固体三角瓶接种量约20毫升菌液摇晃均匀,35℃培养48小时

4、固体三角瓶接种帘子曲接种量为

2、5%要求无菌操作控制品温30-40℃,控制环境湿度o90%o

5、通风曲池接种量

0、5%-l%o温度控制40℃以上，最高不超过50℃培养时间约48小时

五、采用全液体制作菌种工艺流程斜面一500毫升三角瓶装液体100毫升--3000毫升大三角瓶装液体1000毫升塑料桶——通风曲池采用液体三角瓶培养基1或2（用3—5%糖代替葡萄糖）塑料桶培养基采用蒸汽煮沸30分钟，接种后培养48小时通风曲池接种液体菌液量不低于10%o斜面采用营养琼脂培养基三角瓶采用肉汤培养基（加

1、5%葡萄糖）大桶培养基:玉米粉3%,扶皮1%,豆粕3%,磷酸二氢钠

0、3%硫酸釜

0、3%用氢氧化钠调PH

7、1—

7、4,37度培养36小时通风曲池85%放皮」0%豆粕,5%稻壳,控制入池水分60%要求入池后立即通风调品温45度,以拟制酵母、霉菌以及产酸细菌生长最高品温不超过55度不低于40度培养48小时

六、注意事项调PH用氢氧化钠要溶解与物料混匀，杜绝局部PH过高通风曲池培养品温略高可以拟制产酸细菌、酵母、霉菌生长前期要求控制温度、湿度为主，控制稍高得温度，使细菌尽快形成生长优势，要求间断通风每2—3小时通风一次后期要求连续通风，受设备环境限制培养温度可以降低芽匏杆菌为好氧菌，后期呼吸量大必须注意氧气得供给培养过程中出现刺鼻氮味、物料发粘、轻微臭味为正常,不能出现酸败味道与明显得臭味生香酵母液体种子生产工艺一,＞工艺流程:一级种子固体斜面培养48小时---------二级种子液体三角瓶培养48小时——三级种子夹层锅或塑料桶培养及菌种分割

二、培养基

1、生产斜面培养基1）酵母基本培养基:糖10%,酵母膏4-6%,磷酸二氢钾

0、1%,七水硫酸镁

0、1%,PH

4、7,121℃灭菌20分钟保藏斜面糖添加比例为5%o2）麦茅汁培养基或米曲汁要求12波美度3）玉米粉糖化液培养基要求12波美度

2、液体三角瓶培养基1）糖10%,酵母膏4—6%,磷酸二氢钾

0、1%,七水硫酸镁

0、1%,PH

4、7,121℃灭菌20分钟2）麦芽汁培养基要求12波美度3）玉米粉糖化液培养基要求12波美度

3、夹层锅培养基1）玉米粉糖化液玉米粉1:4—5加水---加热至|80℃加入淀粉酶，液化15--20分钟，以液化液遇碘反映棕黄色为液化完全-------------------加热到100℃5分钟---------降温到55—60℃加入糖化酶，糖化3—4小时——降温到30—35℃接入液体三角瓶2）红糖培养基糖7—10%,化肥

0、5%磷肥

0、15%款皮6%,调PH

4、7,加热到100℃煮沸20—30分钟灭菌,---冷却到30--35℃接入液体三角瓶

三、生产工艺1）固体斜面无菌操作接种后于28—30℃培养48小时培养好后0--5℃冰箱存放2）固体斜面菌种无菌操作接入液体三角瓶，于28--30°C培养48小时中间经常摇动要求培养完毕轻轻摇动即可见大量泡沫出现，并有浓郁酒香味，无酸味臭味等邪杂味要求显微镜观察酵母细胞健壮,出芽多，无老化死亡现象，无其她杂菌3）液体三角瓶转接到夹层锅培养一段时间后打开搅拌以增加溶氧控制培养液温度28-32℃培养时间约12小时4）菌种分割夹层锅培养完毕预留部分菌液其余转入四级培养然后重新制备三级培养基后接入预留菌液继续培养要求分割后加入青霉素以拟制细菌

四、酵母工艺流程斜面__500毫升三角瓶装液体150毫升一-3000毫升大三角瓶装液体2000毫升---塑料桶-一通风曲池三角瓶用麦芽汁培养基,30度培养48小时塑料桶用糖化玉米粉，波美度10—12,培养24小时每级扩大倍数为10倍种子分割:每次剩余约五分之一培养液,继续添加灭菌新鲜培养液培养定时检测酸度与用显微镜观察，当酸度上升或者酵母形态异常时停止分割塑料桶液体一曲池接种量为10%o通风曲池控制入池水分50%左右，培养30小时温度最高不超过40度不低于30度室温不低于25度菌种保藏保藏温度4—6摄氏度细菌要求每月移植一次，酵母与霉菌3月移植一^欠保藏时观察冰箱温度、湿度、试管棉塞就是否有长霉现象，如有异常应立即取出重新移植每次移植应与原种进行菌落、细胞形态对比,必要时做生产性能检测应保藏相继得三代培养物，以便对照用于斜面保藏得培养基要求含氮多，少含或者不含糖分即满足菌种生长繁殖需要，又防止产酸过多影响菌种保藏缺点:菌株仍有代谢活性，保藏时间不能太长，传代多，易变异生产用斜面要求营养丰富细菌用营养肉汤培养基,37度培养3天酵母菌用麦芽汁培养基,28—30度培养3天霉菌采用麦芽汁、款皮汁或察氏培养基,30度培养4—5天定期移植保藏法试管接种方法接种前手灭菌，将试管菌种，斜面培养基及其她用具用酒精消毒，一手拿菌种与培养基试管，一手拿接种针在酒精灯上灼烧，凡就是进入试管得部分都必须灼烧,待冷却后把试管移近酒精灯，用右手小指无名指拔去棉塞用手指夹住，管口应在酒精灯火焰无菌区内,棉塞不得接触其她东西，迅速把接种针伸入试管内，将针头在边缘处无菌种得地方插入培养基冷却一下，挑去健壮菌种迅速伸入待接种得试管内，在离管底约

0、5厘米处由下向上轻轻地划线接种，不可将培养基表面划破接种完毕将棉塞在火焰上轻烧后塞入试管，再将试管口外壁轻烧接种后接种针用火焰灼烧后才能再次接种，接种过程中试管口不能离开火焰接种完毕熄灯，试管取出贴好标签，注明菌名接种日期，接种人，然后保温培养霉菌生产方法工艺流程:保藏斜面种子一1级生产固体斜面或茄子瓶——2级三角瓶—3级帘子—4级通风曲池

一、三角瓶接种培养选择大片放皮于500毫升三角瓶,11克加自来水12毫升，摇匀，塞棉塞包防潮纸，灭菌，取出三角瓶，冷却到略烫手时趁热将瓶中料打散，冷却后易结块不好打散接种，左手拿三角瓶及试管菌，右手拿接种针与棉塞,每三角瓶接入2针菌种，摇匀，右手握住瓶在左手掌上摇动碰撞10多次，摇动完毕,将三角瓶倾斜，使培养基堆积在瓶一边待全部三角瓶接种完毕，将三角瓶轻轻直立放入培养箱,30—32度培养16—20小时（依菌种而定）瓶中布满菌丝，结块发白,按上述摇瓶方法摇动，使结块松散，然后平摊在瓶底上继续培养5—8小时，瓶中料布满菌丝而结饼，进行扣瓶,右手握住三角瓶颈在左手掌上碰撞一下，使料离开瓶底悬在三角瓶中,扣瓶后三角瓶卧放培养,摇瓶扣瓶目得使培养基上下内外接触空气，一般培养72小时三角瓶菌种生长成熟成熟后进行烘干，烘干温度35—40,不可超过40,烘干后水分低于10%,然后可装入纸袋扎好口，放入冰箱备用，严禁吸潮白曲培养3天根霉培养2天

二、帘子曲块皮加水100%灭菌，出锅装入筐中，双手灭菌，穿工作服,冷却到36—38℃，接入三角瓶种曲，先将三角瓶种曲与适量灭菌干扶皮拌匀,分撒入曲料，混匀，用纱布抱起来堆积培养500克三角瓶种子接种12—14公斤帘子堆积培养开始品温30℃,水分50—53%,酸度

0、3—

0、5,室温29左右,干湿球相差1—2度，刚开始处于抱子发芽期,产热少，用室温维持品温,堆积有利于保温保湿，曲料不易失水堆积37小时翻拌一次，再经5小时左右,曲料变白结块，品温接近38℃,将曲料打碎，迅速上帘上帘应轻松均匀，摊平，厚度

1、5厘米左右，盖灭菌湿润纱布，纱布含水不易多，严禁有水滴入曲料，室温28℃左右，湿度85—90%,品温30—

32、上帘后5—6小时，曲料上呈白色菌丝，品温升高到36℃左右，有结块现象，划头遍曲，要求将曲料捏碎,用小喷雾器均匀喷洒补加30%-40%得40℃温开水在经过6—8小时,菌丝大量生长，划2遍曲划头遍曲后品温上升较快，室温25℃左右，地面洒水，湿度85%,保持纱布潮湿，控制品温35℃左右,不超过38℃,曲料颜色逐渐变深再经过10多个小时,品温开始下降，调节室温使品温不低于30℃,到72小时左右，根据曲生长情况,地面停止洒水，室温30℃,进行排潮干燥，种曲外观成块状，内部松散，用手指一触可见大量抱子飞扬，种曲晾干存于阴凉干燥处，防止吸潮种曲室要求容积小,屋顶有保温层防冬季冷凝水下落顶弧形，有门窗及天窗，利于保湿通风，调温湿度,便于卫生灭菌，排水保暖良好种曲要求抱子多，出芽率高，杂菌少种曲室及工具每次使用前洗净消毒，操作人员穿干净工作服，操作时双手灭菌原料加水量视原料性质、气候与菌种而定一般要求:用手轻轻得揉捏原料可以成团，再用手一弹可以散开若熟料水分大，出现料发粘不松散成团块，不利于空气流通，影响霉菌生长

三、通风曲池每次蒸料1200公斤数皮，加少量稻壳，接种帘子曲6—7公斤入池后通风调整物料温度28-30,并使物料品温一致，吹去浮水前期间歇通风阶段，维持品温28-32℃,当温度接近34℃左右通风打凉到30风量要小,时间要长均匀吹透中期维持36-38o后期降低湿度排潮维持品温不低于30度要求品温最高不超过38度白曲培养30小时根霉培养24小时常用消毒方法

1、酒精量取790毫升95%酒精加蒸锵水定容1000毫升为75%酒精皮肤、温度表、器械表面不使用伤口与黏膜杀菌效率90%

2、甲醛溶液房间、器械、衣服等消毒，不适用食品场所消毒50—250毫升37-10%福尔马林，加蒸馅水至1000毫升，即2—10%浓度甲醛溶液10%甲醛溶液用于熏蒸，熏蒸直接加热或者加入高镒酸钾密闭6—24小时甲醛气体熏蒸用量18毫升/立方米，加3—6倍水,煮沸加入高镒酸钾量相当于福尔马林40一50%o漂白粉用量相当于福尔马林得60—80%,使用时加入相当于福尔马林50%得水密闭12—24小时加热法25—50毫升/立方米，可杀死芽袍福尔马林一高镒酸钾40毫升---30克高镒酸钾/立方米漂白粉法20毫---------20克/立方米熏蒸24小时后方可进入刺激性、毒性

3、漂白粉

0、5—5%地面或物体表面腐蚀金属及织物，刺激皮肤用于芽胞10—20%,1000毫升/平方米,1一2小时

4、新洁尔灭

0、25%皮肤或器皿表面

5、来苏水刺激小,1一5%,家具物品表面

6、蒸汽消毒手提灭菌锅

0、11MP15—35分钟121度

7、干热灭菌玻璃仪器及不使用湿热灭菌得物品160度1-2小时

8、硫磺熏蒸3克/立方米，放于小木材之上燃烧房间保持潮湿强烈刺激性、毒性常用培养基

一、款皮汁20%款皮煮沸1小时过滤酵母加5%蔗糖用于霉菌、酵母

二、麦芽汁培养基大麦芽粉碎加4倍60℃水，于55-60℃保温糖化4—5小时（最好做淀粉试验不显蓝色为止），不断搅拌保温完毕，用纱布过滤，收集滤液，煮沸，再用滤纸或脱脂棉过滤，得澄清麦芽汁如果要求不高也可只过滤一次每1千克麦茅粉可制15—18波美度麦芽汁3500—4000毫升制作培养基时将麦芽汁稀释到10—12波美度，固体斜面加2%琼脂,PH自然,115℃灭菌20分钟适用酵母、霉菌

三、霉菌三角瓶用小米培养基小米洗净加20%款皮，按1:

1.2加水，常压蒸熟30分,分装试管或三角瓶，灭菌备用

四、米曲汁1千克大米洗净，加水5千克，蒸1小时使大米稀烂成粥状，冷却至60度,冷却到60℃加入米曲（或用根霉曲、白曲或者大曲代替，一般大曲加入30%左右,白曲、根霉20%左右），再加水4千克（水可适量少加以提高滤液糖度）,55度保温4小时，煮沸，过滤，滤液加水调整为10—12糖度用硫酸调PH,霉菌调

6、0左右,酵母调

5、0左右，也可自然PH固体培养基加2%琼脂，分装试管，灭菌备用适用酵母、霉菌霉菌种曲质量观察1取培养成熟种曲于光线较强处观察菌丝生长情况与施子色泽2取少量种曲闻就是否有曲香3取种曲掰开瞧内部就是否有夹生或白心现象4观察整批种曲，观察就是否有与种曲菌丝抱子色泽不吻合得其她杂菌存在，记录形态大小特征色泽检查记录每批种曲感官质量种曲记录培养时间、温度、配料记录、翻曲记录化验检测水分、抱子数、匏子发芽率种曲抱子数不足或者抱子繁殖力差，易造成污染曲料含水高,培养温度高，湿度大，氧气供给不适都易造成污染种曲培养中温度超过37℃易生水毛（毛霉），低于28℃易染青霉,青霉在较低温度下容易繁殖，菌从绿色,大量繁殖后产生霉臭气味制曲主要污染得细菌为小球菌，该菌好气繁殖速度较霉菌酵母快枯草芽抱杆菌，耐热，污染后会造成曲子发粘，严重时有异臭，产生氨味种曲外观:外观无杂菌，匏子整齐旺盛,无夹心，无青霉及其她异色，匏子数达到30亿/克以上，发芽率在90%以上，杂菌8千万/克以下种曲外观:外观无杂菌，抱子整齐旺盛,无夹心，无青霉及其她异色，匏子数达到30亿/克以上，发芽率在90%以上，杂菌8千万/克以下水分少则匏子少而瘦弱白曲培养于麦茅汁培养基,菌从为肉桂色，菌丝无色，匏子球形,发育适温32--35℃,有生酸能力生产菌种性能衰退、退化检查霉菌菌丝不健壮，产施子数减少,生产性能减弱，菌落颜色变深,斜面试管生长缓慢，菌落形态改变制曲培养时曲料发硬红曲霉色度降低白曲颜色变深酵母菌出芽缓慢，或不出芽而形成抱子酵母菌落正常光环湿润,退化后出现褶皱型，菌落变小显微镜出芽不规则，细胞形态不规则菌种退化最易观察菌落与细胞形态改变培养基得配制与灭菌

一、器皿得清洗1新玻璃器皿含有游离碱,一般先将其在2%盐酸溶液中浸泡数小时，再用水清洗干净，也可将器皿先用热水浸泡，再用去污粉或肥皂粉刷洗，再经热水洗刷,自来水清洗2用过得玻璃器皿，若盛有废弃物,先经高压灭菌后清洗，对只带有细菌标本或培养物得器皿，用过后应立即将其浸泡于2%来苏水中经24小时再取出清洗对于普通培养基必须煮沸30分钟后在清洗用蜡封口得试管先高压蒸汽灭菌，然后取出趁热拔去粘有蜡得棉塞，立即倒去培养物,再将试管放入温水稍加洗刷后放入5%肥皂水内煮沸5分钟去除油污后清洗加过消泡剂或者做过通气培养得大三角瓶，一般将倒空得瓶子用碱粉或10%火碱水刷洗后再用水洗管壁上粘有培养物，用试管刷难以去除，可以铁丝绑上纱布，润湿后沾去污粉擦洗吸过菌液得吸管,用完后应放在5%石炭酸溶液内消毒，未吸过菌液得吸管用后放于清水中防止干燥吸过带油液体得吸管应先在10%氢氧化钠溶液中浸泡半小时，去掉油污再清洗培养基得制备大致过程配料一溶解一校正PH—加凝固剂一融化一过滤一分装一加棉塞一包扎一灭菌一无菌检查1溶解配料制备培养基先在烧杯中加入所需水量得一半，按配方称取各种材料依次加入水中，逐个溶解，最后加足水量在加料过程中，各种成分溶解得次序先加缓冲化合物—主要元素一微量元素一维生素等2调PH配料溶解完毕，冷却到室温，再加入酸或者碱要缓慢少量，多加搅拌，防止局部过酸过碱而破坏营养成分，常用10%氢氧化钠与6摩尔/升盐酸调PH3配置固体培养基时，需加入琼脂或者明胶等凝固剂若以琼脂为凝固剂月帛琼脂加入贰沸得培养基中，不断搅拌至溶化，最后补足蒸发得水分4过滤，在两层纱布中加脱脂棉，趁热过滤5分装，装入试管得固体培养基不易超过试管高度得1/5o装入三角瓶中得液体培养基不超过总体积得一半切勿使培养基沾污试管口与瓶口O6包扎做通气培养可用6—8层纱布代替棉塞7灭菌固体试管培养基斜面长度不超过试管一半8无菌检查将培养基放入培养箱做培养做无菌检查固体试管应烘干试管内壁得水分培养基灭菌方法液体及琼脂固体培养基一般121℃灭菌20分钟，若容器大，粘度大,培养基多应延长时间明胶培养基112℃灭菌25分钟，最高温度不应超过112℃,否则明胶凝固能力消失马铃薯培养基因含有抵抗能力很强得马铃薯杆菌,121℃灭菌30分钟培养基灭菌时会发生各种变化,只有极少数培养基对热完全稳定大多数糖类灭菌都发生改变，可能形成对微生物有毒害得物质，含糖高得培养基灭菌后颜色变深培养基蛋白质含量越高，杀菌速度越慢麦芽汁、米曲汁灭菌后大分子物质凝集会发生沉淀甲醛对细菌与酵母杀菌效果好,硫磺对霉菌效果好甲醛熏蒸，按甲醛用量得一半称取高镒酸钾于瓷碗或玻璃容器内，再量取甲醛，倒入容器，立即关门，几秒种后甲醛即可挥发熏蒸至少在使用前24小时进行，熏蒸后密闭保持12小时熏蒸完毕量取为甲醛一半得氨水迅速放在室内，可以很快减弱甲醛得气味硫磺熏蒸在地面上洒水，曲室密闭，室内保持一定湿度，将硫磺用火燃烧,生成二氧化硫（有刺激性与毒性），与空气中得水结合生成亚硫酸杀菌,用量一半2—3克/立方米定期对无菌室、实验室、发酵车间等处得环境进行检查做到心中有数,以便采取措施对空气环境消毒检查空气含菌程度得方法，用普通肉汤或麦芽汁琼脂培养基制备平板,取平板放置于四角与中间区域,每处放2个平板打开一个平板暴露5分钟，另一个平板做空白对照,然后于30-32℃培养48小时，观察有无菌落生长,计数淀粉酶、糖化酶、纤维素酶都就是诱导酶，这类酶得形成只有在底物存在时才能生成，但淀粉含量过高则霉菌易产酸影响质量细菌曲生产工艺细菌斜面菌种保藏细菌菌种保藏采用牛肉膏蛋白陈培养基培养基配方牛肉膏

0、5%蛋白脓1%氯化钠

0、5%PH

7、2—

7、4,121℃灭菌20分钟固体斜面接种后于35℃培养3天放置于冰箱4-6℃保藏芽抱杆菌每3月移植一次

二、生产工艺流程生产用固体斜面一液体三角瓶一一固体三角瓶――帘子种曲---通风曲池

三、培养基

1、液体三角瓶与生产用固体斜面培养基1）葡萄糖1%牛肉膏

0、3%蛋白陈1%酵母膏

0、4%七水硫酸镁

0、2%PH

7、2—

7、5加

2、5%琼脂，115℃灭菌20分钟（压力

0、075）35—37度培养3天2）3%豆粕

2、5%款皮1%玉米粉煮沸30分钟过滤，补足蒸发得水分——取滤液加酵母膏

0、3%葡萄糖

0、5%,调PH

7、2—

7、5加

2、5%琼脂115℃灭菌20分钟

2、固体三角瓶85%款皮,10%豆粕，稻壳5%,

0、5%氢氧化钠，若采用液体菌液接种固体三角瓶时:加水60%,以控制物料最终水分60%为准。