甘油的检测方法汇总

甘油得检测方法汇总在发酵行业中,甘油作为底物,就是发酵液中生物合成得直接前体,会影响外源蛋白得启动表达效率,其含量得高低直接影响产物得发酵单位,就是决定菌种取舍得重要指标,就是提高工程菌得发酵密度,提高产品生产率得关键在生物柴油生产中，它就是副产物,其含量直接影响生物柴油得使用性能,就是衡量生物柴油产品品质得重要指标之一此外,甘油能与水结合以防止红细胞得冷冻损伤,能延长红细胞得保存期,被普遍用作细胞内冷冻保护剂等由于甘油用途很广，因此其含量得测定具有非常重要得意义目前国内外甘油含量得测定方法较多，主要有高碘酸氧化法、C/+络合比色法、酶比色法法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、近红外光谱法以及原子吸收法等下面将对其进行简要概述

一、高碘酸法

1、原理:高碘酸氧化法就是目前常见用于甘油含量检测得方法,利用高碘酸与甘油发生氧化还原反应,剩余高碘酸及反应生成得碘酸与碘化钾反应生成碘,再用硫代硫酸钠进行滴定,根据消耗得硫代硫酸钠得量来计算甘油得含量

2、操作步骤准确发酵液10ml于100mL小烧杯中，加少量水溶解,然后转移至100mL容量瓶中，用水稀释至标线,摇匀，静置用移液管准确移取10mL上述溶液于碘量瓶中，加入20mL高碘酸钠溶液,混合均匀后,于黑暗中避光静置40min,然后加入碘化钾溶液与20%盐酸溶液各15mL,调节pH值在

0、

81、0之〜间,然后用硫代硫酸钠标准溶液滴定,近终点时，加入2mL淀粉指示剂溶液,继续滴定至溶液蓝色消失同时做试样空白

3、计算式中:w——样品中甘油得含量，%;VI——空白试样消耗硫代硫酸钠标准溶液得体积,mL;V2——试样消耗硫代硫酸钠标准溶液得体积,niL;C——硫代硫酸钠标准溶液得浓度,mol/L;M——甘油相对分子质量；

二、酶比色法

1、原理:它就是利用酶得特异性催化反应建立得测定甘油得一种酶学方法,就是指甘油在甘油激酶作用下转化为3-磷酸甘油,后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羟丙酮与过氧化氢,然后过氧化氢与4-氨基安普比林、4-氯酚在过氧化物酶催化下反应生成紫兰色、能在500nm左右有特征吸收峰得醍亚胺,通过颜色深浅即吸光度得变化测定所生成得H0,甘油得含量与生成得乩2成正比,这样用比色22法就可以测定甘油得含量

2、操作步骤波长:500nm480~520nm反映温度37℃比色杯光径:1cm取一定量R1参瞧R2瓶签加入1瓶R2中，溶解后即为工作液,工作液预先保温至测试温度空白管校准管样品管工作液1ml1ml1ml

0、0100蒸储水

0、01标准品

000、01样品分别混合均匀,在反应温度保温10分钟，以试剂空白管校零，记录校准及样品0D值

3、计算甘油浓度二A样品/A校准X校准浓度mmol/L或mg/dl

三、高效液相色谱法

1.原理:高效液相色谱法HPLC得原理就是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性得单一溶剂或不同比例得混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相得色谱柱,利用色谱柱对待测混合物先进行分离,然后再进行检测,从而实现对试样得分析，因而其测量得准确性与精确度较高，目前已成为检测生化分子较常用得一种方法

2.操作步骤1首先用水将发酵液稀释

2、5倍,然后加H3PO,调pH至

5、5,在转速8000r/min、温度4℃下离心lOmin,经微孔滤膜过滤用于HPLC分析；2将甘油标准系列溶液在最佳色谱条件下进行HPLC分析，以峰面积外标法定量得到甘油标准曲线；3按照样品预处理方法处理后进样5微升,记录峰面积，代入线性方程中，计算其测定值将计算值乘以稀释倍数后，即得发酵液中甘油得含量气相色谱法

1、原理:气相色谱分析法就是用于分离分析复杂样品中得化合物得一种方法,其原理就是一定量得气体或液体分析物被注入到柱一端得进样口中,在载气带动下通过色谱柱,分析物得分子会受到柱壁或柱中填料得吸附由于不同得样品具有不同得物理与化学性质，与特定得固定相有着不同得相互作用，使得每一种类型得分子都有自己得通过速率，因此,分析物中得各种不同组分就会在不同得时间到达柱得末端,从而得到分离当化合物从柱得末端流出时,它们被检测器检测到,产生相应得信号,并被转化为电信号输此从而确定每一个组分到达色谱柱末端得时间顺序以及每一个组分得含量

2、操作步骤1标准溶液得配制在7个25mL容量瓶中分别准确称入

0、

0、

05、

0、

1、

0、

2、

0、

3、

0、

4、

0、5g甘油精确至

0、Img,再分别移入2mL内标贮备液,用混合溶剂定容并摇匀，作为标准工作溶液其中甘油质量浓度分别为

0、

2、

4、

8、

12、20g/L,内标质量浓度均为8g/L⑵样品得制备在25mL容量瓶中加入5nli得发酵液样品，移入2mL内标贮备液,用混合溶剂定容至刻度并摇匀3GC条件色谱柱:HP-5石英毛细管柱,30m柱长X

0、32mm内径义

0、2511m膜厚柱温:初始温度120℃,保留5min,以20℃/min升至290℃,保留lOmin进样口温度280℃,进样量:

0、2uL,分流比1001检测器FID温度:300℃,氢气流速:40mL/min,空气流速:300mL/min°载气氮气,流速ImL/min,恒流模式4进样,计算

五、酶电极法

1、检测原理利用生物酶只能催化一种或一类底物得性质，将甘油氧化酶进行固定化处理，样本中得甘油在甘油酶膜得作用下被催化生成过氧化氢，根据电化学得原理，过氧化氢得浓度与电压值正相关，根据标准液、缓冲液得电压值响应值来确定样本中甘油浓度电压值与浓度的相关性分析甘油浓度与电压值相关性分析甘油分析仪电压值

2、操作步骤按相关操作说明进行整个检测过程不超过45秒应用范围发酵过程甘油浓度检测，食品中甘油检测，西尔曼科技有限公司国内唯一一家有能力生产可以不用预稀释样本就可以检测高达甘油浓度得分析得制造商1

六、总结甘油得测定方法很多，最常用得就是化学法化学法测定甘油含量费用较低,但操作繁琐，试mV剂用量大,耗时长，且有时误差极大酶法测定甘油专一性强,只与溶液中得甘油特异性地反应,但所需试剂昂贵，不利于工业应用与大量样品得检测测定游离甘油最灵敏得方法就是气相色谱法、液相色谱法，精确度较高，但需对甘油进行硅烷化，操作麻烦,成本也较高由于高碘量法受发酵液中得杂质（糖类、多元醇）影响大，特别就是发酵中甘油含量低时，单用此方法检测基本不准确;高效液相色谱法检测准确，但发酵样品前处理工作量大,不适合产生大量样品得因此使用酶电极法测定发酵液中甘油含量,具有速度快、专一性强，由于固定化酶可以重复利用，单次检测相对于酶比色法具有更低得成本。