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第一章、植物组织培养是指在离体条件下，运用人工培养基对植物的器官、组织、细胞、原生质1体等进行培养，使其长成完整植株
2、外植体在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物上提取下来日勺、接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等均称为外植体、愈伤组织指在人工培养基上由外植体长出来日勺一团无序生长的薄壁细胞3I、应用4
一、农业上的应用种苗迅速繁殖（）
1.rapid propagation.无病毒苗（）的培养2virus freeJ.在育种上日勺应用（）3breeding
（1）倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显；（）克服远缘杂交的不亲合性和不孕性（胚培养）；2
（3）保留种质
（4）发明变异
二、在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面口勺应用用于基因工程技术发明植物新种质用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等
三、运用组织培养材料作为植物生物反应器尽量不损伤花药并清除花丝，排除二倍体组织对单倍体植株再生的影响培养
4.常用、、等培养基，周后形成胚状体或愈伤先暗培养，再MS B5Nitsch White3〜8转至光照下促分化lx/14h、花粉花药培养的应用11I、诱导形成单倍体，迅速获得纯系，缩短育种周期；常规育种需年获得纯系，而小抱14-6子培养仅需一年、有利于筛选隐性突变体，提高选择效率；
2、有利于隐性基因控制性状口勺选择；
3、迅速获得自交系日勺超雄株4第五章、单细胞培养措施
1、看护培养法
1、微室培养法
2、平板培养法
3、细胞悬浮培养口勺意义2细胞可以不断增殖,形成高密度的细胞群体，适于大规模培养；
1..能够提供大量较为均匀的细胞，为研究2细胞的生长、分化创造方法和条件、细胞培养的应用
3、植物次生代谢产物的生产1I、突变体选择
2、诱导多变体
3、原生质体培养意义
4、原生质体无细胞壁，有利于细胞融合、体细胞杂交
1、原生质体轻易摄取外来遗传物质，可作为理想的受体系统
2、原生质体培养措施以及融合措施5原生质体培养措施、液体浅层培养
1、固体双层培养
2、固体平板培养
3、琼脂糖珠培养
4、双层滤纸植板培养5融合法无机盐诱导融合1高高钙离子融合2pH—聚乙二醇融合法3电融合技术
4、单倍体植物细胞中仅含配子染色体的植物
6、细胞培养指从体内取出组织，分离细胞，或使用细胞系，在体外模拟体内生理环境，在7无菌、合适温度和一定欧营养条件下，使之生存和生长，并维持其构造和功能特性I、超低温保留将细胞等置于液氮中保留，解冻后仍能存活的技术
8、种质保留指在天然或人工发明的合适环境条件下，贮存植物种质，使其保持生命力与遗9传性的技术、植物离体繁殖指运用植物组织培养技术对外植体进行离体培养，使其在短期内获得遗传10性一致日勺大量再生植株日勺措施、原生质体指脱去细胞壁的、裸露的、有生活力的原生质团
11、原生质体融合指不一样种类的原生质体，不通过有性阶段在人工控制条件下，相互融合12I成一体，形成杂种细胞，并进一步发育成杂种植株的技术第六章、植物离体繁殖与老式营养繁殖的优缺陷1繁殖效率高，生长速度快；♦培养条件可控制性强；♦占用空间小；♦管理以便，利于自动化控制;♦便于种质互换和保留♦、快繁器官再生类型2短枝发生型♦丛生芽发生型♦不定芽发生型♦胚状体发生型♦原球茎发生型♦、快繁程序以及影响原因3程序）无菌（或初代）培养日勺建立a）繁殖体增殖b）芽苗生根c）小植株区移栽驯化d J影响原因外植体♦培养基♦培养条件♦继代培养♦移栽♦、商业化生产应注意的问题4
①污染污染来源培养基及器具、器皿污染；外植体灭菌不彻底；操作原因；环境原因等污染控制灭菌彻底；操作对时；保持操作区环境清洁无菌
②遗传稳定性影响遗传稳定性原因基因型；继代次数；器官发生方式降低遗传变异措施选用合适的基因型；减少继代次数；采用合适的器官发生方式；减少生长调整剂日勺使用浓度
③玻璃化发生原因琼脂和蔗糖浓度偏低；培养温度偏高；细胞分裂素浓度偏高；乙烯的影响;光照偏弱；培养基含量偏高等原因防止措施提高培养基硬度；降低培养基水势；提高蔗糖含量；增加培养瓶气体互换，降低湿度；增加光照，降低温度等
④褐化培养材料中酚类物质被氧化形成影响原因植物种类和品种（如木本比草本更易褐化）；外植体年龄和取材时间；外植体损伤程度；光温原因；培养基成分第七章、脱毒机理以及脱毒措施
1、热处理脱毒法:1原理
①热处理能钝化病毒活性，使病毒增殖减缓或停止，失去侵染能力；
②同步加速植物细胞分裂，使植物细胞在与病毒繁殖日勺竞争中取胜、微体嫁接离体培养脱毒法2原理把极小（不不小于）的茎尖作为接穗接到实生砧木上（无菌种子培养获无
0.2mm菌苗，种子实生苗不带毒），然后将嫁接后的砧木接种到新的培养基上培养、微茎尖培养脱毒法3原理
①病毒在植物体内分布不均匀，越靠近顶端分生组织，病毒浓度越稀
②病毒分子与细胞分裂蛋白质合成竞争，在迅速合成的植物细胞中正常DNA I合成的蛋白质占优势、珠心组织培养脱毒法4原理病毒通过维管组织传播，而珠心组织与维管组织无直接联络，故可获得无病毒植株已用该法清除了柑橘银屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、速衰病等病毒、愈伤组织培5养脱毒法原理在同一感病的组织内，存在不感染病毒的细胞群落，这些无毒的细胞通过殖产I生无病毒组织、常见脱毒植株的检测措施2）直接观测a）血清鉴定法b）电镜鉴定法c）生物鉴定法d）分子检测法e第八章、超低温保留种质资源原理和一般程序1原理
①细胞冰冻结冰保护性脱水理论
②溶液的玻璃化理论I程序、植物材料（培养物）勺选用1H、材料日勺预处理
2、降温冷冻及超低温保留
3、解冻分迅速解冻、慢速解冻
4、再培养
5、超低温保留后细胞或组织活力检测
6、限制生长保留种质资源方式2）高渗保留法1）生长克制剂保留法2）克制生长的其他保留法3低压保留法降低培养材料周围气压，到达克制生长的目日勺，分为低气压与低氧压两种，保留原理相似饥饿法从培养基中减去种营养元素，使植株缺乏有关营养而处在最小生长量1〜2干燥保留法减少培养材料的含水量矿物油覆盖法使培养材料与空气隔绝，延缓生长低光照培养合适减弱光照强度，缩短光照时间，进而减缓试管苗生长思索题合集PPT
1、植物细胞全能性指任何具有完整的I细胞核的植物细胞都拥有形成一种完整植株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力
2、细胞分化指导致细胞形成不一样构造，引起功能或潜在的发育方式变化的过程
3、脱分化指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的构造和功能而恢复分生状态，形成无组织构造细胞团或愈伤组织的过程
4、再分化指脱分化的细胞重新恢复分化能力，形成具有特定构造和功能的细胞、组织、器官甚至植株欧I过程
5、植物离体培养中再生植株有哪些途径？根、茎或芽器官的发生可使植株重建先诱导分化出芽，后形成根很好（还有先根后芽，先愈伤再根芽）离体培养中再生植株日勺重要途径有器官发生；器官型（直接由外植体的细胞形成器官原基），器官发生型（外植体先形成愈伤组织，再产生器官原基）胚胎发生（与合子胚日勺发生过程类似，体细胞胚在形态和生化水平上和合子胚都相似）
6、愈伤组织是怎样形成与生长时？在细胞脱分化过程中，大多数状况下形成愈伤组织愈伤组织的细胞往往是异质性的，无明显极性，其形成过程可分为诱导期、分裂期和分化期诱导期（起动期）是细胞准备分裂的时期细胞大小几不变，内部发生生理生化变化，迅速合成蛋白质和核酸分裂期外层细胞分裂，中间细胞常不分裂，形成小芯细胞分裂快，构造疏松，缺乏构造，浅而透明在原培养基上，细胞必分化，及时转移，其可无限制地进行细胞分裂，维持不分化状态分化期细胞在形态和生理功能上的分化，出现形态和功能各异的细胞生长诱导期后，外植体外层细胞分裂，在组织受伤表面形成一层愈伤组织,细胞数目迅速增多，表层细胞平均重量下降，体积变小；降低温度，可以使细胞生长速度减慢，平均大小可增加质地类型松脆和致密两种高浓度生长素，可使Callus变得松脆；高浓度细胞分裂素，则可使致密生理生化变化次生物质合成能力变化，对激素的I需求变化等
7、植物体细胞胚胎发生有哪些途径？直接途径指从外植体某些部位的胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎，如子叶、花序、珠心等外植体间接途径外植体先脱分化形成愈伤组织，再由愈伤组织的某些细胞重新“决定”为胚性细胞，进而分化出体细胞胚胎多数体细胞胚胎通过该途径形成的一般包括2个阶段
（1）胚胎发生丛（Embryogenic clump）EC是由液泡小、细胞质浓的小细胞构成
（2）胚状体的发育将EC转入降低或除去生长素、降低还原氮日勺培养基上培养即可
8、影响植物离体形态发生的I原因有哪些？
一、植物种类和基因型
1、植物种类不一样难易程度不一样；被子植物比裸子植物轻易
2、同一物种不一样基因型间存在较大差异
二、培养材料的I生理状态
1、发育年龄一般幼态比老态组织形态发生能力高；
2、培养器官或组织类型细胞分裂旺盛的J器官很好；
3、培养时间和细胞倍性一般取处在旺盛生长期的愈伤来诱导器官形成
三、培养基
1、营养成分一般认为，培养基中的核态氮和K+有利于胚状体形成，提高无机磷的含量可增进器官发生茎尖培养和芽诱导培养基重要是MS及其修改的培养和B5培养基茎尖培养的起始培养基和芽增殖的培养基往往是不一样碳第二章
1、细胞全能性Totipotency指任何具有完整的细胞核的植物细胞都拥有形成一种完整植株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力
2、细胞分化celldifferentiation指导致细胞形成不一样构造，引起功能或潜在欧I发育方式变化的过程
3、脱分化Dedifferentiation指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来欧J构造和功能而恢复分生状态，形成无组织构造细胞团或愈伤组织日勺过程
4、再分化Redifferentiation指脱分化的细胞重新恢复分化能力，形成具有特定构造和功能的细胞、组织、器官甚至植株的过程、植物组织培养中常碰到的问题以及处理措施5
一、污染及防治、真菌污染后，假如已形成抱子，则必须经高压灭菌后扔掉但若是细菌污染，只要1及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可使用、用抗生素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常生长2I
二、褐变及防止选择合适口勺外植体1合适口勺培养条件2使用抗氧化剂3水化合物种类及浓度对胚状体发育有重要作用缺糖或低糖无法形成胚状体
2、植物激素及生长调整剂起主导作用，通过影响内源激素的I平衡起作用1生长素增进外植体生长、生根，并与细胞分裂素共同诱导不定芽分化及侧芽萌发与生长2,4-D诱导体细胞胚胎发生2细胞分裂素增进分化和芽形成，克制根发育及衰老3赤霉素GA3增进茎的伸长，打破休眠，对芽的诱导和形成有增进作用4乙烯对芽的诱导和形成有增进或克制作用5脱落酸对体胚的发生及成熟很重要，可增加胚性愈伤组织的形成和体胚发生
3、培养基的性质1愈伤组织诱导在固体培养基上胡萝卜、石刁柏2细胞和胚状体的I诱导在液体培养基上3诱导胚状体或初期胚状体培养渗透压，规定高
四、培养条件
1、光照培养条件下，光照的作用是影响细胞的状态，而不是光合作用持续光照有利于培养细胞维管组织的形成昼夜光照有利于极性的建立及形态发生光强一般规定1000-50001X植物间有所差异光照周期为10〜16h/日不一样波长光质作用不一样，蓝光有利于芽的分化，红光有利于根系发生
2、温度大多数培养温度为25±2℃花药培养低温或高温预备处理
3、气体氧气、二氧化碳以及乙烯等气体的J浓度和通气状况、常用的灭菌措施有哪几种？9
①物理措施物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等
②化学措施消毒剂、抗菌素灭菌、接种材料怎样进行消毒处理？10第一，把材料切割成合适大小，即灭菌容器能放人为宜置自来水龙头下流水冲洗儿分钟至数小时，洗时可加入洗衣粉清洗第二，要在超净台用酒精浸70%-75%10-30s第三，用灭菌剂升汞处理升汞是由重金属汞离子来到达灭菌的；
0.1%5-10min第四，用无菌水涮洗次，每次不少于以尽量清除残毒4-63min,、组织培养中怎样尽量防止出现污染？
11、把组培中所用到欧器具洗洁净和彻底消毒1I、不用过期的母液作为培养基
2、要对培养基进行湿热灭菌处理
3、接种室要配置空气过滤器或者安装紫外灯
4、培养室要进行定期时消毒
5、离体茎尖经培养后将会出现怎样的培养反应12I生长太慢、生长过旺，愈伤增多、生长正常、植物器官和组织培养日勺基本程序是什么？怎样获得无菌培养材料？13
一、无菌外植体的获得
二、初代培养物的建立
三、形态发生和植株再生
四、培养产物的观测记载，清洗外植体，运用灭菌剂对外植体灭菌，无菌水冲洗到次
35、为何幼胚培养比成熟胚培养规定时培养基和培养条件更为严格？14由于成熟胚生长不依赖胚乳的贮藏营养，只要提供合适的生长条件及打破休眠，它就可以I在比较简朴的培养基上萌发生长，形成幼苗幼胚对营养物质日勺需求较成熟胚复杂，以保证离体幼胚能沿着胚胎发生的途径发育、比较胚培养、胚珠培养和子房培养的异同15I
（1）胚珠培养在人工控制的条件下，对胚珠进行离体培养使其生长发育形成幼苗的技术由于幼胚分离难度大，而胚珠分离则相对轻易，在幼胚培养时常采用胚珠培养分为两种类型受精胚珠培养与未受精胚珠培养防止杂种胚初期败育，获得杂种植株；受精前胚珠培养,可作为试管受精的基础；未受精胚珠培养，能培养获得单倍体植株，用于单倍体育种1
（2）较胚培养分为成熟胚培养和幼胚培养两种其中成熟胚为子叶期后来的J胚，其在简朴的培养基上即可萌发生长对营养条件规定不严格对发育初期日勺胚进行培养培养技术和条件规定较高其作用为克服远缘杂交不亲和性，打破种子休眠，缩短育种周期，提高种子萌发率
（3）子房培养包括授粉子房和未授粉子房培养授粉子房培养形成成熟果实和种子未授粉子房培养形成小时无籽果实其作用为获得杂种植株；未授精子房培养为试管受精提供技术基础；未受精子房培养能获得获得单倍体植株，用于单倍体育种、胚胎培养在育种工作中有哪些应用？
16、克服远缘杂交不亲和性；如运用“胚胎拯救技术获得远缘杂种1Embryo rescue”、打破种子休眠，缩短育种周期
2、提高种子萌发率；尤其是对于某些长期营养繁殖的植物种子
3、离体授粉的意义重要表目前哪些方面？17可以克服远缘杂交中勺不亲和性，尤其是离体子房授粉和离体胚珠授粉，能消除柱头和花H柱所导致的受精前障碍I、花药培养的意义18缩短了育种周期，为新品种的选育开辟了新途径、花药培养措施19平板培养；液体培养；双层培养；看护培养；微室培养；条件培养基培养、简述单倍体育种的用途20-遗传应用数量遗传研究，创制非整倍体材料，突变体筛选，遗传转化二育种学应用缩短育种年限单倍体加倍形成纯合二倍体；
1.提高选择效率加倍后纯合二倍体其等位基因相似，没有显隐性基因相互遮盖；
2.获得纯雄株等特殊育种材料；
3.选育自交系
4.、细胞培养措施有哪些？其特点是什么？21措施看护培养；微室培养；平板培养看护培养法是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的1措施特点
①简便易行
②效果好，易于成功
③不能在显微镜下直接观测细胞生长过程微室培养即将细胞培养在很少许的培养基中2特点在培养过程中可持续进行显微观测，将一种细胞的生长、分裂和形成细胞团I口勺全部过程记录下来平板培养法是把单细胞悬浮液与融化日勺琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基3底上的培养措施特点可以定点观测；分离单细胞系比液体浅层培养轻易；培养细胞气体互换不畅、怎样测定培养细胞的活力？
22、法1TTC、荧光素二乙酸法法2FDA、伊凡蓝染色法
3、测活力日勺原理是什么？23FDA自身不具有极性，不能发出荧光，可以自由出入细胞膜FDA在活细胞中，被酯酶裂解，释放出有极性的荧光素FDA荧光素不能自由穿越质膜，在活细胞中积累荧光素在死细胞中不能积累在照射下，活细胞中的荧光素发出绿色荧光UV、怎样获得同步化培养细胞？24
①体积选择法通过细胞体积大小分级，直接将处在相似周期的细胞进行分选，然后将同一状态的细胞继代培养于同一培养体系中
②饥饿法在一种培养体系中，假如细胞生长的基本成分丧失，则导致细胞因饥饿而分裂受阻，从而停留在某一分裂时期
③克制法通过某些合成克制剂处理细胞，使细胞滞留在合成前期，当解除克制后，DNA DNA即可获得处在同一细胞周期一期的同步化细胞G1
④低温法冷处理也可提高培养体系中细胞同步化程度、影响细胞培养原因？
25、培养基成分1适合单子叶植物细胞培养，N6,MS,B5适合双子叶植物细胞培养MS,B5,LS,SL条件培养基适合单细胞和低密度细胞培养需要硝态氮、钱态氮、无机磷浓度更高、细胞密度培养基日勺成分和起始细胞密度对单细胞培养成败有影响2起始密度细胞培养最低的有效密度，即能使细胞分裂、增殖的最低接种量，低于这个密度细胞不能分裂，甚至很快解体死亡、植物生长调整剂细胞悬浮培养时，常体现一种自然的汇集现象，加入少许水32,4-D,解酶或酵母提取液，能增加细胞分散度、和浓度4PH C02加入使铁和其他金属离子长期处在可运用状态在悬浮培养时，变动相称大EDTA PH硝态氮和镂态氮之间进行调整可作为稳定的一种措施二氧化碳对细胞培养无太大影响，PH I但在低密度细胞培养中，二氧化碳对于诱导细胞分裂可能有重要作用细胞悬浮培养
26.使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养、成批培养27指把细胞分散在一定容积的培养基中进行培养，当培养物增殖到一定量时，转接继代,建立起单细胞培养物它是进行细胞生长和细胞分裂的生理生化研究常用的培养措施、持续培养28运用特制的培养容器进行大规模细胞培养於一种方式在培养过程中，以不停抽取悬浮培I养物并注入等量新鲜培养基，使培养物不停得到养分补充，保持其恒定体积的培养、阐明原生质体分离中机械分离法和酶分离法改特点27J机械分离法排除酶对原生质体构造和代谢活性的影响措施繁琐；原生质体产量低;高度质壁分离，损害细胞酶分离法条件温和、原生质体完整性好、活力高、得率高、原生质体纯化措施有哪些？原生质体活力区测定措施有哪些？28I纯化措施
（1）过滤离心法采用40-lOOum网筛过滤搜集细胞，低速离心搜集沉淀,反复次，可得到原生质体3-4漂浮法原生质体比重小，在一定渗透溶液如蔗糖溶液中漂浮，吸225%管搜集界面法3活力测定形态识别形态完整，细胞质饱满，颜色新鲜即为存活原生质体1染色识别用酚番红或蓝进行染色活力细胞不被染色，死细
20.1%Evans胞被染色、简述原生质体培养措施及特点29固体平板培养法；液体浅层培养法；固液双层培养法；琼脂糖珠培养；双层滤纸植板培养、原生质体融合有哪几种措施？30融合法无机盐诱导融合1采用、、葡萄糖硫酸钠、葡萄糖硫酸钾等无NaNO3KNO3CaNO32NaCl CaC12机盐进行诱导应用最早的融合法，但由于异核体形成率低，且对细胞有毒害，目前已不太应用高高钙离子融合2pH—可使质膜表面特性发生变化，发生融合
0.05mol/L CaC
12.2H2O,pH
9.5-
10.5,由于异核体形成率低，且对细胞有毒害，目前已不太应用聚乙二醇融合法3融合原理短时间内，细胞质膜粘连，形成细胞质桥，进行融合、试述植物快繁日勺全过程及影响原因32过程无菌（或初代）培养的建立一繁殖体增一芽苗生根一小植株的移栽驯化I影响原因外植体、培养基、培养条件、继代培养、移栽、植物快繁时器官发生类型有哪些？34
①短枝发生型
②丛生芽发生型
③不定芽发生型
④胚状体发生型
⑤原球茎发生型、植物离体繁殖商业化生产中应注意哪些问题？36
①污染污染来源培养基及器具、器皿污染；外植体灭菌不彻底；操作原因；环境原因等污染控制灭菌彻底；操作对的保持操作区环境清洁无菌I;
②遗传稳定性影响遗传稳定性原因基因型；继代次数；器官发生方式降低遗传变异措施选用合适的基因型；减少继代次数；采用合适的器官发生方式；减少生长调整剂的使用浓度I
③玻璃化发生原因琼脂和蔗糖浓度偏低；培养温度偏高；细胞分裂素浓度偏高；乙烯口勺影响;光照偏弱；培养基含量偏高等原因防止措施提高培养基硬度；降低培养基水势；提高蔗糖含量；增加培养瓶气体互换，降低湿度；增加光照，降低温度等
④褐化培养材料中酚类物质被氧化形成影响原因植物种类和品种（如木本比草本更易褐化）；外植体年龄和取材时间；外植体损伤程度；光温原因；培养基成分、种质资源保留指在天然或人工发明勺合适环境条件下，贮存植物种质，使其保持生命力37H与遗传性的技术
1、超低温保留将细胞等置于液氮中保留，解冻后仍能存活的技术
38、超低温保留离体种质资源的原理和一般程序是什么？39原理
①细胞冰冻结冰保护性脱水理论
②溶液的玻璃化理论程序、植物材料（培养物）日勺选用
1、材料日勺预处理
2、降温冷冻及超低温保留
3、解冻分迅速解冻、慢速解冻
4、再培养
5、超低温保留后细胞或组织活力检测
6、限制生长保留离体种质资源有哪些方式40
（4）持续转移
三、玻璃化问题及其防止
（1）增加培养基溶质水平，降低培养基水势；（）减少培养基含氮化合物用量；2（）增加光照；3
（4）增加容器通风，进行C02施肥，对减轻试管苗玻璃化现象有明显作用；（）降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻试管苗玻璃化现象发生；5（）降低培养基细胞分裂素含量，加入适量脱落酸6
四、其他问题和处理措施（-）初始培养阶段、培养物水浸状、变色、坏死、茎断面干枯1改善措施调换其他杀菌剂或降低浓度，缩短消毒时间；试用其他部位，生长初期取材、长期培养培养物几乎无反应2改善措施更换基本培养基或调整培养基成分，尤其是调整盐离子浓度，增加生长素用量，试用调整培养温度2,4-D,、愈伤组织生长过旺、疏松，后期水浸状3改善措施减少激素用量，合适降低培养温度，调整无机盐（尤其是镂盐）含量,合适提高琼脂用量增加培养基硬度、愈伤组织太紧密、平滑或突起，粗厚，生长缓慢4）高渗保留法1）生长克制剂保留法2）克制生长的其他保留法3低压保留法降低培养材料周围气压，到达克制生长的目的，分为低气压与低氧压两种，保留原理相似饥饿法从培养基中减去种营养元素，使植株缺乏有关营养而处在最小生长量干1〜2燥保留法减少培养材料日勺含水量矿物油覆盖法使培养材料与空气隔绝，延缓生长低光照培养合适减弱光照强度，缩短光照时间，进而减缓试管苗生长月日星期日621谢建明于19#503改善措施减少细胞分裂素用量，调整细胞分裂素与生长素比例，降低糖浓度、侧芽不萌发，皮层过于膨大，皮孔长出愈伤组织5改善措施减少激素用量，采用较老化枝条
（二）继代培养阶段、苗分化量少、速度慢、分枝少、个别苗细高1改善措施增加细胞分裂素，降低温度，改善光照，改单芽继代为团块（丛芽）继代、苗分化过多，生长慢，畸形，节间极短，苗丛密集，微型化2改善措施减少或停用细胞分裂素一段时间，调整温度、分化率低，畸形，培养时间长时苗再次愈伤组织化3改善措施减少生长素用量，合适降温、叶粗厚变脆4改善措施减少激素用量，防止叶片接触培养基、再生苗的叶缘、叶面等处偶有不定芽分化出来5改善措施合适减少细胞分裂素，或分阶段地运用这一再生方式、丛生苗过于细弱，不适于生根或移栽6改善措施减少细胞分裂素，免用赤霉素，延长光照时间，增强光照，及时转接，降低接种密度、幼苗淡绿，部分失绿7改善措施针对营养元素亏缺状况调整培养基，调好值，调控温度、光照PH、幼苗生长无力、发黄落叶、有黄叶、死苗夹于丛生苗中8改善措施及时转接、降低密度，调整激素配比和营养元素浓度，改善瓶内气体状况，控制温度
（三）生根阶段、久不生根，基部切口无合适愈伤组织1改善措施选用合适的生长素或增加生长素用量，合适降低无机盐浓度改善措施调换生长素种类或几种生长素配合使用,降低浓度，附加或VB2PG等减少愈伤等、操作技术6
一、洗涤技术、玻璃器皿洗涤1-A晾干洗衣粉清水、塑料用品洗涤2比必加山型E廿二日口由1已用过时塑料、愈伤组织生长过快、过大，根茎部肿胀或畸形，几条根并联或愈合
2、金属用品洗涤3热洗衣粉水洗净A__
二、灭菌技术、灭菌1培养基灭菌高温高压湿热灭菌法1玻璃器皿灭菌蒸汽高压消毒灭菌干热消毒灭菌2塑料器皿灭菌多采用高压蒸汽消毒灭菌；3金属用品灭菌灼烧灭菌；浸入酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使495%用接种室灭菌5接种室f紫外灯照射f空气消毒灭菌超净工作台一紫外灯照射、70%—75%的酒精擦洗一培养材料的接种6外植体灭菌流水冲洗10—20min或更长时间f70%—75%酒精中浸泡30s-
0.1%—
0.2%氯化汞液中浸泡lOmin左右、在10%及|次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右一蒸储水冲洗4—5次一备用第三章、植物营养器官植物器官培养是指对植物某一器官勺全部或部分或器官1Organ cultureH原基进行离体培养欧技术I、组织培养组织培养是指对植物愈伤组织等进行离体培养的技术2Tissue culture、植物器官和组织培养日勺基本程序3
一、无菌外植体的获得
二、初代培养物的建立
三、形态发生和植株再生
四、培养产物的观测记载
五、诱导生根和再生植株移栽、形态建成方式4⑴不定芽途径⑵腋芽增殖侧芽增殖途径⑶原球茎途径⑷胚状体途径、根、茎、叶培养的意义
5、根培养意义1研究根系生理代谢时最优良试验体系♦研究器官分化、形态建成的良好体系♦建立迅速生长日勺根无性系，对药物生产有重要意义♦对根细胞培养物进行诱变处理，可筛选突变体，用于育种实践♦、茎培养意义2/无性系迅速繁殖;,培养无病毒苗，品种改良;/理论基础研究、叶培养意义3研究叶形态发生以及光合作用、叶绿素形成、遗传转化研究第四章
1、植物胚培养EmbryoCulture指对植物H勺胚、胚乳、子房和胚珠进行离体培养，使其发育成完整植物日勺技术、胚培养勺发育途径2H＞按正常胚胎发育途径形成植株＞脱分化形成愈伤组织＞胚“早熟萌发”、胚培养日勺意义
3、克服远缘杂交不亲和性1运用“胚胎拯救技术获得远缘杂种；Embryo rescue”、打破种子休眠，缩短育种周期；
2、提高种了萌发率；尤其是对于某些长期营养繁殖植物附种了
3、胚乳培养的意义4＞胚乳培养再生植株证明了全能性理论;＞研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能;＞获得三倍体植株，用于育种运用三倍体植株具有营养体大，无籽等特点如无籽西瓜、葡萄、香蕉＞胚乳培养也会产生较多的混倍体，影响育种运用但可用于染色体工程研究＞胚乳细胞是研究淀粉、蛋白质和脂类天然产物代谢途径的理想系统、胚“早熟萌发幼胚在培养基不能长出成熟胚的多种构造，越过正常胚胎发生若干阶段,直接5长成幼苗
6、离体授粉pollination invitro指将未授粉欧I胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术I I、离体授粉的意义7可以克服远缘杂交中的不亲和性，尤其是离体子房授粉和离体胚珠授粉，能消除柱头和花柱所导致欧受精前障碍I、花粉培养是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程8J、花药培养把发育到一定阶段的花药，通过无菌操作技术，接种在人工培养基上，以改9变花药内花粉粒的发育程序，诱导其分化成完整植株日勺过程、花药培养过程10取材多数植物以单核靠边期为宜
1.灭菌及预处理
2.未开放花蕾，常规灭菌后直接取出花药在条件下冷处理易产生胚状体4〜5c2〜4d,接种
3.。
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