转化方法和酵母质粒抽提

转化方法和酵母质粒抽提质粒抽提实验报告

一、实验目的dna掌握碱裂解法小量快速提取质粒的方法，提取的质粒可直接用于酶切，扩增等

1.dna dna学习利用水平式琼脂糖凝脉电泳初步检测的纯度，构型，含量和分子量大小pcr

二、实验原理碱变性抽提质粒是基于染色体与质粒结果的变性与

2.dna复性的差异而达到分离目的在值高达的碱性条件下，染色体的氢键dna dnadn a断裂，双螺旋结构解开而变性质粒的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合ph

12.6dna环状的两条互补链不会完全分离，当以的高盐缓冲液去调节其值至dna中性时，变性的质粒又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体不能复ph

4.8naac ph性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体与不稳定的大分子、蛋白质dna dna复合物等一起沉淀下来而被除去dna rna-

三、实验仪器及试剂sds管、高速离心机、移液枪溶液葡萄糖、、（）毫克毫升溶

1.5mlep菌酶i50mmol/l10mmol/ledta25mmol/ltris-hcl ph

8.02/溶液、溶液（）溶液、缓冲液、

四、实验步骤ii200mmol/lnaoh1%sds iii3mol/lnaac ph

4.8te、取细胞培养物于管中，离心，去上清液（重10mmol/ltris-hcl ph

7.51mmol/ledta复一次）

11.5ml

1.5mlep12000rpm/min1min、加溶液Ⅰ重悬浮细胞、加溶液Ⅱ，轻轻摇匀，放置2200μl、加溶液，轻轻摇匀，冰浴，离心3200μl5min、取上清，加入等体积氯仿，摇匀，离心4150μl5min12000rpm/min5min、去上清，加入等体积异丙醇，室温放置，离心512000rpm/min10min、乙醇洗涤沉淀次，风干65min12000rpm/min10min、加溶解沉淀，下保存备用770%2

五、实验结果得到大肠杆菌质粒820ddh2o-20℃以及电泳实验报告dnapcr

一、实验原理该技术是在模板、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于聚合酶的酶促合成反应聚合酶以单链为模板，借助一小段双链来启动合pcr dna dna成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链模板中的一段互补序列结dna dnadna合，形成部分双链在适宜的温度和环境下，聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物dna末端，并以此为起始点，沿模板方向延伸，合成一条新的互补链dna电泳琼脂糖凝胶可以用于蛋白质和核酸的电泳支持介质，尤其适合于核酸的提纯、3´-oh5´→3´dna分析如浓度为的琼脂糖凝胶的孔径对于蛋白质来说是比较大的，对蛋白质的阻碍作用较小，这时蛋白质分子大小对电泳迁移率的影响相对较小，所以适用于一1%些忽略蛋白质大小而只根据蛋白质天然电荷来进行分离的电泳技术，如免疫电泳、平板等电聚焦电泳等琼脂糖也适合于、分子的分离、分析，由于、分子通常较大，所以在分离过程中会存在一定的摩擦阻碍作用，这时分子的大小会dna rnadna rna对电泳迁移率产生明显影响

二、实验仪器及试剂管、离心机、仪、电泳槽、电泳仪、移液枪、紫外透射检测仪等模板、与特定模板结合的引物、去离子水、商业化的聚合酶以及缓冲液、、荧ep pcrdna光染料溴化乙锭、琼脂糖凝胶dnadnadntp dna

三、反应体系（）引物引物

四、操作步骤pcr25μl2×pcrmix

12.5μl11μl21μl20ddh2o

10.5μl、预变性，然后，，，循环次、，，，循环次194℃5min94℃30s-64℃45s-72℃1min

7、，294℃30s-55℃45s-72℃1min

23、电泳检测372℃10s

五、实验结果分析4分离不同大小的片段所用的最适凝胶浓度是不同的，数据见下表如右图所示实验所用的琼脂糖凝胶浓度为，实验的条带位置在dna之间，接近，证明实验是成功的

1.3%dna500bp-750bp500bp实验组2000bp1000bp对照组750bp500bp250bp100bp。