《微生物菌株培养》课件

《微生物菌株培养》本课程将带您深入了解微生物菌株的培养技术，从基本原理到实际操作，涵盖细菌、真菌、放线菌等常见微生物的培养方法，以及菌株的保藏和鉴定课程概述课程目标课程内容掌握微生物菌株的培养技术，包括细菌、真菌、放线菌等常•微生物的基本知识见微生物的培养方法，以及菌株的保藏和鉴定•细菌培养技术•真菌培养技术•放线菌培养技术•微生物菌株的保藏•微生物菌株的鉴定微生物的特点体积微小结构简单微生物个体微小，通常只能在显微镜下观察它们通常只有几微生物的结构相对简单，通常只有简单的细胞结构，如细胞微米或更小，这使得它们难以用肉眼识别壁、细胞膜、细胞质等繁殖迅速分布广泛微生物能够快速繁殖，在适宜的条件下，它们的群体数量可以微生物广泛分布于地球上各种环境中，包括土壤、水、空气、在短时间内迅速增长这种快速繁殖的能力是它们在自然界中动植物体内和人体内它们在生态系统中发挥着重要作用，参如此普遍的原因之一与物质循环和能量流动微生物的分类细菌真菌单细胞原核生物，主要以二分裂真核生物，包括酵母菌、霉菌和的方式进行繁殖细菌种类繁多，大型真菌真菌通常以孢子进行形态各异，在自然界中扮演着重繁殖，在自然界中发挥着分解有要的角色机物和腐生的作用病毒藻类非细胞生物，必须在活细胞内才光合自养的真核生物，通常生活能进行繁殖病毒可感染多种生在水中藻类是食物链的重要组物，包括细菌、植物和动物，并成部分，并产生大量的氧气引发各种疾病细菌的结构和功能细胞壁细胞膜细胞质鞭毛细菌细胞壁的主要成分是细胞膜是一层薄膜，它控细胞质是细胞内的液体，鞭毛是细菌的运动器官，肽聚糖，它赋予细菌形状制着物质进出细胞它还它包含了细菌的遗传物它有助于细菌移动到更适并保护细胞不受渗透压变参与了能量的产生和细胞质、蛋白质、酶和各种其合的区域鞭毛的排列方化的影响的呼吸他分子式可以用来识别细菌种类细菌的繁衍二分裂1细菌主要通过二分裂进行繁殖，即一个细菌细胞分裂成两个子细胞这种繁殖方式速度很快，在适宜的条件下，细菌可以在几分钟内完成一次分裂芽孢形成2一些细菌在遇到恶劣环境时，会形成芽孢芽孢是细菌的休眠状态，它可以抵抗高温、干燥和辐射等不利条件当条件变得有利时，芽孢可以重新萌发成活的细菌接合3接合是指两个细菌细胞之间通过“性毛”连接，并进行基因交换的过程接合可以使细菌获得新的基因，从而增加它们的生存能力细菌的培养基基本培养基1提供细菌生长的基本营养物质，如碳源、氮源、无机盐等合成培养基2成分已知，可以精确控制培养基的组成，适用于研究细菌的营养需求和代谢途径天然培养基3成分未知，通常由动植物提取物或天然物质组成，适用于培养多种细菌选择培养基4专门用于分离和培养特定类型的细菌，它包含了抑制其他细菌生长或促进特定细菌生长的物质鉴别培养基5用于区分不同种类的细菌，它包含了指示特定代谢产物的物质，从而使不同细菌在培养基上表现出不同的特征固体培养基的制备称量溶解灭菌倒平板根据配方称取所需量的培养基将培养基成分溶解于蒸馏水中，将溶解好的培养基进行灭菌，将灭菌后的培养基倒入无菌的成分，如琼脂、蛋白胨、酵母并加热使之完全溶解通常采用高压蒸汽灭菌法培养皿中，冷却凝固后即可使膏等灭菌的目的是杀死培养基中的用所有微生物液体培养基的制备称量1根据配方称取所需量的培养基成分，如蛋白胨、酵母膏、葡萄糖等溶解2将培养基成分溶解于蒸馏水中，并加热使之完全溶解灭菌3将溶解好的培养基进行灭菌，通常采用高压蒸汽灭菌法灭菌的目的是杀死培养基中的所有微生物分装4将灭菌后的培养基分装到无菌的试管或烧瓶中，并进行封口，以防止污染无菌操作技术12环境器具无菌操作需要在无菌的环境中进所有与微生物接触的器具必须进行，通常在超净工作台或无菌室行严格的灭菌处理，以确保无菌中进行状态3操作操作者必须进行严格的消毒，并按照无菌操作的规范进行操作，以防止污染无菌操作的步骤准备1准备好所需的器具、培养基和试剂，并将所有器具进行灭菌处理消毒2操作者用消毒液对双手进行消毒，并穿上无菌服和手套操作3在无菌的环境中进行操作，所有步骤都必须按照无菌操作的规范进行清洁4操作完成后，清洁所有使用的器具，并将所有废弃物进行妥善处理细菌的分离培养涂布平板法划线分离法稀释平板法将细菌样品稀释后，均匀涂布在固体培用接种环将细菌样品从原培养基上取少将细菌样品进行一系列的稀释，然后将养基表面，然后在适宜的温度下培养，量，在固体培养基表面进行多次划线，一定体积的稀释液加入到培养基中，在使细菌在培养基表面形成单一菌落每次划线都要将接种环灼烧灭菌，以确适宜的温度下培养，使细菌形成单个菌保每个划线区域只有少量细菌最落该方法可以用于确定细菌样品的后，在适宜的温度下培养，使细菌形成活菌数单个菌落细菌菌落的观察形态大小观察菌落的形状、大小、颜观察菌落的直径，不同的细色和表面特征不同的细菌菌菌落具有不同的直径，可菌落具有不同的形态特征，以作为鉴别细菌种类的依可以作为鉴别细菌种类的依据据颜色表面特征观察菌落的颜色，不同的细观察菌落的表面特征，例如菌菌落具有不同的颜色，可光滑、粗糙、粘稠等，可以以作为鉴别细菌种类的依作为鉴别细菌种类的依据据显微镜下的细菌观察革兰氏染色结晶紫染色用结晶紫溶液染色细菌细胞，使所有细菌都染成紫色碘液处理用碘液处理细菌细胞，使结晶紫与细菌细胞壁上的肽聚糖结合得更牢固酒精脱色用酒精脱色细菌细胞，革兰氏阳性细菌的细胞壁厚而致密，能够保持紫色，而革兰氏阴性细菌的细胞壁薄而疏松，会被酒精脱色沙黄复染用沙黄溶液对脱色后的细菌细胞进行复染，革兰氏阴性细菌被染成红色，而革兰氏阳性细菌仍然保持紫色细菌生长曲线迟滞期对数期稳定期衰亡期细菌适应新的环境，合成细菌以指数速度快速繁细菌的繁殖速度与死亡速细菌死亡速度超过繁殖速必要的酶和蛋白质，生长殖，生长速度最快度相等，群体数量保持稳度，群体数量迅速下降缓慢定微生物的生长条件温度1微生物生长需要特定的温度范围，温度过高或过低都会抑制其生长值pH2微生物生长需要特定的pH值范围，pH值过高或过低都会抑制其生长氧气3微生物对氧气的需求不同，有的需要氧气才能生长，有的不需要氧气，有的对氧气敏感营养物质4微生物生长需要各种营养物质，如碳源、氮源、无机盐、生长因子等温度对生长的影响12最适温度最低温度微生物生长速度最快的温度，通常在微生物能够生长的最低温度，低于最30-37℃之间低温度，微生物会停止生长3最高温度微生物能够生长的最高温度，高于最高温度，微生物会死亡值对生长的影响pH最适值pH1微生物生长速度最快的pH值，通常在

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7.5之间最低值pH2微生物能够生长的最低pH值，低于最低pH值，微生物会停止生长最高值pH3微生物能够生长的最高pH值，高于最高pH值，微生物会死亡氧气对生长的影响需氧菌厌氧菌需要氧气才能生长，如大肠杆在无氧环境中生长，如破伤风杆菌菌兼性厌氧菌可以在有氧或无氧环境中生长，如酵母菌营养物质对生长的影响碳源氮源提供微生物生长所需的碳元素，如葡提供微生物生长所需的氮元素，如氨萄糖、蔗糖、淀粉等基酸、蛋白胨、酵母膏等无机盐生长因子提供微生物生长所需的各种无机离一些微生物无法自身合成某些必需的子，如磷酸盐、硫酸盐、镁盐等物质，需要从外界补充，如维生素、氨基酸等化学消毒剂的应用酒精1常用于消毒皮肤、器具和物体表面，可杀死大多数细菌和病毒过氧化氢2一种强氧化剂，可用于消毒物体表面和伤口，也能用于灭菌碘伏3一种广谱消毒剂，可用于消毒皮肤、伤口和物体表面漂白粉4一种高效的消毒剂，常用于消毒水源和物体表面，也能用于灭菌高温灭菌的原理原理方法高温可以破坏微生物的蛋白质和核酸，从而使微生物失去活常用的高温灭菌方法有高压蒸汽灭菌法和干热灭菌法性高压蒸汽灭菌的操作准备将要灭菌的物品包装好，并放入高压蒸汽灭菌锅中加水在高压蒸汽灭菌锅中加入适量的水，水位要达到规定的高度加热加热高压蒸汽灭菌锅，使锅内的温度达到121℃，并保持一定时间降压灭菌结束后，缓慢排气，使锅内的压力下降到常压，然后打开锅盖取出物品过滤灭菌的原理原理方法利用孔径小于细菌的滤膜，将细菌和其他微生物截留在滤膜常用的过滤灭菌方法有微孔滤膜过滤法和超滤法上，从而达到灭菌的目的常见微生物的分离培养细菌真菌放线菌细菌的培养需要使用固体培养基，如琼真菌的培养需要使用固体培养基，如马放线菌的培养需要使用固体培养基，如脂培养基，并将细菌接种到培养基上进铃薯葡萄糖琼脂培养基，并将真菌接种高氏1号培养基，并将放线菌接种到培行培养到培养基上进行培养养基上进行培养放线菌的分离培养土壤样品培养基放线菌广泛存在于土壤常用的放线菌培养基包括中，因此土壤是分离放线高氏1号培养基、察氏培养菌的最佳来源基等培养条件放线菌的培养需要在适宜的温度和湿度条件下进行，通常在28-30℃之间培养酵母菌的分离培养样品来源培养基酵母菌广泛存在于水果、蔬菜、常用的酵母菌培养基包括麦芽汁土壤等环境中培养基、酵母膏培养基等培养条件酵母菌的培养需要在适宜的温度和pH值条件下进行，通常在25-30℃之间培养，pH值在

4.5-

6.0之间真菌的分离培养霉菌酵母菌霉菌通常以孢子进行繁殖，可以酵母菌通常以出芽方式进行繁通过将空气中或物体表面的孢子殖，可以通过将酵母菌接种到培接种到培养基上进行培养养基上进行培养微生物菌株的保藏目的1为了长期保存微生物菌株，使其保持活性，并防止其发生变异或污染方法2常用的微生物菌株保藏方法包括冻干保藏法、低温保藏法、液氮保藏法等冻干保藏法原理优点将微生物菌株在冷冻状态下脱水，使其处于休眠状态，从而可以长期保存微生物菌株，并能有效地防止菌株发生变异或保存其活性污染低温保藏法原理优点将微生物菌株保存在低温环境中，以抑制其生长和代谢，从操作简单，成本低，适合保存一些对低温敏感的微生物菌而延长其保存时间株液氮保藏法原理优点将微生物菌株保存在液氮中，液氮的温度极低，可以有效地可以长期保存微生物菌株，并能有效地防止菌株发生变异或抑制菌株的生长和代谢污染，适合保存一些对低温敏感的微生物菌株微生物菌株的鉴定形态观察1观察菌株的形态特征，如大小、形状、颜色等，并进行革兰氏染色生理生化试验2通过测试菌株的生理生化特征，如碳源利用、氮源利用、酶活性等，来鉴定菌株的种类分子生物学鉴定3采用基因测序、DNA指纹图谱等分子生物学技术，对菌株进行精确的鉴定常见鉴定方法显微镜观察1观察细菌的形态，如球菌、杆菌、螺旋菌等，并进行革兰氏染色生理生化试验2测试细菌的生理生化特征，如氧化酶试验、吲哚试验、甲基红试验等血清学反应3利用抗原-抗体反应来鉴定细菌，如凝集反应、沉淀反应等分子生物学鉴定4采用基因测序、DNA指纹图谱等分子生物学技术，对细菌进行精确的鉴定展望未来发展趋势高通量筛选基因编辑技术利用高通量筛选技术，快速利用基因编辑技术，对微生筛选具有特定功能的微生物物菌株进行改造，使其具有菌株更强的功能和更高的产量合成生物学利用合成生物学技术，设计和构建新的微生物菌株，以满足特定的需求课程总结与反馈通过本课程的学习，我们掌握了微生物菌株的培养技术，包括细菌、真菌、放线菌等常见微生物的培养方法，以及菌株的保藏和鉴定欢迎大家提出问题，并积极参与讨论，共同学习进步！。