2023年酵母RNA的提取实验报告

酵母的提取紫外吸取法测浓度试验汇报RNA RNA

一、试验目的

1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和措施

2、掌握紫外线UV吸取法测定核酸浓度的I原理

3、熟悉紫外分光光度计时使用措施

二、试验原理核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内对核酸的研究是更深入硕士命体的基本前提之一研究核酸需要纯度很高日勺核酸，因此核酸的提取措施也就在生物学研究中相称重要本次试验提取酵母的核糖核酸RNAo RNA离体后稳定性很差，含量低，因此在提取的时候就要注意防止核酸日勺降解和变性，防止过酸、过碱、防止剧烈搅拌，尤其重要的I是防止RNA酶的作用本试验是医药卫生领域与大工业生产的基础措施核酸RNA都是由核昔酸构成的多聚核昔酸化合物，而核昔酸是由糖、碱基和磷酸以等分子比例构成的，故测定构成核甘酸的J任意一种组分即可以测定生物体内核酸欧I含量或者是提取出来的核酸的含量提取RNA的措施诸多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法前者是运用碱使细菌细胞壁溶解，是RNA释放出来，后者是在加热的条件下，运用高浓度日勺盐变化细胞膜的通透性，使RNA释放出来使用浓盐法提取RNA曰勺时候应当注意掌握温度，直接至90~100℃浸提，防止在20~70℃日勺时间过长，由于这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的作用活跃的温度范围，会使RNA降解而减少提取率这两种措施是从废弃的啤酒酵母中提取RNA的一般措施不过这两种措施各有利弊，如浓盐法提取的IRNA纯度高，而稀碱法提取的时间短，提取率高，更利于工业化生产RNA在260nm处有最大吸取峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比，故可以用紫外分光光度计通过比色来测定RNA含量由于蛋白质在280nm波长处也有光吸取，对RNA测定有一定欧I干扰作用，但蛋白质的I最大吸取峰在280nm处，如同步测定280nm日勺光吸取，通过计算可消除其对RNA测定的影响因此如其中具有蛋白质时必须同步测定280nm和260nm的吸光度，可通过计算测定溶液中RNA的含量

三、试验器材电子天平、离心机、量筒、烧杯、锥形瓶、紫外分光光度计、容量瓶（100mL）、移液管（5ml）、试管和试管架、PH1-14试纸

四、试验试剂

0.2%NaOH.酸性乙醇（5mlHCl加入剂、500ml95%乙醇）、95%乙醇、无水乙醇、酵母粉、第一次试验所提取日勺酵母RNA、原则RNA液（100ug/ml）、

0.2%NaoH溶液、蒸储水

五、试验环节

1、称取4g干酵母粉，放入200nli锥形瓶中，加入40ml

0.2%NaOH,沸水浴30分钟，后流水冷却将冷却后日勺液体倒入离心管中，离心15分钟,4000转/min留上清液，加入95%酸性乙醇溶液40mL边加边搅拌，再4000转/min离心5min保留沉淀，用10ml95%乙醇洗沉淀o两次，每次洗后离心3000转/min,5分钟洗完后，再用10ml无水乙醇分别洗涤两次，每次洗后离心5min,3000转/min最终，搜集沉淀于滤纸上，保留备用

2、称取

0.2460gRNA于100ml烧杯中，加2ml

0.2%NaOH和lmlH20溶解，调成糊状，加入50ml左右水，边溶解边用

0.2%NaOH调PH至

7.0,后定容至100ml混匀

3、取2ml定容后溶液再定容至100ml,按表

1.所示分别向试管中加入定量试剂，混匀，用紫外分光光度计260nm紫外线测吸光度其并登记表格

4、反复环节

3.

5、再一次反复环节

3.表

1.

六、试验成果表

2.谑据构检1234567平行2260m觥度

00.

2390.

3520.

4680.

5820.

6890.

9080.

6980.

7250.697L-----------根据表

1.表

2.绘制出原则曲线紫外线测RNA浓度原则曲线吸光度260nm吸光度♦260nm（吸光------Linear260nm051015202530354045样品平均吸光度为

0.707通过原则曲线可得到稀释后样品浓度为

30.739U g/ml所得样品RNA百分含量3二=

62.48%

七、分析与讨论

1、在使用离心机时，离心管要对称放置，并且对称的I离心管重量也要相似,否则会对离心机导致毁坏

2、提取RNA最终在用酒精洗涤沉淀时，要充足混匀，提高提取的JRNA的浓度

3、根据理论在5-45u g/ml与吸光值成正比，而该范围的两个端点没有取到,这样所得到的原则曲线的范围变小，并且也许会有一定偏差，进而也许导致试验成果出现误差

4、用紫外光吸取法测定样品的核酸含量，具有简朴、迅速、敏捷度高的长处，不过待测核酸样品中具有的微量蛋白质和核甘酸等吸取紫外光物质时，会产生较小测定误差由于蛋白质在280nm波长处有光吸取，假如同步测定280nm的光吸取，通过计算可消除蛋白质对RNA测定的影响，减少试验误差

5、我们组得到的RNA的浓度相对来说是较高的，这得益于我们操作过程的愈加精确与细心，在测定吸光度时，对没有用手碰触比色皿的光滑一面，保持试验欧I精确性。