兽医实验室知识500点

兽医实验室人员常用技术知识点

（一）

一、动物防疫法规、动物疫病预防控制机构的法定职责1依法承担动物疫病的监测、检测、诊断、流行病学调查、疫情报告以及其他预防、控制等技术工作、我国对病原微生物实行分类管理，农业部颁布了动物病原微生物分类名录，将动物病原微2生物分为类，各类动物病原微生物的划分标准如下4第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物如口蹄疫病毒、高致病性禽流感病毒、牛海绵状脑病病原第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物如蓝舌病病毒、兔病毒性出血症病毒、炭疽芽泡杆菌、布氏杆菌第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物如低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、结核分支杆菌第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物、一类动物病原微生物有口蹄疫病毒、高致病性禽流感病毒、猪水泡病病毒、非洲猪瘟病毒、3非洲马瘟病毒、牛瘟病毒、小反刍兽疫病毒、牛传染性胸膜肺炎丝状支原体、牛海绵状脑病病原、痒病病原、二类动物病原微生物有猪瘟病毒、鸡新城疫病毒、狂犬病病毒、绵羊痘/山羊痘病毒、蓝舌4病病毒、兔病毒性出血症病毒、炭疽芽抱杆菌、布氏杆菌、根据动物疫病对养殖业和人体健康的危害程度，《动物防疫法》规定管理的动物疫病分为53类.各类疫病的界定是一类疫病，是指对人畜危害严重，需要采取紧急、严厉的强制预防、控制、扑灭措施的；二类疫病，是指可造成重大经济损失，需要采取严格控制，扑灭措施，防止扩散的；三类疫病，是指常见多发，可能造成重大经济损失，需要控制和净化的、实验室质量管理手册是为贯彻实验室质量管理方针和目标编制的、适应检测工作需要和保95证检测质量的、本实验室员工必须遵守的纲领性文件，规定了质量管理体系各个要素和管理要求，为一级文件、质量管理程序文件是质量管理手册的支持性文件，为满足检测质量要求，描述了检测的各96个环节、过程，以确保所有过程受控为二级文件、作业指导书是检测工作的技术文件，是程序文件的细化它包括检测方法、检测实施细则、97各类设备操作规程等详细的操作文件为配套性文件、技术记录表格及质量记录表格等为辅助性文件，是质量控制和检测工作全过程的记载它98是质量体系有效运行和检测工作符合规定要求的证据，同时也是持续改进的依据、每次检测的记录应包含足够的信息，以保证其能够复检再现

99、实验室管理制度100实验室岗位责任制，实验室档案资料管理制度，仪器设备使用管理制度，药品试剂管理制度,病料采集、保存及运输制度，实验室卫生安全制度，实验室生物安全管理制度，实验室安全操作规定，实验记录、检验报告审核制度，实验室样品管理制度，菌（毒）种管理制度，实验室剧毒药品管理领取使用制度，实验室废弃物及污染物的无害化处理制度等、所有质量记录和原始记录、计算和导出数据、记录以及证书/证书副本等技术记录均应当101归档并按适当的期限保存、实验室应有与其从事检测活动相适应的专业技术人员和管理人员所有人员应经过相应102的培训并持证上岗、实验室应建立检测样品的唯一性标识，避免样品和记录出现混淆

103、实验室检测结果的原始记录应当包括的基本信息104检测日期；样品名称（样品种类）、数量、编号；检测结果；依据的方法和标准；试剂名称、批号；仪器设备名称、编号；环境条件（环境温度、湿度等）；检验人员、校核或审核人员等、检测人员在填写检测记录时如遇记录错误确需更改时，应由项目检验人员在原始记录的105错误字符上划上二横，将正确的字符填在上方并盖上更改人章或更改人的签名不得采用涂改、粘贴等方式，以致辨认不清原有的字符、实验室应指定专人对检测标准进行定期查新，以保证检测标准的时效性

106、用于实验室检测的试剂，在使用前必须经过确认，证明能够满足检测方法规定的要求、107108实验室应当严格分区，一般分成试剂配制区、核酸（样品）提取区、扩增区、PCR PCR PCR扩增结果检测（电泳）区等个区

4、实验室属于强制检定范围的计量器具，未按照规定申请检定或者检定不合格继续使用的，109责令停止使用，可以并处罚款

四、动物疫病防控技术规范、高致病性禽流感的特征性临床症状110急性发病死亡或不明原因死亡，潜伏期从几小时到数天，最长可达天，脚鳞出血，鸡冠出21血或发绢、头部和面部水肿；鸭、鹅等水禽可见神经和腹泻症状，有时可见角膜炎症，甚至失明；产蛋突然下降、高致病性禽流感的临床诊断指标111（）急性发病死亡或不明原因死亡；1（）脚鳞出血；2（）鸡冠出血或发绡、头部和面部水肿；3（）肌肉和其他组织器官广泛性严重出血；4（）明显的神经症状（适于水禽）

5、高致病性禽流感的血清学诊断指标112未免疫禽或的血凝抑制效价达到及以上，禽流感琼脂免疫扩散试验阳性H5H7HI24AGID、高致病性禽流感的病理诊断指标113消化道、呼吸道粘膜广泛充血、出血；腺胃粘液增多，可见腺胃乳头出血，腺胃和肌胃之1间交界处粘膜可见带状出血输卵管的中部可见乳白色分泌物或凝块；卵泡充血、出血、萎缩、破裂，有的可见“卵黄2性腹膜炎”脑部出现坏死灶、血管周围淋巴细胞管套、神经胶质灶、血管增生等病变；胰腺和心肌组3织局灶性坏死、高致病性禽流感疑似病例的判定标准114在临床上怀疑为高致病性禽流感，且符合以下病原学指标之一的可判定为疑似病例反转录-聚合酶链反应检测，结果或亚型禽流感阳性；1RT-PCR H5H7通用荧光反转录-聚合酶链反应荧光检测阳性；2RTFCR神经氨酸酶抑制试验阳性3NI、高致病性禽流感的病原学诊断指标115反转录-聚合酶链反应检测，结果或亚型禽流感阳性；1RT-PCR H5H7通用荧光反转录-聚合酶链反应荧光检测阳性；2RT-PCR神经氨酸酶抑制试验阳性；3NI静脉内接种致病指数大于；或用无菌感染流感病毒的鸡胚尿囊液，经4IVPI

1.

20.2mL1:10静脉注射接种只周龄的易感鸡，在接种后天内，能致只或只鸡死亡,即死亡率84-8106-78“5%、口蹄疫的流行病学特点116口蹄疫病毒侵害多种动物，偶蹄兽易感家畜以牛易感，奶牛、耗牛、蝙牛最易感,水牛1次之，其次是猪，再次为绵羊、山羊和骆驼仔猪和犊牛不但易感且死亡率高野生动物中黄羊、鹿、麝和野猪也感染发病；长颈鹿、扁角鹿、野牛和瘤牛等都易感传染源主要为潜伏期感染及临床发病动物感染动物呼出物、唾液、粪便、尿液、乳、精2液及肉和副产品均可带毒康复期动物也可带毒易感动物可通过呼吸道、消化道、生殖道和伤口感染病毒，通常以直接或间接接触飞沫等3方式传播，或通过人或犬、蝇、蝉、鸟等动物媒介，或经车辆、器具等被污染物传播如果环境气候适宜，病毒可随风远距离传播、口蹄疫的特征性临床症状117唇部、舌面、齿龈、鼻镜、蹄踵、蹄叉、乳房等部位出现水泡、口蹄疫的主要病理变化118⑴消化道可见水泡、溃疡；⑵幼畜可见骨骼肌、心肌表面出现灰白色条纹，形色酷似虎斑、口蹄疫的临床诊断指标119⑴牛呆立流涎，猪卧地不起，羊跛行；⑵唇部、舌面、齿龈、鼻镜、蹄踵、蹄叉、乳房等部位出现水泡；⑶发病后期，水泡破溃、结痂，严重者蹄壳脱落，恢复期可见瘢痕、新生蹄甲⑷传播速度快，发病率高；成年动物死亡率低，幼畜常突然死亡且死亡率高，仔猪常成窝死亡、猪瘟的典型症状120发病急、死亡率高；1体温通常升至℃以上、厌食、畏寒；241先便秘后腹泻，或便秘和腹泻交替出现；3腹部皮下、鼻镜、耳尖、四肢内侧均可出现紫色出血斑点，指压不褪色，眼结膜和口腔黏4膜可见出血点、猪瘟在病理学诊断上肉眼可见典型病变121淋巴结水肿、出血，呈现大理石样变；1肾脏呈土黄色，表面可见针尖状出血点；2全身浆膜、黏膜和心脏、膀胱、胆囊、扁桃体均可见出血点和出血斑，脾脏边缘出现梗死3灶；脾不肿大，边缘有暗紫色突出表面的出血性梗死；4慢性猪瘟在回肠末端、盲肠和结肠常见“钮扣状”溃疡

5、猪瘟的净化原则122对种猪场和规模养殖场的种猪定期采样进行病原学检测，对检测阳性猪及时进行扑杀和无害化处理，逐步进行净化、高致病性猪蓝耳病的临床症状123体温明显升高，可达℃以上；眼结膜炎、眼睑水肿；咳嗽、气喘等呼吸道症状；部分猪后41躯无力、不能站立或共济失调等神经症状；仔猪发病率可达、死亡率可达以上，母100%50%猪流产率可达以上，成年猪也可发病死亡30%、马传染性贫血简称马传贫的临床特征124急性型高热稽留，亚急性型呈间歇热，慢性型不规则发热，但发热时间短；隐性型无可见临床症状，体内长期带毒、炭疽的典型症状125呈急性经过，多以突然死亡、天然孔出血、尸僵不全为特征1牛体温升高常达℃以上，可视黏膜呈暗紫色，心动过速、呼吸困难241猪多为局限性变化，呈慢性经过，临床症状不明显，常在宰后见病变

3、猪链球菌病有以下几个病型126败血症型、脑膜炎型、淋巴结脓肿型、关节炎型等、根据《马立克氏病防治技术规范》，马立克氏病的实验室诊断方法127病原分离鉴定、组织病理学诊断、琼脂扩散试验、马鼻疽的实验室诊断方法128鼻疽菌素点眼法、鼻疽菌素皮下注射法、鼻疽菌素眼睑皮内注射法、酶联免疫吸附试验、发现重大动物疫病疑似病例时，当地动物疫病预防控制机构在按规定报告的同时，应采129集病料并送至省级动物疫病预防控制机构进行疑似诊断，再送至国家指定的参考实验室进行确诊、动物防疫监督机构在接到疫情报告后，怀疑是高致病性禽流感、口蹄疫的，应在小时1302以内将情况逐级报到省级畜牧兽医行政管理部门、口蹄疫疑似疫情处置方法131对疫点实施隔离、监控，禁止家畜、畜产品及有关物品移动，并对其内、外环境实施严格1的消毒措施必要时采取封锁、扑杀等措施

2、口蹄疫疫点、疫区、受威胁区的划分132口蹄疫的疫点是指发病畜所在的地点相对独立的规模化养殖场/户，以病畜所在的养殖场1/户为疫点；散养畜以病畜所在的自然村为疫点；放牧畜以病畜所在的牧场及其活动场地为疫点；病畜在运输过程中发生疫情，以运载病畜的车、船、飞机等为疫点；在市场发生疫情，以病畜所在市场为疫点；在屠宰加工过程中发生疫情，以屠宰加工厂（场）为疫点（）口蹄疫疫区是指由疫点边缘向外延伸公里内的区域23（）受威胁区是指由疫区边缘向外延伸公里的区域

310、确诊为口蹄疫疫情后，应立即启动相应级别的应急预案，对疫点、疫区分别采取相应措133施（）封锁1疫情发生所在地县级以上兽医行政管理部门报请同级人民政府对疫区实行封锁，人民政府在接到报告后，应在小时内发布封锁令24跨行政区域发生疫情的，由共同上级兽医行政管理部门报请同级人民政府对疫区发布封锁令（）对疫点采取的措施2扑杀疫点内所有病畜及同群易感畜，并对病死畜、被扑杀畜及其产品进行无害化处理；对排泄物、被污染饲料、垫料、污水等进行无害化处理；对被污染或可疑污染的物品、交通工具、用具、畜舍、场地进行严格彻底消毒；对发病前天售出的家畜及其产品进行追踪，并做扑杀和无害化处理.14（）对疫区采取的措施3在疫区周围设置警示标志，在出入疫区的交通路口设置动物检疫消毒站,执行监督检查任务,对出入的车辆和有关物品进行消毒；所有易感畜进行紧急强制免疫，建立完整的免疫档案；关闭家畜产品交易市场，禁止活畜进出疫区及产品运出疫区；对交通工具、畜舍及用具、场地进行彻底消毒；对易感家畜进行疫情监测，及时掌握疫情动态；必要时，可对疫区内所有易感动物进行扑杀和无害化处理、口蹄疫受威胁区应采取的措施134（）最后一次免疫超过一个月的所有易感畜，进行一次紧急强化免疫；1（）加强疫情监测，掌握疫情动态

2、应用深埋法对口蹄疫病死牲畜进行无害化处理的具体方法135（）选址掩埋地应选择远离学校、公共场所、居民住宅区、动物饲养和屠宰场所、村庄、饮1用水源地、河流等避免公共视线（）深度坑的深度应保证动物尸体、产品、饲料、污染物等被掩埋物的上层距地表米以

21.5上坑的位置和类型应有利于防洪（）焚烧掩埋前，要对需掩埋的动物尸体、产品、饲料、污染物等实施焚烧处理3（）消毒掩埋坑底铺厚生石灰；焚烧后的动物尸体、产品、饲料、污染物等表面，以42cm及掩埋后的地表环境应使用有效消毒药品喷洒消毒（）填土用土掩埋后，应与周围持平填土不要太实，以免尸腐产气造成气泡冒出和液体渗5漏（）掩埋后应设立明显标记

6、对患口蹄疫或疑似口蹄疫的动物应采取电击、药物注射等无出血的扑杀方法进行扑杀

136、封锁的疫区解除封锁的条件137自疫区内最后一头（只）发病动物及其同群动物处理完毕起，经过一个潜伏期以上的监测，未出现新的病例的，彻底消毒后，经上一级动物防疫监督机构验收合格，由原发布封锁令的例如人民政府宣布解除封锁，撤销疫区、高致病性禽流感疫情诊断级程序1384专家临床初步诊断，省级实验室确认疑似，国家参考实验室毒型鉴定（确诊），农业部最终确认和公布、当发生高致病性禽流感疫情时，应扑杀疫点和疫区内的所有禽类

139、发生高致病性禽流感疫情时疫点、疫区、受威胁区的划定140（）疫点患病禽类所在的地点一般是指患病禽类所在的禽场（户）或其他有关屠宰、经营1单位；如为农村散养，应将自然村划为疫点（）疫区由疫点边缘向外延伸巧公里的区域划为疫区疫区划分时，应注意考虑当地23的饲养环境和天然屏障（如河流、山脉等）（）受威胁区由疫区边缘向外延伸公里的区域划为受威胁区35-

30、发生高致病性禽流感时对疫点应采取的应急处理措施141（）扑杀所有的禽只，并对所有病死禽、被扑杀禽及其禽类产品按国家规定标准进行无害化处1理（）对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等进行无害化处理2（）对被污染的物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行严格彻底消毒

3、发生高致病性禽流感时对疫区应采取的应急处理措施142（）在疫区周围设置警示标志，在出入疫区的交通路口设置动物检疫消毒站，对出入的人员和1车辆进行消毒（）按规定扑杀疫区内所有家禽，并进行无害化处理，同时销毁相应的禽类产品2（）关闭活禽及禽类产品交易市场，禁止易感活禽进出和易感禽类产品运出3（）对禽类排泄物、被污染饲料、垫料、污水等按国家规定标准进行无害化处理；4（）对所有与禽类接触过的物品、交通工具、用具、禽舍、场地进行彻底消毒

5、禽场发生高致病性禽流感疫情时，应采取以下方法对疫点进行紧急防疫消毒143（）对圈舍及场地内外采用喷洒消毒液的方式进行消毒，消毒后对污物、粪便、饲料等进行清1理；清理完毕再用消毒液以喷洒方式进行彻底消毒，消毒完毕后再进行清洗；不易冲洗的圈舍清除废弃物和表土，进行堆积发酵处理（）对金属设施设备，可采取火焰、熏蒸等方式消毒；木质工具及塑料用具采取用消毒液浸泡2消毒；工作服等采取浸泡或高温高压消毒（）污水沟、水塘可投放生石灰或漂白粉3（）在出入疫点的交通路口设立消毒站点，对所有可能被污染的运载工具应当严格消毒4（）对车辆上清理下来的废弃物进行无害化处理5（）每天消毒次连续周，周以后每两天消毒次

61111、根据《高致病性禽流感防治技术规范》，发生高致病性禽流感疫情后，家禽的尸体、产144品及污染物应进行无害化处理，处理方式有深埋、发酵、工业化处理等、高致病性禽流感病禽及废弃物深埋无害化处理过程，应做到以下几点145（）选址应当避开公共视线，选择地表水位低、远离学校、公共场所、居民住宅区、动物饲养1场、屠宰场及交易市场、村庄、饮水水源地、河流等地域位置和类型应有利于防洪（）禽类尸体置于坑中后，浇油焚烧，然后用土覆盖，与周围持平填土不要太实，以免尸腐2产气造成气泡冒出和液体渗漏（）饲料、污染物等置于坑中，喷洒消毒剂后掩埋

3、发生高致病性猪蓝耳病后，应采取以下几种措施146（）扑杀所有病猪和同群猪1（）对未发病的相对独立圈舍的生猪用高致病性猪蓝耳病疫苗进行紧急强化免疫，并加强疫情2监测（）对病死猪、排泄物、被污染饲料、垫料、污水等进行无害化处理，对被污染的物品、交通3工具、用具、猪舍、场地等进行彻底消毒、发生高致病性禽流感疫情时，要对受威胁区域的所有家禽进行一次强化免疫；边境地区147受到境外疫情威胁时，要对距边境公里范围内所有家禽进行一次强化免疫最近个月内301已免疫的家禽可以不强化免疫、按照《年国家动物疫病监测计划》要求，型口蹄疫灭活疫苗免疫抗体检测方法为1482012O正向间接血凝试验（）和液相阻断使用合成肽疫苗的，采用结构蛋白进行hA ELISA,VP1ELISA检测、家畜群体口蹄疫免疫抗体合格判定标准149家畜免疫天后，存栏家畜免疫抗体合格率判定为群体免疫合格21270%、按照农业部规定，家畜个体口蹄疫免疫抗体合格判定标准150亚洲型口蹄疫液相阻断的抗体效价判定为合格I ELISA226型口蹄疫:正向间接血凝试验的抗体效价判定为合格，液相阻断的抗体效价之判O225ELISA26定为合格，结构蛋白抗体的抗体效价判定为合格VP1ELISA225型口蹄疫液相阻断的抗体效价判定为合格A ELISAN

26、防控重大动物疫情字方针15124加强领导、密切配合、依靠科学、依法防治、群防群控、果断处置、根据《年国家动物疫病监测计划》，高致病性禽流感的血清学监测试验方法和判定1522012标准如下（）方法血凝抑制试验（）1HI（）判定弱毒疫苗，商品代肉雏鸡第二次免疫天后，鸡群免疫抗体转阳为合格；214250%灭活疫苗，家禽免疫天后，抗体效价为免疫合格21HI

224、按照《年国家动物疫病监测计划》要求，高致病性猪蓝耳病血清学检测方法为1532012ELISAo、根据《年国家动物疫病监测计划》，猪瘟免疫抗体监测方法为抗体阻断和1542012ELISA猪瘟抗体正向间接血凝、按照《年国家动物疫病监测计划》要求，活疫苗免疫天后，高致病性猪蓝耳病155201228免疫抗体值＞为合格存栏猪免疫抗体合格率与时为群体免疫合格ELISA IRPC200%、按照《年国家动物疫病监测计划》要求，进行口蹄疫病原学检测时，食道■咽部分1562012泌物（液）用方法进行检测0-P RT-PCR、牲畜口蹄疫病原学检测结果为阳性的，应立即采取的措施157（）样品要及时送国家口蹄疫参考实验室进行病原分离鉴定1（）扑杀阳性畜，必要时对同群畜进行扑杀，并作无害化处理2（）将阳性情况按快报要求报告

3、按照《年国家动物疫病监测计划》要求，高致病性禽流感病原学监测方法为1582012RTFCR或荧光RT-PCRo、根据《年国家动物疫病监测计划》，猪瘟病原学检测方法采用或荧光1592012RT-PCRPCR方法、荧光免疫抗体方法、按照《年国家动物疫病强制免疫计划》要求，对高致病性禽流感、高致病性猪蓝耳1602012病、口蹄疫、猪瘟等四种动物疫病强制免疫的总体要求是，群体免疫密度常年维持在以上，90%其中应免畜禽免疫密度要达到免疫抗体合格率全年保持在以上100%,70%、《年国家动物疫病强制免疫计划》要求规模养殖家畜和种畜口蹄疫免疫程序为仔1612012猪、羔羊28〜35日龄时进行初免犊牛日龄左右进行初免90所有新生家畜初免后，间隔1个月后进行一次强化免疫，以后每隔4〜6个月免疫一次、《年国家动物疫病强制免疫计划》要求对所有鸡、水禽（鸭、鹅）和人工饲养的鹤1622012鹑、鸽子等禽只进行高致病性禽流感强制免疫、散养禽高致病性禽流感免疫程序为春、秋两季用亚型禽流感灭活疫苗各进行一163H5N1次集中全面免疫，每月定期补免、《年国家动物疫病强制免疫计划》要求规模养猪场猪瘟免疫程序为1642012商品猪25〜35日龄初免，60〜70日龄加强免疫一次种猪25〜35日龄初免，60〜70日龄加强免疫一次，以后每4〜6个月免疫一次、根据《年国家动物疫病强制免疫计划》，小反刍兽疫免疫程序为1652012新生羔羊月龄以后免疫一次，对本年未免疫羊和超过年免疫保护期的羊进行免疫

13、布鲁氏菌病稳定控制标准，连续年以上具备以下项条件16633羊血清学检查阳性率在以下、猪在以下；牛、鹿以下

10.1%

0.3%

0.2%抽检羊、牛、猪等动物样品材料检不出布鲁氏菌2患病动物全部扑杀，并进行了无害化处理

3、根据《年全国高致病性禽流感和口蹄疫等主要动物疫病流行病学调查方案》，以下1672012情况下需进行紧急流行病学调查怀疑或确认发生高致病性禽流感等重大动物疫病时1怀疑或确认发生疯牛病等外来动物疫病时2猪瘟等主要动物疫病流行特征出现明显变化时

3、根据《乳用动物健康标准》，对乳用动物的健康状况，当地动物疫病预防控制机构每年168至少检测一次、按照《国家动物疫情测报体系管理规范》规定，应对种用、役用动物开展以下疫病的监169测按照猪、牛、羊、马属动物、鸡、鸭、鹅等动物种类分别列举猪口蹄疫、猪水泡病、猪瘟、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合症牛口蹄疫、结核、布鲁氏菌病、疯牛病羊口蹄疫、布鲁氏菌病、山羊/绵羊痘、痒病马属动物马传贫、马鼻疽鸡新城疫、禽流感鸭、鹅禽流感兽医实验室人员常用技术知识点二来源:阳光畜牧网-河北省畜牧兽医局浏览次2013-03-1214:36:20114

一、兽医免疫学及微生物学基本知识、免疫是指动物机体对外源性或内源性的异物进行识别、排斥和清除的过程，即“识别异己”170和“排斥异己”的反应，以维持机体内外环境相对平衡和稳定、动物机体的免疫有天然的、非特异性的先天性免疫和后天获得的、具有特异性的获得性171免疫两大类、非特异性免疫，是个体出生后就具有的天然免疫力，故又称先天性免疫

172、获得性免疫分为天然自动免疫、天然被动免疫、人工自动免疫、人工被动免疫个类1734型、将免疫血清或自然发病后康复动物的血清人工输入未免疫的动物，使其获得对某种病原174微生物的抵抗力，称为人工被动免疫、动物机体免疫系统由免疫器官和免疫活性细胞组成

175、免疫器官分为中枢免疫器官和外周免疫器官两部分

176、免疫活性细胞指受到抗原刺激后特异地识别抗原并发生免疫反应的一类细胞，具有免177疫潜能，又称免疫致敏细胞包括淋巴细胞和淋巴细胞两大群T B、细胞是具有免疫活性的胸腺依赖性淋巴细胞，执行细胞免疫178T、细胞是在非胸腺依赖区由多能干细胞分化增殖产生的免疫活性细胞，执行体液免疫179B细胞受抗原刺激后逐级分化成浆母细胞、浆细胞浆细胞能够产生特异性的抗体即特异性免B疫球蛋白lgo、免疫球蛋白可分为、、、、五大类动物体内首先出现的免疫球蛋白180IgG IgAIgM IgDIgE是但消失较快；是哺乳动物血清中占比最大的、最重要的免疫球蛋白IgM,IgG、是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白，具有抗菌、抗病毒作用，亦是抗毒素的主要免181IgG疫球蛋白，能中和毒素使其失去活性、与抗原结合能出现沉淀反应、凝集反应补体结合反应和中和反应182IgG、经木瓜酶水解断裂为三个大小相似的断片其中两个断片可与抗原结合，称为抗183IgG原结合片断段，另一断片可结晶，称为结晶片断段Fab Fc、抗体初次应答具有的特点是抗体含量低、维持时间短

184、抗体再次应答的特征是有短暂阴性期、抗体峰值高且维持时间长

185、抗原具有免疫原性与反应原性免疫原性指抗原能刺激机体产生抗体和效应淋巴细胞;186反应原性指抗原与相应的抗体或致敏淋巴细胞发生反应的特性、补体是正常人和动物血清中一组不耐热的具有酶活性的球蛋白

187、疫苗的分类方法有多种，包括活苗和灭活苗、联苗与多价苗、寄生虫疫苗、类毒素、亚188单位组份苗和基因工程苗等、疫苗佐剂的分类及常用佐剂189不溶性铝盐类佐剂，主要是氢氧化铝胶，其次是明矶及磷酸三钙等1（）油水乳剂佐剂，此类佐剂最著名的有弗氏佐剂2（）蜂胶佐剂，蜂胶是蜜蜂采自柳树、杨树、栗树和其他植物幼芽分泌的树脂，并混入蜜蜂上3颗腺分泌物，以及蜂腊、花粉及其他一些有机与无机物的一种天然物质（）微生物及其代谢产物佐剂，如结核杆菌，破伤风类毒素和分枝杆菌细胞壁的一些成分等4（）人工合成佐剂，如海藻糖合成衍生物等5（）其他类型佐剂，如免疫刺激复合物佐剂、细胞因子类佐剂、非离子阻断共聚物表面活性剂6佐剂、核酸及其类似物佐剂和左旋米嗖佐剂等、活苗与灭活苗的优缺点190（）活疫苗优点1类似自然感染过程，在机体内可复制增殖，免疫作用时间长，一次免疫可产生持久的免疫;免疫效果牢固，可形成局部和全身免疫；除注射接种外，可采取自然感染的途径（如口服、喷雾等）进行免疫（）活疫苗缺点2不稳定，不易于保存和运输；易受光和热影响；疫苗容易受到不利因子的污染；受循环抗体、病毒等因素影响，所有干扰病原微生物在体内繁殖的因素，都可引起疫苗免疫失败；在体内有毒力返祖或返强的潜在危险（）灭活疫苗优点3稳定，易于保存和运输；不受循环抗体影响；安全性好，能杀灭任何可能污染疫苗的生物因子（）灭活疫苗缺点4在疫苗灭活过程中可能损害或改变有效的抗原决定簇，需多次注射，并要进行加强免疫；产生免疫效果维持时间短，不产生局部抗体；只能通过注射方式（通常为肌内注射）接种、191疫苗的运输和储存应防止高温、暴晒和反复冻融、疫苗运输与保存应注意事项192疫苗运输时应注意包装严密，尽量缩短运输时间疫苗由于种类不同，在运输和保存过程中,对其温度要求也不相同疫苗在运输和保存中应避免强光、曝晒、高温造成损坏应使用正规疫苗运输工具，或装入有冰决的保温瓶或桶内将疫苗运到目的地途中避免日晒或其他高温禽流感、口蹄疫、猪蓝耳病灭活疫苗，最适宜的温度为℃长期保存温度为℃；猪瘟兔化2-15,2-8弱毒冻干苗的保存温度为・15℃,可保存一年具体情况应仔细阅读各种疫苗的说明书瓶口开封后的疫苗不能再保存，特别是弱毒疫苗、免疫程序的内容及要素193免疫程序内容要包括疫苗接种时间、接种方法、使用剂量、间隔时间、接种次数等，依据动物品种、年龄、疫苗种类等要素进行制定、免疫程序的制定依据194当地疾病流行情况及其规律1根据畜禽的种类、用途、饲养管理条件、畜禽及其产品上市的旺季2母源抗体的水平3疫苗的种类、性质、免疫途径及免疫期

4、属于严格细胞内寄生的微生物是衣原体、支原体、病毒

195、核酸是微生物的遗传物质

196、菌血症、败血症、脓毒血症的概念197菌血症系指细菌侵入到机体血液中但全身无中毒症状;败血症系指致病菌或条件致病菌侵入血液循环，并在血液中生长繁殖，产生毒素而发生的急性全身性感染；脓毒血症系指机体发生败血症，并伴有多发性脓肿且病程较长、细菌的基本形态包括球状、杆状和螺旋状

198、革兰氏染色法经过乙醇脱色、复染步骤后，革兰氏阴性菌呈现红色，革兰氏阳性菌呈现199蓝紫色、常见的革兰氏阳性菌有葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、分枝结核杆菌等

200、常见的革兰氏阴性菌有大肠杆菌、沙门氏菌、布氏杆菌等

201202、大部分细菌生长的最适pH是

7.2〜

7.

6、单个细菌是肉眼看不见的，但细菌的群体菌落是肉眼可见的

203、光滑型菌落的菌落性状为光滑、湿润、边缘整齐

204、不是所有的细菌都具有致病性

205、细菌的荚膜成分常常是构成细菌毒力的因素之一

206、细菌芽胞对外界不良理化因素的抵抗力较细菌繁殖体强得多

207、炭疽杆菌为致病菌中最大的革兰氏阳性杆菌，在感染的动物体内时丁形态上通常是有荚208膜、无芽胞、炭疽杆菌在动物体外可形成芽抱，其芽抱的抵抗力很强，在动物、尸体及其污染的环境209和泥土中存活多年、由于炭疽杆菌能在体外形成芽胞，所以炭疽病死畜一般不能进行剖检

210、鸡马立克氏病常用的血清学诊断方法为琼脂扩散试验

211、酵母为真菌的一种，属于真核微生物

212、显微镜观察结核杆菌需用抗酸染色法染色，可用于初步诊断

213、典型的支原体菌落呈荷包蛋样

214、大肠杆菌在麦康凯培养基上形成红色菌落，该培养基属于鉴别培养基

215、典型的大肠杆菌菌落的性状为光滑、湿润、边缘整齐

216、引起断奶仔猪水肿病的病原体是大肠杆菌

217、引起鸡白痢的病原体是沙门氏菌

218、引起禽霍乱的病原体是多杀性巴氏杆菌

219、能引起羊流产的流行性病原有布氏杆菌、沙门氏菌、焦虫等

220、猪喘气病的病原是猪肺炎支原体

221、我国一类动物疫病有种617口蹄疫、猪水泡病、猪瘟、非洲猪瘟、高致病性猪蓝耳病、非洲马瘟、牛瘟、牛传染性胸膜肺炎、牛海绵状脑病、痒病、蓝舌病、小反刍兽疫、绵羊痘和山羊痘、高致病性禽流感、新城疫、鲤春病毒血症、白斑综合征、我国二类动物疫病主要有种777多种动物共患病（种）狂犬病、布鲁氏菌病、炭疽、伪狂犬病、魏氏梭菌病、副结核病、弓9形虫病、棘球蜘病、钩端螺旋体病牛病（种）牛结核病、牛传染性鼻气管炎、牛恶性卡他热、牛白血病、牛出血性败血病、牛8梨形虫病（牛焦虫病）、牛锥虫病、日本血吸虫病绵羊和山羊病（种）山羊关节炎脑炎、梅迪-维斯纳病2猪病（种）猪繁殖与呼吸综合症（经典猪蓝耳病）、猪乙型脑炎、猪细小病毒病、猪丹毒、12猪肺疫、猪链球菌病、猪传染性萎缩性鼻炎、猪支原体肺炎、旋毛虫病、猪囊尾拗病、猪圆环病毒病、副猪嗜血杆菌病马病（种）马传染性贫血、马流行性淋巴管炎、马鼻疽、马巴贝斯虫病、伊氏锥虫病5禽病（种）鸡传染性喉气管炎、鸡传染性支气管炎、传染性法氏囊病、马立克氏病、产蛋18下降综合征、禽白血病、禽痘、鸭瘟、鸭病毒性肝炎、鸭浆膜炎、小鹅瘟、禽霍乱、鸡白痢、禽伤寒、鸡败血支原体感染、鸡球虫病、低致病性禽流感、禽网状内皮组织增殖症兔病（种）兔病毒性出血病、兔粘液瘤病、野兔热、兔球虫病4蜜蜂病（种）美洲幼虫腐臭病、欧洲幼虫腐臭病2鱼类病（种）草鱼出血病、传染性脾肾坏死病、锦鲤疱疹病毒病、刺激隐核虫病、淡水鱼11细菌性败血症、病毒性神经坏死病、流行性造血器官坏死病、斑点叉尾蒯病毒病、传染性造血器官坏死病、病毒性出血性败血症、流行性溃疡综合征甲壳类病（种）桃拉综合征、黄头病、罗氏沼虾白尾病、对虾杆状病毒病、传染性皮下和造6血器官坏死病、传染性肌肉坏死病、支原体能进行人工培养

222、动物病原性细菌的培养温度大多数为℃

22337、培养基是指由人工方法配合而成的营养基质，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保224存菌种用的混合营养制品、制备细菌培养基的一般程序225称量、加热、溶解、调酸碱度、过滤、灭菌、分装、细菌培养基按照用途可分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基和厌氧226培养基、对怀疑为细菌性传染病的病料进行细菌分离时、采集的样品应分别放入灭菌容器内或灭227菌塑料袋内贴上标签，立即冷藏运送到实验室，若不能立即运送可以暂时冻结处理，以免被杂菌污染，但冻结时间不宜过长、细菌类疾病的诊断步骤228细菌的检验、形态检查1取致死畜禽的组织或血液制成血液涂片或组织触片，经染色，然后在显微镜下观察，对于一些具有特征形态的病原体，可鉴别复染色法如革兰氏染色法细菌的分离培养2细菌的分离用人工培养方法将细菌从病料或某一个菌落移植到新的培养基中培养分离出来，称细菌的分离细菌的生长表现在固体培养基上生长成菌落，应观察其大小、形状、颜色、透明度、隆起度、湿润度、光滑度、有无溶血情况等；细菌在液体培养基内呈扩散生长，表现为浑浊、沉淀、形成菌环、细菌膜等细菌的生化试验通过生物化学方法细菌的代谢产物进行测定，用来区别和鉴定细菌的种3类动物试验将细菌接种于动物，通过动物的症状、病理变化、染色、细菌培养、生物化学4实验、免疫学技术，用来检验细菌免疫学诊断凝集试验，沉淀试验，补体结合试验

5、炭疽病的微生物学诊断方法229疑似炭疽死亡动物的尸体，应尽快自末梢血管耳尖、尾尖等采血，涂片染色镜检，取血后应立即用烙铁将创口烙焦，以止血封口由于病尸体内的炭疽杆菌暴露于空气中，接触了氧，气温又不适宜其生长时，就会形成芽泡，所以尸体严禁剖检涂片镜检取标本涂片进行革兰氏染色，发现有荚膜的呈竹节状排列的革兰氏阳性大杆菌，1结合临床症状可作出初步诊断陈旧病料可以看至『菌影，确诊须做分离培养和动物接种分离培养取病料接种普通琼脂或血液琼脂，培养观察有无典型的炭疽杆菌菌237c18-24h,落，同时革兰氏染色镜检动物试验将待检材料或培养物用生理盐水做适当稀释和磨匀后，皮下注射小鼠、、301-02ml,如为炭疽，多在因败血病死亡剖检可见注射部位皮下胶样水肿，脾脏肿大取脏器18-24h涂片镜检，如发现有荚膜竹节状大杆菌，可确诊血清学试验常用炭疽环状沉淀试验氏反应方法是在一支小玻璃管内把疑为炭4Ascoli疽病死亡动物尸体组织的浸出液与特异性炭疽沉淀素血清重叠，若二液接触面产生灰白色沉淀环，即可诊断、病毒是最小的微生物，其结构简单，表现为无完整的细胞结构，仅有一种核酸或230DNA作为遗传物质核酸属于病毒的有伪狂犬病病毒、马立克氏病病毒、细小病毒、圆RNA DNA环病毒、产蛋下降综合征病毒、痘病毒等核酸属于病毒的有猪瘟病毒、口蹄疫病毒、RNA猪蓝耳病病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、禽白血病病毒、法氏囊病毒、狂犬病病

0、病毒只能在活细胞体内复制

231、病毒复制过程的一般顺序是吸附、侵入、脱壳、生物合成、装配和释放

232、包涵体是某些细胞受病毒感染后出现的特殊斑块结构

233、病毒的培养方法和特点234（）动物接种病毒经注射、口服等途径进入易感动物的体内后可大量增殖，并使动物产生特1定的反应其优点是操作方便易行，缺点是受机体免疫力的影响，常需要用无菌动物常用于分离、增殖病毒，疫苗效力试验，疫苗和抗血清的生产（）鸡胚培养一般用日龄的鸡胚，分别接种于卵黄囊内，羊膜腔，尿囊腔等部位病29-12毒生长的标志为鸡胚死亡、畸型和出血用于病毒分离与疫苗生产（）组织培养在离体活细胞上培养病毒的方法3（）组织块培养取组织片（如一段胎儿气管或一小块鼻黏膜）进行培养4（）细胞培养病毒感染细胞后，大多数引起细胞病变，称为病毒的致细胞病变作用表现为5细胞变形，胞浆内出现颗粒化，核浓缩、核裂解等、观察病毒的常用方法是使用电子显微镜观察

235、病毒的血凝与血凝抑制实验属于凝集试验

236、无囊膜的病毒有口蹄疫病毒、圆环病毒、细小病毒等

237、可以引起怀孕猪流产的病原有猪繁殖与呼吸综合症病毒、圆环病毒、布氏杆菌等

238、口蹄疫病毒主要感染偶蹄兽

239、口蹄疫病毒的分型及其对温度抵抗力特点240口蹄疫病毒有个血清型，分别命名为、、、、、以及亚洲型各型70A CSAT1SAT2SAT31之间几乎没有交叉免疫力，同一型之间又有不同的亚型我国流行的主要有、、型口蹄0A C疫病毒在低温能长期保存，但易被热灭活、口蹄疫病毒可感染的动物种类多达种，但以偶蹄动物的易感性较高，从易感性的高低24133顺序排列为黄牛、耗牛、水牛、绵羊、山羊、骆驼和猪、鸡新城疫病毒接种鸡胚的部位是绒毛尿囊腔

242、鸡传染性法氏囊炎病毒、鸡传染性贫血病毒能导致感染鸡发生免疫抑制

243、具有凝集鸡红细胞特性的病毒有禽流感病毒、鸡新城疫病毒等

244、疯牛病（牛海绵状脑病）的病原是肮病毒，它本质上不是传统意义的病毒，它没有核酸,是245有传染性的蛋白质颗粒、机体内病毒感染的表现形式和结果由病毒、机体和环境条件三者的综合作用决定

246、病毒的血凝现象及其在诊断上的重要意义247许多的病毒表面有血凝素，能与鸡、豚鼠的红细胞表面受体结合，而出现红细胞凝集现象,简称病毒的血凝现象当加入与病毒相特异的抗体时，则抑制了病毒凝集红细胞的特性例如用于诊断鸡新城疫、禽流感、流行性乙型脑炎等、病毒鉴定的常用方法248中和试验、补体结合试验、病毒的红细胞凝集和红细胞凝集抑制试验、荧光抗体试验、免疫酶标记技术和免疫扩散试验、聚合酶链式反应（）和基因序列分析PCR、鸡新城疫病毒的分离鉴定步骤249（）病料的采集和处理可采集病鸡呼吸道分泌物、脾脏、血液、脑组织，按的比例加115入灭菌的生理盐水或缓冲液，用研磨器将组织研碎制成的悬液，反复冻融・次,20%23离心分钟，取上清液，用灭菌滤器过滤除菌或加抗生素杀灭病料中杂菌5000i7min20（）分离培养将处理好的病料经尿囊腔接种日龄无母源抗体的鸡胚，孵育，每天29-1137c照蛋次，弃除小时内死亡胚，收集・小时死亡胚，小时内未死亡胚取出224249696（）收集鸡胚尿囊液采用血凝试验检查是否有血凝活性，对有血凝活性分离物应用标准的抗新3城疫病毒，采用血凝抑制血清学试验对病毒进行鉴定确定为新城疫病毒后对病毒的致病性做进一步鉴定--致病性试验、在一定时间内能使特定动物发生半数死亡的最小微生物量或毒素量，称为半数致死250量（）LD50o、在一定时间内能使特定动物在感染后全部死亡的最小微生物或毒素量，称为最小致死量

251、在一定时间内能使特定动物发生半数感染的最小微生物量或毒素量，称为半数感染量

252、热空气灭菌法常用温度和维持时间是小时253160C,2-

3、干烤灭菌法常用温度和维持时间℃小时254160,2-

3、高压蒸汽灭菌采用的温度和时间是℃分钟255121,15-

20、湿热的穿透力比干热强，所以湿热的灭菌效果更好

256、消毒剂对动物机体细胞和微生物都有毒性

257、巴氏消毒法:258利用高温杀死物品中的病原菌或一般杂菌，同时又不致严重损害食品质量加温・℃加热6163或℃加热・然后迅速冷却到℃左右，可将其中的非芽胞病原菌杀死常30min,71-721530s10用于葡萄酒、啤酒及牛奶等食品的消毒、影响血清学试验的因素259（）电解质为了促使沉淀物或凝集物的形成，常用生理盐水或各种缓冲液（）作为抗原和1PBS抗体的稀释液或反应液但电解质的浓度不宜过高，否则会出现盐析现象（）温度在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体分子运动速度越快适宜的温度可增加2抗原、抗体活性及相互接触的机会，如凝集和沉淀反应通常在℃水浴感作37

（3）pH血清学试验要求在一定的pH下进行，常用的pH值为6〜8,过高或过低，均可使已结合的抗原抗体复合物重新解离若降至抗原或抗体的等电点时，会发生非特异性的酸凝集，pH造成假象（）振荡适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞，加速抗原抗体的结合反应，但强4烈的振荡可使抗原抗体复合物解离（）杂质和异物试验介质中如有与反应无关的杂质、异物（如蛋白质、类脂质、多糖等物质）5存在时，会抑制反应的进行或引起非特异性反应，故每批血清学试验都应设阳性对照和阴性对照试验、免疫血清学检测技术包括免疫非标记技术和免疫标记技术免疫非标记技术主要包括凝260聚性反应（凝集试验、沉淀试验）、补体结合试验、中和试验（病毒中和试验、毒素中和试验）；免疫标记技术包括标记荧光素、酶分子、金属颗粒、乳胶颗粒、放射性同位素等、凝集试验是细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，形成261肉眼可见的凝集团块的试验，分为直接凝集试验与间接凝集试验参与的抗体主要为、IgG igMo凝集试验可用于检测抗原或抗体，优点是操作简便、直接凝集试验与间接凝集试验的区别262（）直接凝集试验是颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集现象的试验按操作方法可分玻1片法和试管法两种（）间接凝集试验是将可溶性抗原（或抗体）吸附在不溶性颗粒载体的表面，与相应抗体（或抗2原）作用，在电解质存在条件下，出现的特异性的凝集反应间接凝集试验敏感性高，比直接凝集反应敏感倍2-8

二、动物传染病及流行病学调查基本知识、传染病是由病原微生物引起的，具有一定的潜伏期和临床症状并具有传染性的疾病

263、传染病流行过程的三个基本环节是传染源、传播途径和易感动物

264、动物传染病的主耍发展阶段为潜伏期、前驱期、明显期（发病期）和转归期

265、垂直传播是从亲代到其子代之间的纵向传播形式，传播途径包括胎盘传播、经卵传播266和产道传播如猪瘟、禽白血病、鸡白痢等、隐性感染是指动物已经感染病原但未有临床症状

267、外表健康，但经过病原学检测为阳性的动物，该动物是带毒动物

268、传染源是指在体内有病原体寄生、生长、繁殖，并能排出体外的动物

269、疫源地是传染源及其排出的病原体存在的地区

270、动物是指无特定病原体动物271SPF、病毒的持续感染是动物长期或终生带毒、但无明显临床症状的感染

272、在动物传染病的流行过程中，根据在一定时间内发病率的高低和传播范围的大小（即流行273强度），可分为四种表现形式（）散发性发病数目不多，在一个较长时间里只有个别的零星发生，称为散发1（）地方流行性在一定的地区或畜禽群中，发病动物的数量较多，但传播的范围不大，带有2局限性传播的特征（）流行性是指在一定时间内，一定畜禽群出现比寻常为多的病例，疾病发生频率较高的一3个相对名词（）大流行性发病数量大，流行的范围可达几个省甚至全国或几个国家、死亡率是指4274某病病死数占某种动物总头数的百分比、动物防疫工作的基本原则是预防为主，防重于治

275、动物检疫是对动物及其制品进行疫病检查通过动物检疫，对可疑或已证实的疫病对象276实行强制隔离，或作出适当处理，目的是防止动物传染病的传播，保障畜牧业生产和人民健康、终末消毒是指疫点最后一头（只）病畜（禽）痊愈或死亡后，在疫区解除封锁前，为消277灭疫区内可能残留的病原体所进行的全面彻底的大消毒、马属动物不会感染口蹄疫

278、结核杆菌病的特征是渐进性消瘦和多种组织器官形成特殊结节

279、猪支原体肺炎是由支原体科猪肺炎支原体引起的一种接触性、慢性、消耗性呼吸道传染280病，俗称猪喘气病、伪狂犬病其特征为发热、奇痒及脑脊髓炎但是成年猪常为隐性感染，可有流产、死胎281及呼吸系统症状、禽流感的潜伏期从数小时到数天，最长可达天

28221、口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄兽的一种急性、热性、高度接触性传染病，该病的临283诊特征是传播速度快、流行范围广，成年动物的口腔黏膜、蹄部和乳房等处皮肤发生水泡和溃烂，幼龄动物多因心肌炎使其死亡率升高、高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合症病毒变异株引起的猪的一种急性高致死性传284染病，仔猪发病率可达、死亡率可达以上，母猪流产率可达以上，育肥猪可发100%50%30%病死亡是其特征、新城疫是由新城疫病毒感染家禽引起的急性、高度接触性传染病，是我国规定的一类动285物疫病，本病春季多发、新城疫的典型病理变化286出血和坏死，尤其以消化道和呼吸道最为明显腺胃乳头和乳头间有出血点，或有溃疡和坏死，肌胃角质层下也常见有出血点，气管、直肠粘膜多见出血、新城疫的主要传染源是病鸡和带毒鸡

287、新城疫的自然感染途径主要经呼吸道和消化道，其次是眼结膜，也可经外伤及交配传染

288、鸡新城疫病的流行特点289一年四季均可发生，特别在春初、秋冬季节变换时易发流行时以鸡易感性最高，鸽子、鹤鹑、鹦鹉、火鸡、鹅、鸭、鸵鸟等都可感染发病其中鸽子和鹦鹉对本病的流行起着很关键的作用病死鸡是本病的主要传染源健康鸡接触病鸡及其排泄物、分泌物、污染的饲料、饮水、垫料等，通过呼吸道、眼结膜以及消化道感染发病、猪瘟临床剖检的特征性病理变化290体表有紫斑或出血点，淋巴结周边出血，呈大理石样变，脾脏出血性梗死，盲肠、回肠、结肠内形成纽扣状肿胀，肾脏表面有针尖状出血，严重时呈麻雀卵样变化，膀胱粘膜有针尖状出血、炭疽的特征病变291天然孔出血，血液凝固不良，败血症变化，脾脏显著肿大和皮下、浆膜下结缔组织出血性胶样浸润、禽流感的传播途径包括292病禽和健康禽直接接触传播、病毒污染物和健康禽间接接触传播两种家禽主要通过呼吸道和消化道感染禽流感病毒存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和禽体脏器组织中因此病毒可随眼、鼻、口腔分泌物及粪便排出体外，含禽病毒的分泌物、粪便、死禽尸体污染的任何物体都能成为间接接触传播的媒介，如饲料、饮水、鸡舍、空气、笼具、饲养管理用具、运输车辆、昆虫以及各种携带病毒的鸟类等均可机械性传播、高致病性禽流感的流行特点293高致病性禽流感病毒与普通流感病毒相似，一年四季均可流行，但在冬季和春季容易流行,因此禽流感病毒在低温条件下抵抗力较强各品种和不同日龄的禽类均可感染高致病性禽流感，发病急、传播快，其致死率可达100%、牛结核病的流行特点294本病奶牛最易感，其次为水牛、黄牛、耗牛人也可被感染结核病病牛是本病的主要传染源牛型结核分枝杆菌随鼻汁、痰液、粪便和乳汁等排出体外，健康牛可通过被污染的空气、饲料、饮水等经呼吸道、消化道等途径感染、牛结核病以肺结核、乳房结核和肠结核最为常见

295、马传染性贫血病的特征性临床症状296临床反复发作，呈现发热并伴有贫血、出血、黄疸、心衰、浮肿和消瘦等症状、能引起母猪流产、死胎的主要疫病297猪瘟、猪繁殖与呼吸综合症、细小病毒病、猪伪狂犬病、日本乙型脑炎、布鲁氏菌病、猪弓形虫病等、能引起猪呼吸道疾病的主要病原体298（）猪肺炎支原体（引起猪喘气病）；1（）胸膜肺炎放线杆菌（引起猪胸膜肺炎）；2（）多杀性巴氏杆菌（引起猪肺疫）；3（）败血波氏杆菌（引起猪传染性萎缩性鼻炎）；4（）副猪嗜血杆菌（引起猪肺炎、胸膜炎）；5（）链球菌（引起育肥猪咳嗽、肺炎）；6（）猪繁殖与呼吸综合症病毒（引起猪繁殖与呼吸综合症）；7（）猪圆环病毒（引起断奶仔猪多系统衰竭综合症、皮炎与肾病综合征、呼吸道疾病等）;8（）猪流行性感冒病毒（引起猪上呼吸道炎症）；9（）伪狂犬病病毒（引起育肥猪呼吸道症状）

10、能引起鸡产蛋下降的主要疫病299减蛋综合征、鸡传染性支气管炎、产蛋鸡非典型新城疫、鸡肿头综合征、禽流感、禽脑脊髓炎、禽痘、败血霉形体、传染性鼻炎和禽霍乱等、能引起奶牛流产的主要疫病300布鲁氏菌病、钩端螺旋体病、弧菌病、病毒性腹泻、传染性气管炎、霉菌性流产、衣原体病、李氏杆菌病、流行性热、滴虫病、肉抱子虫病、新泡子虫病等、马立克氏病在临床上分为神经型、内脏型、眼型、皮肤型

301、猪口蹄疫的主要临床症状302潜伏期天左右病初体温升高到℃℃精神和食欲不振、流涎，唇内面、齿龈、舌2~841~42,面、蹄部、乳房发生大小不等的米黄色水泡，局部红肿、疼痛、破溃后出血，蹄壳脱落，水疱破裂后形成红色糜烂、猪口蹄疫的主要病理变化303（）在口腔、蹄部有水疱和烂斑；1（）心脏病变、心包膜有弥漫性及点状出血，心肌切面有灰白或淡黄色斑点或条纹（虎斑心）

2、口蹄疫的流行病学特点（从传染病的三个基本环节论述）304（）易感动物主要是偶蹄动物，包括牛科动物（牛、瘤牛、水牛、耗牛）、绵羊、山羊、猪及1所有野生的反刍和猪科动物，驼科动物（骆驼、单峰骆驼、美洲驼、美洲骆马）亦可感染但易感性较低（）传染源主要为潜伏期感染及临床发病动物感染动物呼出物、唾液、粪便、尿液、乳、精2液及肉和副产品均可带毒康复期动物可带毒（）可通过呼吸道、消化道、生殖道和伤口感染病毒，通常以直接或间接接触（飞沫等）方式3传播，或通过人或犬、蝇、蟀、鸟等动物媒介，或经车辆、器具等被污染物传播如果环境气候适宜，病毒可随风远距离传播、猪繁殖与呼吸综合症（又称猪蓝耳病）是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起的，以母猪繁305殖障碍、早产、流产、死胎、木乃伊胎及仔猪呼吸综合征的高度接触性传染病按临床表现不同，猪蓝耳病分为经典猪蓝耳病和高致病性蓝耳病、高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合症病毒变异株引起的一种急性高致病性传染病306以高度接触性传播、全身出血、肺部实变和母猪繁殖障碍为特征，仔猪、育肥猪和成年猪均可发病和死亡，其中仔猪发病率可达、死亡率可达以上，母猪流产率可达以上，100%50%30%育肥猪也可发病死亡是其特征、小猪伪狂犬病的临床诊断特点是发热、运动失调、呕吐、腹泻、痉挛死亡

307、猪痢疾是猪的一种肠道传染病，其病变特点是大肠粘膜发生卡他性出血性炎症或纤维素308性坏死性炎症、猪瘟持续性感染表现为妊娠母猪感染猪瘟病毒后不表现症状，但病毒能通过胎盘传染于309胎儿，引起死胎、流产、早产或产出体弱仔猪、鸡传染性支气管炎病原的特点是血清型众多，型与型之间的交叉保护力低

310、鸡传染性喉气管炎的特征病变是喉头和气管粘膜充血、出血，干酪样伪膜将气管堵塞、311312引起仔猪黄痢的病原是产肠毒素大肠杆菌；而引起仔猪水肿病的病原是产志贺样毒素大肠杆菌、猪肺疫急性型的病理变化是全身性出血和纤维素性肺炎

313、乙型脑炎的流行病学特点是蚊虫传播、有季节性

314、初产母猪感染猪细小病毒后，主要临床症状是繁殖障碍（流产、死胎、木乃伊、病弱仔315猪）、当发生猪传染性胃肠炎时，死亡率最高的是日龄以内仔猪

31610、鸭瘟的特征性临床症状是头颈部肿大、两脚麻痹

317、犬细小病毒感染的临床表现有肠炎型利心肌炎型

318、貂病毒性肠炎的特征性病变是小肠急性、卡他性纤维素性或出血性炎症

319、猪蛔虫最主要的致病作用是夺取宿主营养

320、贝氏莫尼茨绦虫虫卵的鉴别特征是近似四角形，卵内有梨形器，内含六钩坳

321、莫尼茨绦虫可感染羔羊

322、预防伊氏锥虫病最实用的措施为消灭媒介昆虫（虻及吸血蝇类）

323、伊氏锥虫病最可靠的诊断依据是粪便中检出虫体，治疗伊氏锥虫病的药物是甲硝唾

324、口蹄疫诊断举例325（）疑似口蹄疫病例，以下病原学检测方法任何一项阳性，可判定为确诊口蹄疫病例间接夹1心酶联免疫吸附试验，检测阳性（标准方法）；试验，检测阳性（采用国ELISA OIERT-PCR家确认的方法）；反向间接血凝试验（）检测阳性；病毒分离，鉴定阳性（）疑似口蹄疫RHA,2病例，在不能获得病原学检测样本的情况下，未免疫家畜血清抗体检测阳性或免疫家畜非结构蛋白抗体检测阳性，可判定为确诊口蹄疫病例

①中和试验，抗体阳性；

②液相阻断酶ELISA联免疫吸附试验，抗体阳性；

③非结构蛋白检测感染抗体阳性；

④正向间接血凝试验ELISA（）抗体阳性IHA,、某农村养猪户送来月龄左右病猪两只，外观可见腹部皮肤有紫斑，四肢末端皮肤有黑3263色结痂具主述该猪病程有左右，消瘦，体温左右，食欲时好时坏，便秘和腹泻20cl

40.0C交替发生，耳、腹部、背部等处皮肤有出血斑块，经抗生素治疗效果不明显，该病可能是猪瘟死亡后剖解可能出现回盲瓣出现纽扣状溃疡，病料应采集脾脏，快速诊断需进行诊断，RT-PCR预防常用猪瘟兔化弱毒脾淋苗，正常免疫接种的剂量是头份，免疫程序是、日龄各一22060次、某猪场日龄仔猪发病，主要表现精神沉郁，食欲废绝，排黄色水样稀粪，内含凝乳块，3273随后仔猪脱水昏迷死亡剖检可见小肠黏膜充血、出血，胃内有凝乳块，肠系膜淋巴结充血水肿可能的疾病是仔猪黄痢，用于检测的最佳病料是小肠前段内容物，细菌分离首选的培养基是麦康凯琼脂培养基、奶牛，分娩正常，产后当天出现不安、口牟叫、兴奋，不久出现四肢肌肉震颤、站立不稳、328精神沉郁、感觉丧失，体温℃最可能发生的疾病是生产瘫痪，发病的主要原因是低血钙，37o最适宜的治疗原则是补充钙剂

329、某猪群，部分3〜4月龄育肥猪出现消瘦，顽固性腹泻，用抗生素治疗效果不佳，剖检死亡猪在结肠壁上见到大量结节，肠腔内检获长为8〜11mm的线状虫体可能发生的寄生虫病是食道口线虫病，治疗该病可选用的药物是左旋咪哇、某猪场的一批月龄育肥猪，体温和食欲正常，但生长缓慢，个体大小不一，经常出现3305咳嗽、气喘等症状剖检见肺部尖叶、心叶、膈叶前缘呈双侧对称性肉变，其他器官未见异常该病最可能的病原是肺炎支原体，诊断隐性感染猪的快速方法是线检查预防该病不宜采用X的措施是饲料中添加氨苇西林、猪，日龄发病，表现结膜潮红、呼吸增快，体温食欲不振、喜饮，起卧不安，3313039C,频频作排粪动作，粪便干硬带有少量血丝该病可能是肠便秘；治疗该病的药物是硫酸镁；预防该病的有效措施是充分饮水、炎热季节，某规模化猪场母猪发热，流产，产死胎，发病率为公猪一侧睾丸肿大，33210%;具有传染性可能的疾病是猪乙型脑炎、某猪场，全群猪发病，母猪和育肥猪不能站立，在鼻盘部出现大小不一的水疱，初生仔333猪发生死亡，应怀疑口蹄疫最适于病原分离的样品是水疱液、某规模化猪场中头日龄以上猪，部分猪突然发生咳嗽，呼吸困难，体温达3341009041C以上，急性死亡，死亡率为死前口鼻流出带有血色的液体，剖检见肺与胸壁粘连,肺充15%血、出血、坏死，用巧克力琼脂培养基从患猪病料中分离出了病原菌，最可能的疾病是猪传染性胸膜肺炎、某猪场，部分月龄育肥猪突然发病，呼吸急迫，体温；腹下及四肢皮肤呈紫红色，335441°C有出血点频死前口鼻中流出暗红色血液血液涂片染色镜检，可见大量革兰氏阳性菌该病可初步诊断为猪传染性萎缩性鼻炎、某猪场岁种公猪，精神沉郁，步态强拘，拱背，腰部触诊敏感，常做排尿姿势尿检3362可见红细胞、白细胞、盐类结晶、肾上皮细胞，该病可能的诊断是输尿管结石、一头奶牛偷食了大量玉米，随后食欲废绝，反刍停止，精神沉郁，鼻镜干燥，喜饮水,临337床检查时重点诊断的部位是瘤胃、一头奶牛下颌及腹下轻度水肿，排尿减少，弓腰，肾区触诊敏感，尿液检查未见有红细338胞，如进一步检查血液，应重点检测血液中尿素、奶牛食入大量刚收割的青绿饲料，突然出现流涎，腹泻，腹痛，肌肉震颤，瞳孔缩小,据339此症状，最有可能发生的疾病是有机磷中毒.

340、某鸡场，1〜3日龄雏鸡死亡率3%,病死鸡剖检，见肺、肾、肝、心潮红湿润，部分病死雏脐带处可见绿豆大、黄白色包囊状物，卵黄囊呈黄绿色，吸收稍差，此病可能是大肠杆菌感染、夏季，某养鸡场雏鸡下痢，呼吸困难，口流鲜血，鸡冠和肉垂苍白;剖检见有全身性出血，341内脏器官肿大，胸肌、腿肌和心包等处有针尖至粟粒大小的白色结节该病可能是住白细胞虫病、某鸡群发病，以进行性肌麻痹和头颈后仰呈“观星姿势”等临床症状为特征该群鸡的病342因可能是缺乏维生素B

1、某只散养鸡，精神萎顿，食欲减退，便秘或下痢，有时见血便用左旋咪嗖驱虫后，343500在粪便内见圆形长条虫体该鸡群可能感染了鸡蛔虫、动物流行病学调查的概念、任务344（）概念流行病学调查是通过询问、信访、问卷填写、现场查看、测量和检测等多种手段，1全面系统地收集与疾病事件有关的各种资料和数据，并进行综合分析，得出合乎逻辑的病因结论或病因假设的线索，提出病病防控策略和措施建议的行为（）任务

①对报告的疾病事件进行最初的核实；

②确定传染来源、传播途径和暴露因素,查2明病源传播扩散和流行情况，以便采取有效措施防止疫情扩散；

③在一定时间内，调查动物群体中的疾病事件和疾病现象，描述动物群体的患病状况、疾病三间分布和动态过程，提供有关致病因子、环境和宿主因素的病因线索，为进一步研究病因因素、制定防控对策提供依据；

④评估疾病防控实施效果、流行病学调查的分类根据不同标准，流行病学调查可以分成不同类别根据调查实施345范围的不同，流行病学调查分为抽样调查和疫病普查按调查研究时间顺序，可分为纵向调查、横断面调查，其中纵向调查又分为回顾性调查和前瞻性调查按工作性质的不同，分为个案调查（病例调查）、暴发调查、专题调查、常规流行病学调查、流行病学调查依据不同调查目的和任务，设置种调查方式紧急流行病学调查、定点3463流行病学调查、专项流行病学调查、流调方案的基本内容一份完善的流行病学调查方案，应该包括调查研究目的、调查范347围、调查内容、所需要数据、调查对象和方法等主要内容此外，还涉及质量控制方法、数据录入及统计处理方法、组织分工、调查要求，以及注意事项、时间与进度安排、经费预算等内容、流调方案的设计348设计原则

①可行性原则——流行病学调查在设计阶段就应充分考虑调查的可行性，包括1研究人员组成、必要的仪器设备、经费支持等方面对实施过程中可能遇到的困难，要有充分的考虑

②科学性原则——设计流行病学调查时，在充分考虑流行病学调查研究可行的条件下，尽可能通过设计完善、合理的调查方案，最大限度地优化调查指标

③可靠性原则——在保证调查可行性的前提下，尽可能减少两类误差,提高调查结果的准确性和精确性设计步骤明确调查目的和类型；确定调查内容和所需要的数据；确定调查对象、范围；2确定研究资料收集的方法；明确分析方法；调查研究中的偏倚与质量控制、流调问卷349问卷设计原则内容合理适当；用词简洁明确；问句清晰明确；调查指标客观定量；问题1层次条理清晰；答案设计严密工整问卷设计步骤明确调查目的；明确调查内容；列出所需要的数据；问卷设计2问卷结构一份完整的调查问卷，一般由标题、编码编号、调查对象概况、主题内容、2调查人员签章等内容组成、流行病学调查报告撰写格式350标题指明调查的时间、地点及主要内容一般情况下，时间可省略，标题应简练准确基1本格式为“关于地事件的调查报告”x x xx前言用来说明调查的目的、任务来源、调查地点和时间、参加人员、调查方法、调查工作2基本经过、调查处理基本结论等正文是调查报告主体，包括三大内容——事件的背景；基本结论；建议3附件包括诊断结果、监测结果等4落款包括著名和日期5兽医实验室人员常用技术知识点三阳光畜牧网-河北省畜牧兽医局浏览次2013-03-1214:44:12126

三、实验室仪器设备操作和维护、仪器使用必须严格按操作规程操作

351、可以用高压蒸汽灭菌器进行消毒的有医疗器械、敷料、玻璃器皿、液体培养基等

352、使用台式鼓风干燥箱时，所有干烤的实验器材须沥干水以后才能放入

353、恒温水浴锅内用水为纯水

354、超声波清洗器使用时只能将清洗物品放在清洗网中进行清洗

355、高速台式冷冻离心机使用时要预降温

356、天平使用时应注意调准水平、不得轻易挪动位置

357、长度为的片段电泳时最适合的琼脂糖的浓度为358750bp DNA1%、显微镜的目镜倍数为倍

35910、油镜使用完毕后，应用擦镜纸蘸一点二甲苯，拭去镜头上的香柏油

360、离心机自行停转后，方可将离心机盖揭开取出离心管

361、高压灭菌后，断去电源待压力降为零后方可打开高压灭菌器

362、使用高压灭菌器前须检查水位

363、使用酶标仪时要注意按照试剂盒说明要求更换滤光片（选择波长）

364、选择移液器时最好选择使用移液量与量程范围接近的移液器

365、使用自动灭菌高压器时也需人员看管

366、使用电子分析天平时，称量不得超过天平的最大量程

367、电子分析天平内应放置干燥剂，常用变色硅胶，应定期更换

368、使用台式鼓风干燥箱时要开启加热开关，同时鼓风开关也必须开启

369、使用吸管时，防止产生气溶胶方法370（）不要使用吸管混匀微生物悬液必须使用时，应尽量将吸管的管口置于液面下进行吹吸，1尽可能不产生或少产生气泡（）吸管中液体应依靠重力沿容器壁流下，不得垂直滴入容器和用力吹出，以免产生气溶胶2（）在使用吸管移液时，工作台面上应铺一层浸有消毒液的毛巾，以防吸管中的微生物悬液滴3落到工作台面产生气溶胶、微量血凝板洁净与否，对试验结果有很大的影响，应使用超声波清洗器按说明清洗若371不使用超声波清洗器，按下列清洗程序试验完毕后立即将血凝板用自来水反复冲净，再用洗涤剂的温水溶液浸泡分钟，并在洗涤剂溶液中以棉拭刷凹孔及板面，然后再用自来水反复30冲净每个凹孔及板面，待反应板干燥后，放到的盐酸中浸泡小时以上，捞出用自来2%-3%24水冲洗多次，最后以蒸储水冲洗次，在℃温箱中烘干备用2-

337、显微镜使用的注意事项372（）持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其

1、我国三类动物疫病主要有种:871多种动物共患病（种）大肠杆菌病、李氏杆菌病、类鼻疽、放线菌病、肝片吸虫病、丝8虫病、附红细胞体病、热Q牛病（种）牛流行热、牛病毒性腹泻/粘膜病、牛生殖器弯曲杆菌病、毛滴虫病、牛皮5蝇蛆病绵羊和山羊病（种）肺腺瘤病、传染性脓疱、羊肠毒血症、干酪性淋巴结炎、绵羊疥癣,6绵羊地方性流产马病（种）马流行性感冒、马腺疫、马鼻腔肺炎、溃疡性淋巴管炎、马媾疫5猪病（种）猪传染性胃肠炎、猪流行性感冒、猪副伤寒、猪密螺旋体痢疾4禽病（种）鸡病毒性关节炎、禽传染性脑脊髓炎、传染性鼻炎、禽结核病4蚕、蜂病（种）蚕型多角体病、蚕白僵病、蜂螭病、瓦螭病、亮热厉螭病、蜜蜂胞子虫病、7白垩病犬猫等动物病（种）水貂阿留申病、水貂病毒性肠炎、犬瘟热、犬细小病毒病、犬传染性肝7炎、猫泛白细胞减少症、利什曼病鱼类病（种）蒯类肠败血症、迟缓爱德华氏菌病、小瓜虫病、黏抱子虫病、三代虫病、指环7虫病、链球菌病甲壳类病（种）河蟹颤抖病、斑节对虾杆状病毒病2贝类病（种）鲍脓疱病、鲍立克次体病、鲍病毒性死亡病、包纳米虫病、折光马尔太虫病、6奥尔森派琴虫病两栖与爬行类病（种）鳖腮腺炎病、蛙脑膜炎2败血金黄杆菌病（种）大肠杆菌病、李氏杆菌病、类鼻疽、放线菌病、肝片吸虫病、丝虫病、8附红细胞体病、热等Q、农业部发布的人畜共患病名录的病种有种926牛海绵状脑病、高致病性禽流感、狂犬病、炭疽、布鲁氏菌病、弓形虫病、棘球蝴病、钩端螺旋体病、沙门氏菌病、牛结核病、日本血吸虫病、猪乙型脑炎、猪型链球菌病、旋毛虫病、H猪囊尾螃病、马鼻疽、野兔热、大肠杆菌病（）、李氏杆菌病、类鼻疽、放线菌病、0157:H7肝片吸虫病、丝虫病、热、禽结核病、利什曼病Q、我国尚未发现的动物疫病是指在其他国家和地区已经发现、在我国尚未发现发生过的动物10疫病如疯牛病、非洲猪瘟、非洲马瘟等、我国已消灭的动物疫病是指在我国曾发生过、但已扑灭净化的动物疫病，如牛瘟、牛肺疫

11、动物疫情由县级以上人民政府兽医主管部门认定；其中重大动物疫情由省、自治区、直辖12市人民政府兽医主管部门认定，必要时报国务院兽医主管部门认定、重大动物疫情应急工作按照属地管理的原则，实行政府统一领导、部门分工负责，逐级建13立责任制、重大动物疫病应当由动物防疫监督机构采集病料，未经国务院兽医主管部门或者省、自治14区、直辖市人民政府兽医主管部门批准，其他单位和个人不得擅自采集病料它地方（）轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地2（）保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部3分用布擦拭（）水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净4（）放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜5（）要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视野，右眼用以绘图6（）不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏7（）使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是取下标本片，转动旋转器使镜头离开8通光孔，下降镜台，平放反光镜，下降集光器（但不要接触反光镜）、关闭光圈，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内最后填写使用登记表（注反光镜通常应垂直放，但有时因集光器没提至应有高度，镜台下降时会碰坏光圈，所以这里改为平放）、使用高压蒸373汽灭菌器注意事项（）待灭菌的物品放置不宜过紧1（）必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果（非自动灭菌器）2（）灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆3裂须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖（）装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内4（）为了确保灭菌效果，应定期检查灭菌效果，常用的方法是将硫磺粉末（熔点为℃）或安5115息香酸（熔点为℃）置于试管内，然后进行灭菌试验如上述物质熔化，则说明高压蒸气120灭菌器内的温度已达要求，灭菌的效果是可靠的也可将检测灭菌器效果的胶纸（其上有温度敏感指示剂）贴于待灭菌的物品外包装上，如胶纸上指示剂变色，亦说明灭菌效果是可靠的、决定化学消毒剂效果的因素374（）消毒剂的浓度和作用时间消毒剂浓度越大，作用的时间越长，杀菌效果就越好但应注1意例外，酒精在时杀菌的效果最强，而其浓度过高，会使菌体表面的蛋白迅速凝固，7075%使酒精无法渗入菌体内部发挥作用（）温度和酸碱度通常温度升高，消毒剂的杀菌作用也增强消毒剂的杀菌作用也与酸碱度2有关不同消毒剂有不同的最适酸碱度，如酚类消毒剂在酸性环境中的效果比较好另外，细菌在适宜的酸碱度抵抗力较强，如果偏离其最适的酸碱度，细菌就很容易被杀死（）细菌的种类和数量不同种类的细菌对消毒剂的敏感性不同，细菌的数量越大，所需的消3毒剂浓度就越高，作用时间就越长所以应根据细菌的种类和数量来选择消毒剂的种类和浓度（）环境中的有机物和其他拮抗物的影响不同的化学消毒剂有其各自的拮抗物质细菌也经4常与血液、痰液和脓液等有机物混合在一起这些混杂物可和消毒剂结合，从而影响化学消毒剂的杀菌作用、生物安全柜的使用和维护应注意375（）严格按照操作规程开启、使用和关闭；1（）清洁与消毒化学消毒剂（酒精、、过氧乙酸、含氯消毒剂等）、紫外线消毒等；275%02（）定期检测验证气流速度、负压/换气次数、紫外线照度等；3（）过滤器的监测与更换定期对过滤器进行监测，当过滤器的阻力增大导致蝶阀开至4HEPA度，需要更换高效过滤器；90（）生物安全柜的检测、过滤器的更换等维修工作应由具有资质的专业人员负责；在使用过程5中出现故障应及时报告，经维修并检验合格后方可使用、使用移液器时主要注意事项376（）应根据试验需要选择所需量程范围内的移液器，移液量不能超出该移液器标定的移液范围1（）安装吸头时用力不能过猛，不能反复撞击吸头来上紧应轻轻用力下压，稍作旋转即可2（）吸头浸入液面角度应控制在倾斜度之内，保持竖直为佳吸头浸入液体深度要合适，320不宜过深，吸液过程中浸入深度尽量保持不变（）吸有液体的移液器不应平放4（）移液器使用完毕后不可直接搁置，务必将刻度调至量程范围内的最大值，并垂直置于加样5器架上（）移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体

6、洗板机在使用后应用去离子水或纯净水清洗管路，防止阻塞和腐蚀

377、电子天平的使用维护应注意378（）调节水平、防止振动1（）称量时应从侧门取放物质，读数前应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动前门仅在检修2或清除残留物质时使用称量结束应及时除去称量瓶（纸），作好清洁工作，然后关上侧门，切断电源，并做好使用情况登记（）天平应保持清洁，谨防灰尘等物钻入，每次称量完毕，应及时清洁天平不应该放在有腐3蚀性气体和空气流动大的环境中（）根据天平的使用程度，应作周期性的检查校准4（）在搬动天平、安装和拆卸外围设备前，一定要关掉显示开关，拨掉电源插头，以免损坏天5平（）经常使用天平时，应使天平连续通电以减少预热时间，使天平处于相对稳定状态如果天6平长期不用，应关闭电源（）称量易挥发和具有腐蚀性的物品时，要盛放在密闭的容器内，以免腐蚀和损坏电子天平7操作天平不可过载使用，以免损坏天平8放入天平的物体温度不宜太高以免损坏仪器，一般温度行℃

90、在生物安全柜内进行实验操作应遵循以下原则379缓慢移动原则为了避免影响正常的风路状态，柜内操作时手应该尽量平缓移动1物品平行摆放原则为了避免物品和物品之间的交叉污染现象产生，在柜内摆放的物品应2该尽量呈横向一字摆开，避免回风过程中造成交叉污染同时避免堵塞背部回风隔栅影响正常风路避免震动原则柜内尽量避免震动仪器例如离心机、旋涡振荡器等的使用，因为震动会3使得积留在滤膜上的颗粒物质抖落，导致操作室内部洁净度降低，同时如果在前操作面平衡失败还会引起安全柜对操作者的污染不同样品柜内移动原则柜内两种及以上物品需要移动时，一定遵循低污染性物品向高污4染性物品移动原则，避免污染性高的物品在移动过程中产生对柜体内部的大面积污染实验室明火使用原则柜内尽量不要使用明火因为在明火使用过程中产生的细小颗粒杂5质将被带入滤膜区域，这些高温杂质会损伤滤膜无法避免一定需要使用的时候，宜使用低火苗的本生灯、普通离心机的操作规程380接通电源；1配平样品将样品放入离心管内，置于天平上配平；2将样品对称放入离心机内；3调解时间按钮至所需时间；4调解转速按钮至所需转速；5按“工作”按钮开始离心；6离心结束后取出样品，关闭电源7

四、采样及样品制备技术、实验室检测时，经常采集的样品种类381血液样品全血、血清；拭子样品眼、呼吸道、咽、肛拭子；分泌物样品子宫、阴道分泌物或外生殖器包皮内分泌物；组织样品淋巴结、肝脏、脾脏、肺脏等脏器样品；体表样品皮、毛；乳汁样品；胚胎样品；粪便样品；脑、脊髓样品；尿液样品、进行动物的免疫效果监测时、应在动物接种疫苗后且产生的抗体达到高峰时进行采样一382般在接种后天如接种禽流感灭活疫苗后，在家禽免疫后天,随机采集家禽血清样20-3021品进行监测、动物疫病监测应根据所要监测的动物群体的大小、监测目的的不同和监测能力情况等因383素确定监测样本采样比例和数量，首先要确定监测点的数量或监测范围，再确定每个监测点或监测范围内的抽样比例和数量，抽样应按有关办法随机抽取，抽样比例还要根据动物群体的大小进行调整，群体越大抽样比例应该越低，同时每批次监测数量要符合生物统计学规定的最小样本数量、样品采集原则384一是以畜群为基本单位按样品随机采样原则，同时兼顾样品的平衡性和代表性二是样本大小的确定，它取决于所监测疫病的流行程度及样本的可信限在流行病学工作中，是标准可95%信限在大于的畜群中，可采用下述公式确定样本的大小式中1000n=log1-t/log1-d/N,N为总牲畜数，为样本数，为估计发病的牲畜百分比，为可信限n td、进行免疫抗体监测时，禽类每个监测点至少采集份血清样本，家畜至少采集份血3853020清样本，动物群体较大时要按比例增加采样数量，家禽一般按采样，家畜按

0.1%-

0.5%5%15%采样、进行病原学监测时，要根据动物群体大小、推测的动物疫病感染率等因素确定采样数量，386每个监测点至少采集份样本

20、在一个感染群体中检测到一个或更多的阳性有的可信度时的样品数量应根据疫病流38795%行百分率（发病动物头数与全群动物数的百分比）来确定，流行率越高采样数量越少、监测采样过程中，抽样方式主要有388（）随机抽样使研究对象的每个个体有同等机会被抽作样本的抽样方法1（）顺序抽样在有限总体中，将所有个体一一编号，每隔一定数目，均匀抽取一个个体2（）分等按比例抽样又叫分层按比例抽样法就是把总体分成若干等次，了解每一等次约占3总体的比例是多少，对每个等次按比例抽样这种抽样方法能更有效降低抽样误差，而获得更有代表性的数据（）群组抽样又叫整群抽样把总体分成若干群组，作为抽样单元，进行随机抽样，把所抽4到的群组作全面调查，然后集中起来估计总体的参数、猪活体采样类型389主要有扁桃体采样和鼻腔拭子、咽拭子采样扁桃体采集方法从活体采取扁桃体样品时，应使用专用扁桃体采集器，先用开口器，可以看到突起的扁桃体，把采样钩放在扁桃体上，快速扣动扳机取出扁桃体放离心管中，冷藏送检鼻拭子、咽拭子采集方法用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉的分泌物，蘸取分泌物后，立即将拭子浸入保存液中，密封低温保存、牛海绵状脑病病原检测时采取脑组织样品

390、液态样品包装时，样品量不可超过容量的39180%、采用比较抗体效价变化方法进行血清学诊断时，通常采集双份血清检测，第一份血清采392于病的初期，采集第二份血清应间隔・周

23、采集死亡动物的内脏病料样品时，最迟不超过动物死后小时

3936、采集组织病料样品供做病理切片时，应将典型病变部分及相连的健康组织一并采集

394、用组织脏器样品材料制作抹片时，先用镜子夹持局部，然后以灭菌或洁净剪刀取一小块，395夹出后将其新鲜切面在玻片上压印或涂成一薄片、用于病毒分离的样品材料，最好在冷藏的条件下（装有冰块或干冰的冷藏瓶），立刻送396到实验室、急性死亡的家畜解剖、采样之前，必须用显微镜检查其血液涂片中是否有炭疽杆菌存在

397、采集乳汁样品时，不能采集最初所挤的股奶3983—

4、怀疑发生口蹄疫时，水疱液样品必须采自未破的水疱，不加任何保存液

399、若检查消化系统寄生虫，需采集・新鲜粪便样品400510g、做组织学检查的样品不能冷冻

401、脏器样品抹片作姬姆萨染色，可用甲醇固定

402、检测狂犬病病原时应采集唾液和脑样品

403、实质脏器样品在短时间不能送到实验室的，如为供细菌检查的，应放于灭菌流动石蜡或404灭菌的甘油生理盐水中冷藏保存30%、进行血清学检验的乳汁不可以冻结、加热或强烈震动

405、用于寄生虫检验的粪便样品以冷臧不冻结状态保存

406、采集血清用于实验室检测，对于血清质量的要求血清未腐败（新鲜）、无溶血、清亮407透明（无明显沉淀物）、未凝固或未完全凝固、体积足够检测与样品备份等、常用血液抗凝剂有柠檬酸钠、肝素、乙二胺四乙酸

408、活体牛、羊液（咽食道分泌物）的采集技术要求409O-P被检动物在采样前禁食（可饮少量水）小时；采样探杯在使用前经装有柠檬酸或

120.2%12%氢氧化钠溶液的塑料桶中浸泡分钟，再用与动物体温一致的清水冲洗探杯后使用，每采完一5头动物，探杯要重复进行消毒并充分清洗采样时动物应站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部厘米处，轻轻来回抽动次，然后将探杯拉出如采集的・液被胃内容物严10-152-30P重污染，要用生理盐水或自来水冲洗口腔后重新采样取出毫升液，倒入含有等量细8-10O-P胞培养液或磷酸缓冲液的灭菌广□瓶中，充分摇匀加盖封口，放冷藏箱及时送检，未能及时送检应置于℃-

30、采样注意事项410（）凡是血液凝固不良，鼻孔流血的病死动物，应耳尖采血涂片，首先排除炭疽，炭疽病死的1动物严禁剖检（）采样时应从胸腔到腹腔，先采实质器官做到无菌，避免外源性的污染，最后采集污染的组2织，如胃肠组织、粪便等（）采取的病料必须有代表性，采取的组织器官应病变部位明显采取病料时应根据不同的疫3病或检验目的，采其相应血样、活体组织、脏器、肠内容物、分泌物、排泄物或其他材料病因不明时，应系统采集病料（）病料应在使用治疗药物前采取，用药后会影响病料中微生物的检出死亡动物的内脏病料4采取，最迟不超过死后（尤其在夏季），否则，尸体腐败，难以采到合格的病料6h（）血液样品在采集前一般禁食采集血样时，应根据采样对象、检验目的及所需血量确定58h,采血方法与采血部位（）采样时还应考虑动物福利，并做好个人防护，预防人畜共患病感染（）防止污染环境，67防止疫病传播，做好环境消毒和废弃物的处理、采样前应当准备的用品、材料和试剂411（）器械采样箱、保温箱或保温瓶、解剖刀、剪刀、镶子、酒精灯、酒精棉、碘酒棉、注射1器及针头等；样品容器包括小瓶、玻片、平皿、离心管及易封口样品袋、塑料包装袋等;试管架、铝盒、瓶塞、无菌棉拭子、胶布、封口膜、封条、冰袋等（）采样记录用品不干胶标签、签字笔、记号笔、采样单、采样登记表等2（）样品保存液阿氏液、甘油盐水缓冲液、肉汤、液、双抗、抗凝剂等330%PBS（）防护用品一次性手套、乳胶手套、防护服、防护帽、胶鞋等

4、畜禽肠管的采集412用线将病变明显处（约・厘米）的两端双结扎，从两端剪断，置于灭菌容器中，冷藏送检

510、畜禽肠内容物样品的采集413选择肠道病变明显部位，取内容物，用灭菌的生理盐水轻轻冲洗；也可烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取肠内容物，放入盛有灭菌的甘油盐水中30%、采集全血时注意事项414血样品必须是脱纤血或是抗凝血抗凝剂可选肝素或枸檬酸钠对病毒有微毒性，一般不EDTA,宜采用以冷藏状态立即送实验室必要时，可在血中按每毫升加入青霉素和链霉素各5001000以抑制血源性或采血中污染的细菌IU,、牛、马、羊、猪、家禽的采血部位415马、牛、羊从颈静脉、尾静脉、乳房静脉采血；猪从前腔静脉、股静脉、梯头静脉、隐静脉采血，用量少时也可以从耳静脉抽取；家禽从翅膀静脉或心脏用注射器抽取血液、在进行口蹄疫诊断时，应采集的组织样品416用于病毒分离、鉴定的样品以发病动物（牛、羊或猪）未破裂的舌面或蹄部、鼻镜、乳头等部位的水泡皮和水泡液最好对临床健康但怀疑带毒的动物可在屠宰后采集组织样品如淋巴结、脊髓、肌肉等作为检测材料、高致病性禽流感进行病原学检测时，可采集的样品417禽病料应包括喉气管拭子和泄殖腔拭子，最好是采集喉气管拭子小珍禽用拭子取样易造成损伤，可采集新鲜粪便死禽采集气管、脾、肺、肝、肾和脑等组织样品、蓝耳病进行检测时，可采集的样品418RT-PCR肺、扁桃体、淋巴结和脾等组织样品；新鲜精液或冷冻精液；血清、血浆、全血或细胞培养物、当疑似有新城疫发生时，发病禽采集气管拭子和泄殖腔拭子（或粪便），死亡禽采集以419脑为主，也可采集脾、肺、气囊等组织检测采集的样品应尽快处理，如果没有处理条件,样品可在保存天；若超过天，需置保存4c44-20C、进行动物结核病的细菌性检查时，死畜可采淋巴结及其它组织；活畜可采其痰、乳、精420液、子宫分泌物、尿和粪便等进行检测

五、兽医实验室检测技术、实验室检测的目的与意义421（）确诊疾病1（）检测、监测和流行病学调查2（）检测疫苗免疫效果和母源抗体3（）疾病检测净化

4、实验室常用的消毒灭菌方法有火焰、煮沸、高压蒸汽、紫外线、过滤、强酸、强碱、消422毒剂等、杀灭一般病原微生物煮沸时间为小时

4231、福尔马林是指・的甲醛溶液，常用福尔马林制做标本4243540%10%、通常用的消毒酒精浓度为42575%、用酒精配制酒精毫升需加水毫升42695%75%

1000211、用人工紫外线照射进行消毒，其时间不能少于分钟

42730、甲醛熏蒸消毒方法规定甲醛与高钵酸钾的比例为

42821、新购入玻璃器皿不可以直接使用，使用前清洗干净进行干热消毒（℃小时）429160-180,1-

2、载玻片、盖玻片使用后需消毒，可浸泡于石炭酸溶液中小时4305%

48、的煤酚皂溶液用于手部消毒的煤酚皂溶液用于器械用具及排泄物的消毒4311-2%5-10%、高压蒸汽和干热灭菌的方法适用于耐高温、高湿的器械和物品的灭菌如金属器材、玻432璃器皿等、一次性个人防护用品（帽子、口罩、手套、工作服、防护服等）使用后应放入污物袋内433集中销毁、玻璃吸管、试管、离心管、玻片、玻璃棒、三角瓶和平皿等玻璃器皿使用后应立即浸入434过氧乙酸或有效氯为的含氯消毒剂中小时以上，消毒后用超声波清洗的方法

0.5%2000mg/L1洗净沥干，使用前再进行高压灭菌处理、金属注射器不能用高压消毒或干热消毒

435、高压蒸汽灭菌法效果最好、最常用，可杀死一切微生物和芽泡常用于培养基、溶液、器436皿、器械、敷料、橡皮手套、工作服和小实验动物尸体等灭菌、高压蒸汽灭菌液体注意事项437灭菌液体时，应将液体灌装在硬质的耐热玻璃瓶中，建议盛液量不超过容器容积的瓶口应3/4,选用棉花纱塞，切勿使用未打孔的橡胶塞或软木塞在灭菌结束时，不准立即释放蒸汽,必须待压力表指针回归零位方可排放余气，否则会导致液体沸腾使玻璃容器爆裂的事故、甲438醛熏蒸消毒方法及注意事项（）按照每立方米甲醛（）毫升、高镒酸钾克计算用量将甲醛倒入盛有高镒酸钾的140%105容器内不同情况用量有所不同，但比例为21（）盛药容器要大、耐热、耐腐蚀一般用陶瓷或玻璃容器，因为高镒酸钾和甲醛都具有腐蚀2性，且混合后反应剧烈，释放热量（）房间要密闭这样熏蒸效果更好3（）容器尽量靠近门，以便操作人员迅速撤离；先将适量温水倒入容器内，后加入高镒酸钾，4搅拌均匀；再加入甲醛；加入甲醛后人立即离开，密闭房间（）消毒时间一般为分钟520-30（）消毒后要打开门窗通风换气

6、实验室常用的染色法有美蓝染色法、瑞氏染色法、姬姆萨氏染色法、革兰氏染色法等

439、革兰氏染色的关键步骤是酒精脱色

440、经姬姆萨氏染色后，病料标本镜检时细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其他颜色，视野呈441红色、沙门氏菌在培养基上菌落为无色，而大肠杆菌为红色442SS、培养基制作的一般要求443（）培养基必须含有细菌生长繁殖所需要的营养物质所用的化学药品必须纯净，称取的份量1务必准确（）培养基的酸碱度应符合细菌生长耍求按各种培养基要求准确测定调节值多数细菌2pH生长的适宜pH值为

7.2〜

7.6,呈弱碱性（）培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果及不损失培养3基的必需营养成分培养基经灭菌后，必须置温箱中培养小时，无菌生长者方可应用37c24（）所用器皿须洁净，忌用铁或钢质器皿，要求没有抑制细菌生长的物质存在4（）制成的培养基应该是透明的，以便观察细菌生长性状以及其他代谢活动所产生的变化、5444不同的细菌培养基制备方法不同，但制作过程一般包括以下步骤（）准确称量试剂根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净1（）校正值将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，2pH测定酸碱度，常用pH

6.8〜

8.0的精密试纸或酸度计测定用1N NaOH和1N HCI调节pH值到适宜范围内（）过滤将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其3中过滤至透明（）分装将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装；三角瓶中装45mL100〜150ml）,塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌（）灭菌培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀5死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好、一般保存病毒毒种的最佳温度是℃445-

70、细菌鉴定的基本方法（从几个方面鉴定细菌）446菌落形态观察观察菌落的大小、形状、隆起度、边缘、表面性状、颜色与透明度、质地1和干湿度染色镜检按照革兰氏染色或瑞氏染色方法进行制片、初染、媒染、脱色、复染、干燥、2镜检；干燥后，用油镜观察常见的生化鉴定如糖发酵试验、吧噪靛基质试验、淀粉水解试验、试验、甲基红、3V-P M试验、柠檬酸盐利用试验、硝酸盐还原试验、接触酶试验、氧化酶试验R血清学鉴定检定抗原型或血清型4分子生物学鉴定利用分子生物学手段进行细菌的种属、亚型的鉴定5动物试验测定致病性或毒力

6、琼脂扩散试验判定标准447进行抗体检测时，可将已知抗原置中央孔，周围、、孔加标准阳性对照，、、也分别135246加待检血清，待检孔与阳性孔出现的沉淀带完全融合者可判为阳性，待检血清无沉淀带或所出现的沉淀带与阳性对照沉淀带完全交叉者判为阴性，、琼脂扩散试验结果判定，阳性对照与被检血清孔之间出现沉淀线，其末端不与阳性沉淀448线相连，不可以判定为阳性反应、琼脂扩散试验中，有的受检样品产生条沉淀线,其中4492一线与已知抗原抗体的沉淀线融合者仍判为阳性反应、在对未免疫动物种群进行流行病学调查时，抗体水平应该作为主要的感染依据

450、分子生物学实验室布局应该各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流，451形成单向流程的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果、在试验中，能使红细胞完全凝集凝集，++++的抗原最高稀释倍数代表个血452HA100%1凝单位HAUo、已知禽流感原始抗原效价为时，配制单位抗原毫升则需要原始抗原毫升

45312564641、制备禽流感试验的鸡红细胞悬液，至少需只公鸡或无禽流感和新城疫等抗体454HI3SPF的健康公鸡提供红细胞、正向间接血凝试验是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体；反向间接血455凝试验是将抗体致敏于红细胞表面，用以检测相应抗原、是酶联免疫吸附试验，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相456ELISA结合起来的一种敏感性很高的试验技术基本反应类型有间接、双抗体夹心或ELISA ELISA捕捉、竞争或阻断ELISA ELISA ELISA、反应中，加入底物液后的避光反应，应严格执行说明书时间，并非时间越长，反457ELISA应越充分，颜色对比越明显、进行试验时，试剂盒拿出冰箱后，应达到室温后再进行检测458ELISA、不同批次的试剂盒，不可以通用459ELISA、试验中最佳常用底物是-四甲基联苯胺460ELISA3355TMB、间接方法的主要原理、试验步骤、结果判定方法461ELISA基本原理把抗原在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面；测定时，1将受检样品和酶标记物按一定程序反应形成复合物，并加入酶作用的底物;反应终止时,根据定性或定量分析有色产物的量来确定待检样品中的抗体的含量试验步骤抗原包被一洗涤封闭一加待检血清同时设立阴阳性对照一反应一定时间一洗2涤一加酶标二抗一反应一定时间一洗涤一加底物溶液一反应一定时间一终止反应一判定结果结果判定肉眼观察或仪器测定，可以阳性与阴性表示结果、以比值表示结果、以终3P/N点滴度表示结果或以标准曲线进行定量测定、斑点462-ELISA实验在硝酸纤维膜上进行，抗原（体）点样呈斑点，反应结果观察斑点的呈色ELISA、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测方法可用于区分野毒感染动物与疫苗免疫动物其4633ABe原理是动物在感染口蹄疫野毒后既产生结构蛋白抗体，也产生抗体，而接种口蹄疫疫苗（疫苗毒经过纯化，去除了病毒的非结构蛋白）后，应只产生结构蛋白抗体、对口蹄疫疫苗多次重复免疫的动物进行非结构蛋白（）抗体检测，出现阳性反应时应464NSP判定该动物存在口蹄疫野毒感染，但也有可能是假阳性的原因一是由于疫苗毒的纯化存在问题；二是由于疫苗制备时允许痕量存在，多次重复免疫动物所致NSP即聚合酶链反应（）具有特异、敏感、快速等特点465PCR PolymeraseChain Reaction,PCR,扩增反应包括个步骤，变性、退火（复性）、延伸个步骤

33、反应体系的基本成分由耐热的聚合酶、引物、、、缓冲液、模板466PCR DNAdNTP Mg2+组成

467、PCR引物长度一般为15〜30个核甘酸过短时影响PCR的特异性，过长时会提高相应退火温度，使延伸温度超过聚合酶最适温度℃影响产物的生成TaqDNA74,、提取病原核酸，经氯仿去除蛋白质时，离心后上清应小心操作，靠近沉淀的那层膜，一468定不要吸取，以免蛋白质污染、采用异硫氧酸胭提取病毒时，第一次离心完毕后，上层水相中含有469RNA RNA、抽提时防止降解的措施470RNA（）保持低温；1（）尽量减少抽提时间，减少暴露在空气中的时间；2（）使用水处理的耗材和试剂；3DEPC（）使用酶抑制剂；4RNA（）处理组织时，尽量灭活内源的酶；5RNA（）使用正确的储存条件；6（）操作过程中带口罩、手套、帽子

7、进行试验时，若提取的需要长期保存，应在以下保存471RT-PCR RNA-70C、聚合酶链反应产物电泳时，加样的位置应该在靠近（负）极的方向

472、检测过程中，控制污染的主要措施473PCR（）对实验室进行严格的分区（包括配液区、提取区、扩增区和产物分析区的分区；也包括1和提取的分区），以及严格控制物流的方向例如各个区的东西不交叉使用DNA RNA（包括白大褂、帽子、手套、板架、移液器、提取设备、提取试剂等）；（）严格控制环境工作过程中尽量防止扩增物的扩散；垃圾等污染物要及时清理；用紫外线2消除长片段污染物；实验空隙多通风，降低单位空间中的污染物；实验中严格控制层流;实验中使用帽子和口罩；（）设立质控，实验过程的阴阳性对照是查找污染源的很好方法；3（）分装试剂，大包装的试剂应当分成小包装后使用；4（）酶的使用，可以有效控制污染物5UDG、实时荧光技术是近几年发展起来的一种新的定量和定性技术474PCR DNA/RNA、口蹄疫液相阻断抗体检测方法的用途和原理475ELISA用途主要检测针对病毒衣壳蛋白的抗体，可用于不同动物免疫效果的评估工作原理先用待检血清与已知的一定量抗原结合，占据抗原位点，然后再用已知量的阳性血清与抗原结合，最后通过检测抗原结合阳性血清的多少反推出待检血清中特异性抗体的数量由于该试验使用酶标抗体不受待检血清来源动物种类的影响，所以适应于各种动物（猪、牛、羊）血清的检测、禽流感抗体检测方法的用途和原理476HI用途主要分两方面，应用标准病毒悬液测定血清中的相应抗体水平和应用特异性的抗体鉴定新分离的病毒血凝原理因病毒而有所不同流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触这时的红细胞凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（）反应，也称为血凝抑制反应、口蹄疫HI477型正向血凝试验的试验原理抗原与其相对应的抗体相遇，在一定条件下会形成抗原抗体复合物，但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见若将抗原吸附（致敏）在经过特殊处理的红细胞表面，只需要少量抗原就能大大提高抗原和抗体的反应灵敏性这种经过口蹄疫纯化抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇，红细胞便出现清晰可见的凝集现象、实验室检测禽流感病毒及抗体的方法和用途478检测病毒方法（）病毒（鸡胚、细胞）分离培养与鉴定，用途为直接分离病毒；1（）免疫荧光法，用途为检测组织、细胞培养物中病毒抗原；2（）免疫酶法（包括免疫酶组织化学染色法和免疫过氧化物酶细胞单层试验），用途为检测组3织、细胞培养物中病毒抗原；（）中和试验，用已知阳性血清检测病毒，金标准方法；4（）血凝/血凝抑制试验，用已知阳性血清检测病毒；5（）乳胶凝集试验，用已知阳性血清检测病毒抗原；6（）胶体金试纸，用已知阳性血清检测病毒抗原；7方法，用已知阳性血清检测病毒抗原；8ELISA（含荧光）用途为检测病毒核酸；9RT-PCR RT-PCR,用途为检测病毒核酸；10NASBA,（）核酸探针，用途为检测病毒核酸；11（）基因芯片，检测病毒核酸；12（）核酸序列测定，解析病毒核酸13检测抗体方法（）琼脂扩散试验，检测病毒和蛋白抗体；1NP M（）血凝抑制试验，检测病毒蛋白抗体，可用于免疫效果评估；2HA（）神经氨酸酶抑制试验，检测病毒蛋白抗体；3NA（）中和试验，用已知病毒检测血清，金标准方法；4（）方法，用已知病毒抗原检测特异抗体；5ELISA（）胶体金试纸，用已知病毒抗原检测特异抗体；6（）乳胶凝集试验，用已知病毒抗原检测特异抗体

7、实验室检测口蹄疫病毒和抗体的方法和用途479检测病毒方法（）病毒（乳鼠、细胞）分离培养与鉴定，用途为直接分离病毒；1（）免疫荧光法，用途为检测组织、细胞培养物中病毒抗原；2（）反向间接血凝法，用已知阳性血清检测病毒及分型；3（）中和试验，用已知阳性血清检测病毒，金标准方法；4（）双抗体夹心方法，用已知阳性血清检测病毒抗原；5ELISA、采集病原微生物样本应具备以下个条件154（）具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备1（）具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员2（）具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施3（）具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段

4、任何单位和个人发现疑似重大动物疫病病例的，应及时向当地动物防疫监督机构报告动16物防疫监督机构应立即按照有关规定赴现场进行核实、县级动物防疫监督机构接到疑似疫情报告后，立即派出不少于名以上具有相关资格的防172疫人员到现场进行临床和病理诊断等调查核实确认为疑似重大动物疫病疫情的，应在小时2内报告同级兽医行政管理部门，并逐级上报至省级动物防疫监督机构省级动物防疫监督机构在接到报告后，小时内向省级兽医行政管理部门和国家动物防疫监督机构报告、重大动118物疫情报告的主要内容（）疫情发生的时间、地点；1（）染疫、疑似染疫动物种类和数量、同群动物数量、免疫情况、死亡数量、临床症状、病理2变化、是否有人员感染、诊断情况；（）流行病学和疫源追踪情况；3（）已采取的控制措施；4（）疫情报告的单位、负责人、报告人及联系方式

5、根据突发重大动物疫情的性质、危害程度、涉及范围，将突发重大动物疫情划分为特别重19大（级）、重大（级）、较大（山级）和一般（级）四级I HIV、有下列情形之一的，为口蹄疫级（特别重大）疫情20I（）在日内，个以上（含）省份连片发生疫情；1145（）个以上县（区）连片发生，或疫点数达到个以上；22030（）农业部认定的其它特别严重口蹄疫疫情

3、有下列情形之一的，为口蹄疫级（重大）疫情21II（）在日内，在一个省级行政区域内有个以上（含）相邻地（市）的相邻区域或者个以11425上（含）县（区）发生疫情；或有新的口蹄疫亚型疫毒引发的疫情；（）农业部认定的其它重大口蹄疫疫情

2、

二、三类动物疫病呈暴发性流行时，按照一类动物疫病处理

22、以疫点为中心的一定范围内的区域划定为疫区，疫区划分时需要考虑的因素为23（）当地的饲养环境1（）天然屏障（如河流、山脉）2（）交通因素

3、种用、乳用动物应当接受动物疫病预防控制机构的定期检测检测不合格的，应当按照国24务院兽医主管部门的规定予以处理、国家对动物疫病实行预防为主的方针，经强制免疫的动物应当按照国务院兽医主管部门的25规定建立免疫档案，加施畜禽标识，实施可追溯管理、国家对严重危害养殖业生产和人体健康的动物疫病实施强制免疫

26、《动物防疫法》第九条规定动物疫病预防控制机构职责是依法承担动物疫病的监测、检27测、诊断、流行病学调查、疫情报告以及其他预防、控制等技术工作、《动物防疫法》关于无规定动物疫病区的界定是指具有天然屏障或者采取人工措施，在一28定期限内没有发生规定的一种或者几种动物疫病，并经验收合格的区域、《动物防疫法》第十五条规定，动物疫病预防控制机构应当按照国务院兽医主管部门的规29定，对动物疫病的发生、流行等情况进行监测；从事动物饲养、屠宰、经营、隔离、运输胶体金试纸，用已知阳性血清检测病毒抗原；6含荧光用途为检测病毒核酸；7RT-PCR RT-PCR,核酸序列测定，解析病毒核酸8检测抗体方法琼脂扩散试验，检测病毒抗原抗体；1VIA正向血凝抑制试验，检测病毒衣壳蛋白抗体，可用于免疫效果评估；2液相阻断试验，检测病毒衣壳蛋白抗体，可用于免疫效果评估；3ELISA合成肽间接检测方法，检测病毒蛋白抗体，可用于免疫肽苗的家畜的免11VP1ELISA VP1疫效果评估；非结构蛋白抗体检测方法，检测病毒非结构蛋白抗体，用于感染与免疫动123ABC ELISA物的区分；中和试验，用已知病毒检测血清，金标准方法；6胶体金试纸，用已知病毒抗原检测特异抗体；7补体结合试验，用已知病毒抗原检测特异抗体

8、实验室检测猪瘟病毒和抗体的方法和用途480检测病毒方法病毒细胞分离培养与鉴定，用途为直接分离病毒；1免疫荧光法猪瘟荧光抗体染色法，用途为检测扁桃体等组织以及细胞培养物中病毒抗原；2免疫酶法包括免疫酶组织化学染色法和免疫过氧化物酶细胞单层试验，用途为检测组织、3细胞培养物中病毒抗原；兔体交叉免疫试验，用以检测是否含有猪瘟病毒的定性依据；4中和试验，用已知阳性血清检测病毒，金标准方法；5方法猪瘟单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验，用已知阳性血清检测病毒抗原；13ELISA含荧光用途为检测病毒核酸；14RT-PCR RT-PCR,核酸序列测定，解析病毒核酸8检测抗体方法正向间接血凝试验用已知血凝抗原检测特异抗体；1IHA,中和试验，用已知病毒检测血清，金标准方法；2方法猪瘟病毒抗原酶联免疫吸附试验，用已知病毒抗原检测特异抗体3ELISA、禽流感抗原微量血凝试验，反应板孔内最终体积为微升，试验中所用的值为48175PBS PH浓度为

720.01mol/L、布鲁氏菌病的常规实验室检测方法482筛选检测时用琥红平板凝集试验或全乳环状凝集试验，阳性样品再用试管凝集反应或补体结合试验进行复核琥红平板凝集试验阳性或全乳环状试验阳性但试管凝集试验阴性，不可以判定未免疫动物感染布布鲁氏菌病；试管凝集试验阳性或补体结合试验阳性，可以判定未免疫动物感染布布鲁氏菌病、布鲁氏菌病的试管凝集试验的判定标准483牛、马、鹿和骆驼血清稀释，猪、山羊、绵羊和狗血清稀释，出现“++”以上11:1001:50凝集现象时，受检血清判定为阳性牛、马、鹿、骆驼血清稀释，猪、山羊、绵羊、狗血清稀释，出现“++”以上21:501:25凝集现象时，受检血清判定为可疑反应（）可疑反应家畜经・周后重检，如果仍为可疑，该牛、羊判为阳性猪和马经重检仍保持334可疑水平，而农场的牲畜没有临床症状和大批阳性患畜出现，该畜被判为阴性、口蹄疫正向间接血凝，以呈现凝集“++”的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价48450%、牛型结核分枝杆菌皮内变态反应检测方法及判定标准485PPD在牛颈侧中上部处剃毛，直径约用游标卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录,然后1/31cm,用酒精棉消毒，皮内注射于后进行观察、测量，接种部位局部有明显的炎性反

0.1mL,72h应，皮厚差大于或等于的为阳性；皮厚差在・为可疑；无炎性反应，皮厚差

4.0mm

2.

13.9mm在以下判为阴性既使皮厚差小于，但有一定的炎性反应，也应判为可疑2mm2mm对于阴性和可疑反应牛，应在注射后和再分别观察一次，以防出现迟发性变态反应96h120h对于可疑反应牛，过后进行复测，连续两次检测仍为可疑或阳性的，视为阳性牛、60d486口蹄疫型正向间接血凝试验共设个对照阴性对照、阳性对照、稀释液对照

3、亚型口蹄疫液相阻断试验共设个对照487I ELISA3病毒抗原对照、阳性血清对照、阴性血清对照、《高致病性禽流感防治技术规范》规定的血凝抑制试验成立条件及判定标准488（）只有阴性对照孔血清滴度不大于阳性对照孔血清误差不超过个滴度，试验结果1210g2,1才有效（）价小于或等于判定试验阴性；价等于为可疑，需重复试验；价2HI2Iog2HI HI3Iog2HI大于或等于为阳性4Iog

2、伪狂犬病毒检测的主要方法489病毒分离鉴定、聚合酶链式反应、家兔接种试验、伪狂犬病毒抗体检测的主要方法490中和试验、酶联免疫吸附试验和胶乳凝集试验、马传贫实验室诊断的主要方法491马传贫琼脂扩散试验（）、马传贫酶联免疫吸附试验（）、马传贫病原分离鉴定AGID ELISA、国标规定的新城疫主要诊断方法492临床诊断、病毒分离与鉴定、血凝和血凝抑制试验、反转录聚合酶链式反应（）RT-PCR、狂犬病病毒和抗体监测常用试验方法493（）病毒检测脑组织以直接免疫荧光或进行检测1RT-PCR（）抗体检测方法、免疫荧光灶抑制试验2ELISA、高致病性猪蓝耳病的病原检测采用或荧光定量其与经典猪蓝耳病鉴别的494RT-PCR PCRo原理是针对猪蓝耳病病毒的基因的特征性缺失进行鉴别检测NSP

2、猪瘟正向间接血凝试验的判定标准495免疫天后，抗体效价之为免疫合格

2125、猪瘟病原学检测496用荧光免疫抗体或等方法，对流产、死胎及以高热为特征的死亡病例进行病原学检测RT-PCR、鸡新城疫监测497免疫抗体检测可用血凝抑制试验方法鸡免疫天后，抗体效价之为免疫合格病原学2125检测可用鉴定方法进行病毒检测可用方法结合核酸序列测定、猪RT-PCR RT-PCR498蓝耳病的实验室诊断方法病毒分离与鉴定；免疫过氧化物酶单层试验（）；间接免疫荧光试验（）；间接；IPMA IFAELISA及荧光RT-PCR RT-PCRo、依据“高致病性禽流感诊断技术禽流感病毒的鉴定步骤499GB/T18936-2003,型流感病毒的型特异性鉴定用具有血凝活性鸡胚的绒毛尿囊膜制成抗原，与1A CAMA型禽流感病毒标准阳性血清进行试验，检测样品中是否含有型流感病毒AGID A血凝素亚型鉴定:用禽流感病毒种血凝素亚型分型血清，采用试验方法，215HLH15HA-HI对样品进行病毒亚型鉴定、常用英文简称的含义500血凝；血凝抑制；间接血凝抑制；酶联免疫吸附试验；补体结合试验；HA HIIHA ELISACF病毒中和试验；血凝单位；聚合酶链反应；反转录-聚合酶链反应；VN HAUPCR RT-PCR琼脂凝胶免疫扩散试验；脑内接种致病指数；静脉接种致病指数；AGID ICPIIVPI TCID50半数组织培养感染量、常用禽传染病病名英文缩写501鸡传染性喉气管炎、新城疫、马立克氏病、鸡传染性法氏囊病、鸡痘、I LTND MDI BDFP禽痘、传染性支气管炎、减蛋综合征、鸡肿头综合征、禽流感、POX IBEDS-76SHS AI禽脑脊髓炎、败血霉形体、传染性鼻炎和禽霍乱等AE MGIC FC、口蹄疫监测502免疫抗体检测方法及判定标准1方法口蹄疫用正向间接血凝试验、液相阻断或其他试验，亚洲型口蹄疫用ELISAELISAI液相阻断ELISA判定正向间接血凝试验，免疫天抗体效价为免疫合格；液相阻断免疫天抗21225ELISA,21体效价为免疫合格；其他试验检测抗体阳性判定为合格N26ELISA病原检测2牛、羊口蹄疫感染情况使用非结构蛋白抗体方法检测检测结果阳性的，采集其食道-ELISA咽部分泌物液用方法检测，若检测结果为阴性应间隔天再采样检测一次，O-P RT-PCR15检测阳性的判定为阳性畜RT-PCR对猪的检测从屠宰场采集猪颌下淋巴结用方法进行检测，结果为阳性的判定为阳RT—PCR性猪，对阳性猪进行流行病学调查、鸡传染性支气管炎综合判定503对于未接种传染性支气管炎疫苗的鸡群，经血清学或病原学任何一种方法检测呈阳性结果时，都可判定为感染鸡群对于接种过传染性支气管炎疫苗的鸡群，无论鸡群在疫苗免疫期内或已超过免疫期，当病毒分离鉴定试验为阳性时，可判定为旧感染鸡；仅血清学试验呈阳性时，V应结合病史和疫苗接种史，进行综合判定对血凝素基因裂解位点的氨基酸序列测定结果与高致病性禽流感分离株基因序列相符

5、结核分枝杆菌皮内变态反应试验，皮内注射后小时观察反应结果，对于阴504PPD48-72性牛和疑似反应牛，于注射后小时和小时再分别观察一次

96120、动物机体大组织5054上皮组织、结缔组织、肌肉组织、神经组织、哺乳动物的血液由血浆和悬浮于血浆中的有形成分组成血浆包括血清和纤维蛋白原;有506形成分包括血小板和血细胞，血细胞包括红细胞和白细胞以及动物产品生产、经营、加工、贮藏等活动的单位和个人不得拒绝或者阻碍、《动物防疫法》第七十一条规定，动物疫病预防控制机构及其工作人员违反本法规定，有30下列行为之一的，由本级人民政府或者兽医主管部门责令改正，通报批评；对直接负责的主管人员和其他直接责任人员依法给予处分未履行动物疫病监测、检测职责或者伪造监测、检测结果的；1发生动物疫情时未及时进行诊断、调查的；2其他未依照本法规定履行职责的行为

3、官方兽医是指具备规定的资格条件并经兽医主管部门任命的，负责出具检疫等证明的国家31兽医工作人员

二、兽医实验室生物安全、兽医实验室是指一切从事兽医病原微生物、寄生虫研究与使用，以及兽医临床诊疗和疫病32检疫监测的实验室、《病原微生物实验室生物安全管理条例》是年由国务院颁发的

332004、国家根据病原微生物的传染性，感染后对个体或者群体的危害程度以及流行状态并考虑是34否具有有效的预防治疗措施等因素，将病原微生物分为类

4、国家根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平，实行分级管理

35、实验室生物安全防护水平分为一级、二级、三级和四级，一级防护水平最低，四级最高

36、以、、、表示从事体外操作的实验室的相应生物安全防护水平37BSL-1BSL-2BSL-3BSL-

4、以、、和表示包括从事动物活体操作的实验室的相应生38ABSL-1ABSL-2ABSL-3ABSL-4物安全防护水平、、和、实验室应当通过国家认可39BSL-4BSL-3ABSL-3ABSL-

4、一类和二类病原微生物统称为高致病性病原微生物

40、一级、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动

41、开展口蹄疫、高致病性禽流感未经培养的感染性材料实验可以在实验室中进行42BSL-

2、开展口蹄疫、高致病毒禽流感灭活材料实验，可以在实验室中进行43BSL-

2、开展口蹄疫病毒、高致病毒禽流感病毒分离培养应该在实验室中进行44BSL-

3、开展口蹄疫病毒、高致病毒性禽流感病毒动物实验活动应该在实验室中进行45ABSL-

3、

二、

三、四级生物安全实验室可开展未经培养的高致病性禽流感病毒、口蹄疫病毒感染性46材料试验、从事高致病性禽流感病毒、口蹄疫病毒的培养及动物接种等实验活动必须报农业部审批

47、二级生物安全实验室必须有生物安全柜、洗眼器、高压蒸汽灭菌器等生物安全设备

48、实验室或者实验室的设立单位应当每年定期对工作人员进行培训，保证其掌握实验室技术49规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能，并进行考核工作人员经考核合格的方可上岗、从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有名以上的工作人员共同进行

502、在同一个实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微生物的相关51实验活动、人畜共患病是指在脊椎动物与人类之间自然传播感染的疫病病原体包括细菌、病毒、支52原体、衣原体、螺旋体、立克次体、真菌、原生动物和内外寄生虫等，可通过直接接触或节肢动物、啮齿动物为媒介以及病原污染的空气、水等传播，重要者为炭疽、结核病、布鲁氏菌病、狂犬病、口蹄疫及旋毛虫病等、实验室工作人员在处理病原微生物、含有病原微生物的实验材料或寄生虫时，必须采取综53合防护措施，以确保实验对象不对人和动物造成生物伤害，确保周围环境不受其污染如在实验室和动物实验室的设计与建造、使用个体防护装置、严格遵守标准化的工作及操作程序和规程等、物理防护设备是用于防止病原微生物逸出和对操作者实施防护的物理或机械设备

54、实验室初级物理防护屏障（一级防护）包括各级生物安全设备和个人防护器具

55、实验室主要的初级生物安全防护设备设施有个人防护用品（服装、手套、帽子、口罩等）、56生物安全柜等、气溶胶是悬浮于气体介质中粒径为的固体、液体微小粒子形成的胶溶状态

570.001-100|jm分散体系、菌（毒）种是指具有保藏价值的动物细菌、真菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次氏体、58螺旋体、病毒等微生物、运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本，应当通过陆路运输；没有陆路通道，必须59经水路运输的，可以通过水路运输；紧急情况下或者需要将高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本运往国外的，可以通过民用航空运输、动物病料的跨省航空托运手续需要（）符合国家有关生物安全法律法规规定；（）持有出发6012地省级兽医行政管理部门颁发的《动物病原微生物菌（毒）种或样本及动物病料准运证书》；（）托运人须接受危险品航空动输训练，并持有有效证件

3、运送高致病性病原微生物应具备以下条件61（）运输目的、高致病性病原微生物的用途和接收单位符合国务院卫生主管部门或者兽医主管1部门的规定（）高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本的容器应当密封，容器或者包装材料还应当符合2防水、防破损、防外泄、耐高（低）温、耐高压的要求（）容器或者包装材料上应当印有国务院卫生主管部门或者兽医主管部门规定的生物危险标识、3警告用语和提示用语、运输含高致病性病原微生物的样本时，包装样本的容器应当密封，容器或者包装材料还应62当符合防水、防破损、防外泄、耐高（低）温、耐高压的要求；容器或者包装材料上应当印有农业部规定的生物危险标识、警告用语和提示用语、运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本，应当由不少于人的专人护送，并采取相632应的防护措施、菌（毒）种和样品及动物病料的托运人或其代理人必须接受危险品航空运输训练，并持有64有效证件、菌（毒）种保藏机构分为国家级保藏中心和省级保藏中心

65、国务院卫生主管部门或者兽医主管部门指定的菌（毒）种保藏中心或者专业实验室（以下66称保藏机构），承担集中储存病原微生物菌（毒）种和样本的任务、根据《动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法》规定保藏机构以外的任何单位和个人67不得保藏菌（毒）种或者样本、实验室在相关实验活动结束后，应当依照国务院卫生主管部门或者兽医主管部门的规定，68及时将病原微生物菌（毒）种和样本就地销毁或者送交保藏机构保管保藏机构接受实验室送交的病原微生物菌（毒）种和样本，应当予以登记，并开具接收证明、实验室生物安全管理体系文件通常包括实验室生物安全管理手册、程序文件、操作规程及69仪器使用说明、记录表格等文件通过落实实验室安全管理体系文件可实现对实验室安全运行状态的控制、监督和记录，保证实验室生物安全管理体系的有效运行、生物安全管理手册提出了实验室生物安全的管理方针、管理目标、组织结构，规定了生物70安全管理体系各个要素和管理要求，如对生物传染性样本的保存、运输，及实验室设备的消毒和清洁、危险废弃物处理和处置工作，以及与实验室安全相关的消防安全、电气安全、化学品安全等方面作出了详细说明，是实验室生物安全工作的纲领性、指导性文件，为一级文件、生物安全程序文件依据实验室活动的目的、范围和职责，规定了工作流程中生物安全事宜71及要求，是生物安全管理手册的支持性文件，为二级文件、生物安全标准操作规程是实验室具体工作中，依据生物安全要求制定的技术文件，包72括实验操作细则、设施设备标准操作规程、个人防护装备标准操作规程等作业性文件，为配套性文件、生物安全记录、表格等为辅助性文件，规定了必须记录的生物安全工作事项，如实验73室的人员培训、实验活动、设施设备运行、安全检查记录等、实验室管理层应对实验室安全管理体系及其全部活动进行评审，包括设施设备的状态、人74员状态、实验室相关的活动、变更、事件、事故等、微生物危害评估是对病原微生物或寄生虫可能给人、动物和环境带来的危害所进行的评估

75、当实验室活动涉及致病性生物因子时，实验室对微生物的致病性和毒力应从以下几个方面76进行评估宿主范围；所引起疾病的发病率和死亡率；疾病的传播媒介；动物体内或环境中病原的量和浓度；排出物传播的可能性；病原在自然环境中的存活时间；病原的地方流行特性；交叉污染的可能性；获得有效疫苗、预防和治疗药物的程度等、实验室的废弃物包含废气、废液和固形物等，废弃物的处理方法主要有如高压灭菌、化学77消毒、熏蒸、射线照射或焚烧等Y-、实验室经常性危险废弃物78BSL-2（）可能带有病原的样本血清、组织、尸体、培养基、培养液、疫苗；1（）检测使用的物品滴头、离心管、试管、注射器等；2（）个体防护用品手套、口罩、防护服等

3、实验室危险废弃物处理的原则79（）将操作、收集、运输、处理及处置废物的危险减至最小；1（）将其对环境的有害作用减至最小；2（）只可使用被承认的技术和方法处理和处置危险废物；3（）排放符合国家或地方规定和标准的要求

4、实验室内的个体防护用品包含防护帽、护目镜、口罩、工作服、手套等个体防护80BSL-2用品接触病原微生物过后应当作危险废弃物进行处理，通常选用高压高温、化学消毒、焚烧等方法进行无害化处理等、实验室涉及的常用危险标识81BSL-2生物危险、有毒有害、腐蚀性、辐射、刺伤、电击、易燃、易爆、高温、低温、强光、振动、噪声、动物咬伤、砸伤等、・实验室的标准操作82BSL2（）工作一般在操作台面上进行，采用微生物的常规操作和特殊操作1（）工作区内禁止吃、喝、抽烟、用手接触隐形眼镜和使用化妆品食物应在专门设计的工作2区外的柜内或冰箱内贮藏（）使用移液管吸取液体，禁止用嘴吸取3（）操作传染性材料后要洗手，离开实验室前脱掉手套并洗手4（）制定对利器的安全操作对策5（）所有操作均须小心，以减少实验材料外溢、飞溅、产生气溶胶6（）每天完成实验后对工作台面进行消毒实验材料溅中时，要用有效的消毒剂消毒7（）所有培养物和废弃物在处理前都要用高压蒸汽灭菌器消毒消毒后的物品要放入牢固不漏8的容器内，按照国家法规进行包装，密闭传出处理（）昆虫和啮齿类动物的控制应参照其它有关规定进行9（）妥善保管菌、毒种，使用要经负责人批准并登记使用量10

三、实验室认证认可和管理制度、实验室认证认可工作应按照国家质量监督检验检疫总局于年月日颁布的《实验832006221室和检查机构资质认定管理办法》进行、从事下列活动的机构（实验室）应当通过资质认定84（）为行政机关作出的行政决定提供具有证明作用的数据和结果的；1（）为司法机关作出的裁决提供具有证明作用的数据和结果的；2（）为仲裁机构作出的仲裁决定提供具有证明作用的数据和结果的；3（）为社会公益活动提供具有证明作用的数据和结果的；4（）为经济或者贸易关系人提供具有证明作用的数据和结果的；5（）其他法定需要通过资质认定的

6、国家鼓励实验室取得经国家认监委确定的认可机构的资质认定，资质认定的形式包括计量85认证和审查认可、计量认证是指国家认监委和地方质检部门依据有关法律、行政法规的规定，对为社会提供86公证数据的产品质量检验机构的计量检定、测试设备的工作性能、工作环境和人员的操作技能和保证量值统

一、准确的措施及检测数据公正可靠的质量体系能力进行的考核、审查认可是指国家认监委和地方质检部门依据有关法律、行政法规的规定，对承担产品是87否符合标准的检验任务和承担其他标准实施监督检验任务的检验机构的检测能力以及质量体系进行的审查、国家认证认可监督管理委员会（国家认监委）统一管理、监督和综合协调实验室和检查机88构的资质认定工作各省、自治区、直辖市人民政府质量技术监督部门负责所辖区域内的实验室和检查机构的资质认定和监督检查工作、实验室资质认定（计量认证/审查认可）以《实验室和检查机构资质认定管理办法》为依89据，按《实验室资质认定评审准则》实施评审实验室认可根据《检测和校准实验室能力认可准则》（）进行评审ISO/IEC

17025、实验室应当建立标准化的管理体系文件，包括质量管理体系文件和生物安全管理体系文件90实验室管理体系应覆盖其所有场所进行的工作管理体系文件摆放在明显位置，易于日常工作时查阅、实验室所有管理体系文件都应该受控，受控的文件应有控制编号

91、实验室质量管理体系文件主要由质量管理手册、程序文件、作业指导书、技术记录表格及92质量记录表格等质量文件组成、实验室质量管理方针93科学、及时、准确科学遵守国家有关法律法规，依据检测技术规程、规范和标准，选用匹配的仪器设备，确保检测方法的科学性及时做好检测用药品试剂的储备工作，在规定的时间内完成检测工作准确检测报告以准确无误为标准，确保检测结果的准确性、实验室质量管理目标94建立并实施完善的质量体系，确保有效运行并持续改进检测中的重大事故率为零，检测报告无数据或结论性差错。