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猪瘟病毒感染猪瘟是一种严重危害养猪业的传染性疾病,具有高度传染性和致死率本次课程将全面介绍猪瘟病毒的基本特性、流行病学、致病机理、临床表现、诊断方法及防控措施等方面内容目录基础知识疾病特征猪瘟概述发病机理病原学临床症状流行病学病理变化防控与治疗诊断方法防控措施治疗与预防第一部分猪瘟概述疾病定义猪瘟是一种急性、高度接触性传染病,由猪瘟病毒引起历史沿革全球范围内的发现、传播与流行历程经济影响对养猪业造成的严重经济损失和国际贸易限制猪瘟的定义疾病性质易感动物重要性猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急主要影响家猪和野猪,不同年龄、被世界动物卫生组织(OIE)列为性、热性、高度接触传染性疾病,品种的猪均可感染,但幼龄猪更为必须通报的疫病,是世界范围内对以发热、出血和高死亡率为特征敏感,病死率可达100%养猪业危害最严重的疾病之一猪瘟不仅影响生猪健康,也对养猪生产和肉品贸易造成巨大影响理解猪瘟的基本定义和特征,是开展防控工作的第一步我国将猪瘟列为一类动物疫病,实行严格的预防控制措施猪瘟的历史首次发现传入中国1833年,美国俄亥俄州首次报道猪瘟疫情1902年,猪瘟首次传入中国,造成严重损失1234病原确定疫苗研发1903年,德国科学家确认猪瘟为病毒性疾病20世纪50年代,兔化弱毒苗在全球推广使用猪瘟的历史可以追溯到19世纪初,经过近两个世纪的研究,科学家们不断揭示其病原学特性、流行规律和防控措施从最初的无法控制到现在的有效预防,猪瘟防控经历了艰难的发展历程猪瘟的经济影响30%70%生产下降死亡率疫情期间养猪场平均生产效率下降比例急性猪瘟感染的猪群死亡率可高达70-100%亿¥100年度损失中国每年因猪瘟造成的直接经济损失估计猪瘟对养猪业的经济影响是多方面的,不仅包括直接的生猪死亡损失,还包括疫苗接种费用、防疫消毒成本、生长性能下降及国际贸易限制等间接损失一旦发生猪瘟疫情,常常导致受影响国家猪肉出口受到限制,市场价格波动加剧此外,猪瘟防控需要投入大量人力、物力和财力,增加了养猪成本因此,有效防控猪瘟对保障养猪业健康发展和国家食品安全具有重要意义第二部分病原学基因组特性单股RNA结构与功能结构特点囊膜结构与蛋白组成分类地位披盖病毒科瘟病毒属猪瘟病毒的病原学特征是理解其致病性和防控策略的基础本部分将从病毒的分类地位、形态结构、基因组特性、复制周期、抗原性、毒力变异及环境抵抗力等方面,系统介绍猪瘟病毒的基本特性通过了解猪瘟病毒的本质属性,我们可以更好地把握疾病发生发展规律,为后续防控提供科学依据病原学研究也是疫苗研发和诊断方法改进的重要基础猪瘟病毒()CSFV分类地位基本特性猪瘟病毒(Classical SwineFever猪瘟病毒是一种有囊膜的单股正链Virus,CSFV)属于披盖病毒科RNA病毒,形态上呈球形或多面体(Flaviviridae)瘟病毒属病毒对外界环境相对敏感,但在低温(Pestivirus)和有机物存在的条件下可以长期存活,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和边增加了防控难度界病毒(BDV)同属一个属,具有相似的分子结构和基因组特性研究意义猪瘟病毒是重要的动物病原体,也是分子生物学和免疫学研究的重要模型深入研究其分子特性有助于疫苗研发和诊断技术的改进,对控制疫情具有重要实际意义病毒结构病毒囊膜病毒粒子外层由脂质双分子层构成的囊膜,含猪瘟病毒呈球形或多面体,直径约有重要的糖蛋白(E
0、E
1、E2)38~44nm基因组核心蛋白4核心包含单股正链RNA基因组,长约囊膜内是由C蛋白组成的核衣壳,保
12.3kb护病毒基因组猪瘟病毒结构与其他披盖病毒科成员相似囊膜上的糖蛋白特别是E2蛋白,在病毒吸附和入侵宿主细胞过程中起关键作用,同时也是诱导机体产生中和抗体的主要抗原了解病毒结构对于疫苗设计和诊断试剂开发具有重要意义病毒基因组非编码区结构蛋白区非结构蛋白区非编码区53含有重要的内部核糖体进入位点编码核心蛋白C和囊膜糖蛋白Erns、编码Npro、p
7、NS2-
3、NS4A、参与病毒RNA复制和翻译调控IRES,调控翻译起始E
1、E2NS4B、NS5A、NS5B等猪瘟病毒基因组为单股正链RNA,全长约
12.3kb,含有一个大的开放阅读框ORF,可编码约3898个氨基酸的单一多聚蛋白前体该前体经病毒和宿主蛋白酶切割后形成多种结构蛋白和非结构蛋白基因组序列分析是猪瘟病毒分子流行病学研究的基础,通过比较不同分离株的基因序列,可以追踪病毒的传播途径和演化关系,为疫情防控提供科学依据病毒复制周期脱壳释放吸附和入侵囊膜与内体膜融合,释放病毒RNA进入细胞质E2糖蛋白与细胞表面受体结合,通过内吞作用进入细胞基因组复制利用病毒RNA依赖的RNA聚合酶复制病毒基因组组装与释放内质网和高尔基体中组装,通过出芽蛋白翻译释放新病毒合成病毒多聚蛋白前体并进行加工猪瘟病毒复制过程主要在宿主细胞的细胞质中完成病毒进入细胞后,利用宿主细胞的翻译机制合成病毒蛋白,并在细胞内膜系统上进行组装每个感染细胞可释放数百个新病毒粒子,导致细胞破坏并扩大感染范围病毒抗原性主要抗原决定簇血清型特征E2糖蛋白是猪瘟病毒最主要的抗原蛋白,含有多个抗原表猪瘟病毒只有一个血清型,但存在多种基因型不同毒株之位,能诱导产生强烈的中和抗体间存在抗原交叉反应,这是猪瘟疫苗能够广泛保护的基础Erns和E1糖蛋白也具有一定的抗原性,但诱导的中和抗体水平较低尽管只有一个血清型,不同分离株之间仍存在抗原差异,导致疫苗保护效果有所不同•E2蛋白上的A、B、C、D四个区域是主要的抗原决定簇•基于E2和Erns蛋白的抗体检测是诊断的重要手段•这些区域的氨基酸变异可影响病毒的抗原性•E2蛋白高度变异区是亚型分类的依据病毒毒力强毒株致死率高达100%,感染后3-7天出现高热、出血、神经症状等典型临床表现中等毒力株致死率30-70%,临床症状较轻,病程更长,可出现亚临床感染弱毒株致死率低于30%,多表现为慢性或不典型感染,常用于疫苗制备猪瘟病毒毒力差异主要与其基因组中特定区域的变异有关,特别是E
2、Erns和NS
3、NS4A、NS4B等编码区的突变毒力是猪瘟临床表现和流行特征的决定因素,也是疫苗设计的重要考虑因素近年来,中等毒力和低毒力毒株的检出率有所增加,导致临床诊断难度增大,隐性感染增多,给防控工作带来新的挑战病毒的抵抗力物理因素抵抗力存活时间/效果温度低温抵抗力强4℃可存活数月;-20℃可保存多年干燥中等猪舍中可存活1-3周紫外线低30分钟内完全灭活热处理低56℃60分钟或80℃10分钟可灭活pH值中等pH3-11范围内相对稳定猪瘟病毒在外界环境中的抵抗力与周围环境条件密切相关在猪肉和猪制品中,特别是在冷藏或冷冻条件下,病毒可以存活数月至数年这是通过污染的猪肉制品传播疾病的重要原因针对猪瘟病毒的抵抗特性,使用适当的消毒剂如碱性物质、含氯消毒剂、醛类消毒剂等,可有效灭活环境中的病毒科学的消毒程序是防控猪瘟的重要措施第三部分流行病学宿主范围传播途径分布特征时间特性家猪和野猪是唯一自直接接触传播与间接全球性分布,多个国疫情发生具有季节性然宿主,不同年龄、接触传播并存,垂直家和地区仍有流行,波动,并与养殖密品种均可感染传播风险高中国属地方性流行度、流通环节密切相关流行病学特征是制定科学防控策略的重要依据了解猪瘟的传播途径、宿主范围、地理分布和影响因素,可以有针对性地采取预防措施,阻断传播链,降低发病风险宿主范围家猪野猪所有品种的家猪均对猪瘟病毒敏感,是主要的感染和传播宿野猪是猪瘟病毒的自然宿主,在某些地区成为重要的传染源主不同品种间感受性差异不明显,但年龄是影响感染后临和储存宿主野猪感染后临床症状往往不典型,增加了发现床表现的重要因素和控制的难度•幼龄猪(特别是2月龄以下仔猪)感受性最高,发病快,•野猪可长期携带病毒而无明显症状死亡率高•欧洲多国野猪成为猪瘟持续流行的重要因素•成年猪相对抵抗力较强,可出现亚临床感染•野猪与家猪接触是重要的传染途径•妊娠母猪感染后可导致胎儿感染、流产、死胎等繁殖障•野猪猎杀管控是部分地区猪瘟防控的关键措施碍重要的是,猪瘟病毒不感染人类和其他非猪科动物,这有助于限制其传播范围但这也意味着受感染的猪肉制品如果被用作饲料,可能在不知情的情况下传播疾病传播途径直接接触传播病猪与健康猪直接接触是最主要的传播方式•病猪的唾液、鼻分泌物、尿液、粪便等含有大量病毒•通过皮肤伤口、黏膜接触感染间接接触传播通过污染的物品、环境间接感染•饲料、饮水、运输工具、饲养用具等•人员衣物、鞋帽可携带病毒垂直传播母猪感染后通过胎盘传染给胎儿•可导致流产、死胎、畸形•幸存仔猪可能成为病毒持续携带者长距离传播通过长途运输猪只和猪肉制品传播•生猪调运是区域间传播的主要途径•污染的猪肉制品可跨国传播传播媒介各种传播媒介在猪瘟流行中扮演着重要角色污染的饲料和水是主要的间接传播媒介,特别是含有未经充分处理的餐厨垃圾和肉制品的饲料养猪场之间共用的运输车辆如果未经严格消毒,可在短时间内将病毒传播到多个养殖场工作人员的衣物、鞋帽和工具也是重要的传播媒介研究表明,在适宜条件下,病毒可在工作服上存活数日,在靴子上存活数周因此,严格的人员和车辆消毒措施是防控猪瘟的关键环节地理分布欧洲亚洲南美洲北美洲非洲大洋洲季节性潜伏期自然感染潜伏期1猪瘟的潜伏期一般为4-10天,平均为7天不同毒株、不同感染途径和不同个体状况可导致潜伏期长短不一影响因素2病毒毒力强毒株潜伏期短(2-6天),弱毒株潜伏期长(可达2-3周);感染剂量剂量大潜伏期短;宿主因素年龄小、体质弱、免疫力低的个体潜伏期短潜伏期传染性3猪在潜伏期末期即可排毒,具有一定传染性临床症状出现前1-2天开始排毒,增加了早期发现和隔离的难度防疫意义4潜伏期长短影响隔离观察时间的确定新引进猪只的隔离观察期不应少于21天,以确保充分覆盖最长潜伏期第四部分发病机理病毒入侵淋巴组织增殖全身播散猪瘟病毒主要通过口鼻腔黏膜或皮肤伤病毒在局部淋巴结大量复制,引起淋巴通过血液循环扩散至全身,侵犯多个靶口进入机体,首先感染上皮细胞和淋巴细胞坏死和淋巴结肿大器官,引起血管内皮损伤和免疫功能障细胞碍猪瘟病毒的致病过程是一个复杂的病理生理过程,涉及病毒复制、免疫抑制、炎症反应和凝血功能障碍等多种机制深入了解这些机制有助于开发新的防控策略和治疗方法病毒入侵途径口鼻腔黏膜皮肤伤口主要入侵途径,通过污染的饲料、水通过咬伤、注射、手术等造成的皮肤和直接接触传播破损进入胎盘结膜母猪感染后通过胎盘屏障传给胎儿通过眼部接触污染物引起感染猪瘟病毒入侵机体后,首先感染黏膜上皮细胞和黏膜下淋巴组织中的巨噬细胞病毒可以通过细胞间接触或通过被感染的单核细胞和淋巴细胞迁移到更深层次的淋巴组织,如扁桃体和区域淋巴结病毒进入细胞的过程涉及其表面糖蛋白E2与宿主细胞表面受体的特异性结合研究表明,CD46是猪瘟病毒的一个重要受体,这为开发新型抗病毒药物提供了潜在靶点病毒在体内扩散入侵初期感染黏膜上皮和局部淋巴组织淋巴组织增殖在区域淋巴结大量复制血行播散通过感染单核细胞和淋巴细胞进入血液循环靶器官侵犯到达脾脏、肾脏、肺脏等靶器官并导致病变猪瘟病毒在体内扩散是一个多阶段过程感染后24-48小时内,病毒在扁桃体和区域淋巴结大量复制随后,被感染的单核细胞和淋巴细胞作为特洛伊木马携带病毒进入血液循环,引发病毒血症病毒血症期间,病毒可到达全身各器官和组织,特别是血管丰富的器官如脾脏、肾脏、肺脏和消化道黏膜在这些器官中,病毒继续复制并导致组织损伤血行播散是猪瘟全身性临床症状和病变的主要原因靶器官淋巴组织血管内皮扁桃体、淋巴结、脾脏是病毒首选靶器病毒直接感染或免疫复合物损伤血管内官皮•导致淋巴细胞坏死•引起血管通透性增加•免疫功能严重受损•导致出血和水肿中枢神经系统肾脏侵犯脑血管内皮和神经细胞肾小球和肾小管上皮损伤•引起脑炎和神经症状•出现蛋白尿•后肢麻痹和共济失调•肾功能不全免疫系统损害淋巴细胞耗竭病毒直接感染T淋巴细胞,引起大量淋巴细胞凋亡和坏死免疫功能抑制抑制B细胞功能,减少抗体产生,降低对其他病原体的抵抗力炎症风暴促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6等过度释放,导致全身炎症反应综合征猪瘟病毒对免疫系统的破坏是其致病的核心机制之一病毒直接感染T淋巴细胞、B淋巴细胞和单核-巨噬细胞系统,导致这些细胞功能障碍或死亡淋巴系统器官如胸腺、脾脏和淋巴结中的淋巴细胞显著减少,导致免疫抑制免疫抑制一方面使机体无法有效清除猪瘟病毒本身,另一方面也增加了继发感染的风险许多猪瘟感染病例最终死于继发性细菌感染,这与病毒导致的免疫功能障碍密切相关出血机制血小板减少血管内皮损伤病毒感染骨髓造血干细胞,抑制血小板生病毒直接感染血管内皮细胞成免疫复合物沉积在血管壁病毒诱导血小板聚集和消耗炎症因子导致内皮细胞损伤脾脏对血小板的捕获和破坏增加凝血功能障碍凝血因子合成减少弥散性血管内凝血(DIC)肝脏损伤影响凝血因子产生出血是猪瘟最显著的临床和病理特征之一,尤其在急性感染中更为明显猪瘟引起的出血是多种机制共同作用的结果病毒感染骨髓,抑制血小板前体细胞增殖,同时促进血小板聚集和消耗,导致血小板减少症此外,血管内皮细胞损伤增加了血管通透性,与凝血功能障碍一起,导致多器官、多系统的出血表现在重症病例中,可发展为弥散性血管内凝血(DIC),进一步加重出血症状第五部分临床症状慢性型病程长,症状反复,生长受阻亚急性型症状中等,间歇性发热,病程1-3周急性型高热、出血、神经症状,病程短猪瘟的临床表现多种多样,根据病毒毒力、猪只年龄、健康状况和免疫水平的不同,可表现为急性、亚急性、慢性或先天性感染等不同类型临床症状的多样性增加了诊断的难度,需要结合流行病学、实验室检测等进行综合判断近年来,随着弱毒力毒株的增多和群体免疫水平的提高,非典型和轻型病例增多,给临床识别带来了新的挑战掌握各型猪瘟的临床特点,对及早发现和控制疫情具有重要意义急性型初期症状(天)1-31突然高热(41-42℃),食欲减退,精神沉郁,聚群取暖,眼睑和结膜充血中期症状(天)4-7便秘继之腹泻,眼鼻分泌物增多,皮肤发红或紫斑,特别是耳、腹、四肢内侧后期症状(天)8-10神经症状明显,共济失调,后躯麻痹,震颤,行走踉跄,体温下降终末期(天)10-20体温降至正常或以下,四肢无力,侧卧,昏迷,死亡急性猪瘟是最常见的临床类型,多见于幼龄猪或免疫力低下的群体感染强毒株后,病程发展迅速,从发病到死亡一般在7-10天内完成群体发病率和死亡率均可高达100%亚急性型临床特点特征性表现亚急性猪瘟的临床症状与急性型类皮肤出血点是亚急性型的典型表现,似,但严重程度较轻,病程更长,主要出现在耳、腹部、内股、尾根一般持续2-4周等部位表现为间歇性发热,体温波动在可出现轻度到中度的腹泻,但不像40-41℃之间,食欲减退但不完全急性型那样严重神经症状相对较消失,精神状态时好时坏轻,主要表现为行走不稳预后亚急性型的病死率一般在30-70%之间,部分猪只可能在2-3周后康复,但也可能转为慢性型康复后的猪只生长发育受到影响,易继发其他疾病,且可能成为病毒携带者亚急性猪瘟多由中等毒力毒株感染或具有部分免疫力的猪只感染强毒株所致此类型在临床上容易与其他猪病混淆,需通过实验室检测进行确诊慢性型病程特点生长发育受阻慢性猪瘟病程可长达1-3个月,表现为反复发热和间歇性康复,最终生长迟缓明显,即使采食正常也不增重,俗称僵猪皮毛粗乱无多死于继发感染或衰竭光泽,背弓,被毛竖立间歇性临床症状继发感染反复低热,周期性腹泻与便秘交替,皮肤可出现散在性紫斑,部分免疫功能低下导致继发细菌性肺炎、肠炎等感染,是导致死亡的主病例出现角膜炎和结膜炎要原因慢性猪瘟多由弱毒力毒株感染或强毒株感染后存活的猪只转化而来这类猪只常成为病毒携带者,在养殖场中潜伏,对猪群健康构成长期威胁慢性病例的识别和处理对控制疫情蔓延至关重要先天性感染怀孕早期感染(天)怀孕中期感染(天)怀孕晚期感染(天以后)1-3535-7070妊娠早期母猪感染猪瘟病毒,通常导妊娠中期感染最常见的结果是流产、妊娠晚期感染可能产下弱仔、死亡仔致胚胎死亡和吸收,表现为不发情或死胎或木乃伊胎,此阶段胎儿免疫系猪或持续感染的仔猪这些持续感染假妊娠统尚未发育完全的仔猪尤为危险,它们可能表现正常但持续排毒一些病例可能出现流产,但在早期往有时可观察到畸形胎儿,主要表现为往难以察觉,仅表现为母猪短暂的食生长发育不良和先天性畸形,如小眼这些病毒持续感染者通常生长缓慢,欲不振和轻微发热球、水脑、四肢弯曲等抵抗力弱,最终发展为慢性型猪瘟并死亡,但在此过程中持续向环境排
1.受精卵发育停止
1.流产或早产毒,成为重要的传染源
2.胚胎死亡和吸收
2.死胎或木乃伊胎
1.弱仔或死亡仔猪
3.假妊娠现象
3.胎儿畸形
2.先天性持续感染
3.出生后迟发性猪瘟第六部分病理变化淋巴系统病变脾脏梗死肾脏点状出血淋巴结肿大出血,呈暗红色或大理石样脾边缘的梗死灶是猪瘟的特征性病变,肾表面和切面可见密布的针尖大小出血花纹,是猪瘟最特征性的病理变化呈现黑色或深红色隆起区域点,被称为火鸡蛋样改变猪瘟的病理变化主要是出血性和坏死性改变,涉及多个系统和器官了解这些特征性病变有助于尸检诊断和与其他疾病的鉴别病理学检查是猪瘟诊断的重要环节,特别是在实验室检测条件有限的地区肉眼病变器官系统主要病变特征性表现淋巴系统出血性淋巴结炎淋巴结肿大、出血、大理石样花纹脾脏边缘梗死脾边缘的黑色或暗红色梗死灶肾脏点状出血皮质表面和切面密布针尖大小出血点膀胱出血性膀胱炎膀胱黏膜弥漫性或斑片状出血消化道出血性肠炎肠黏膜出血、溃疡、坏死喉头会厌出血会厌软骨边缘出血猪瘟的肉眼病变在不同病例之间存在一定差异,但某些特征性病变如淋巴结出血性肿大、脾梗死、肾点状出血等具有重要诊断价值急性型病例的病变更为明显,而慢性型病例的病变可能不典型此外,在胆囊壁可见出血或渗出性水肿,肺部可有间质性肺炎和支气管肺炎的表现,胃黏膜可见出血性胃炎,尤其是幽门区更为明显这些病变共同构成了猪瘟的病理学诊断依据组织病理学变化病毒感染病毒侵入血管内皮细胞和淋巴组织细胞损伤引起细胞变性、坏死和凋亡炎症反应单核细胞浸润和炎症因子释放血管损伤血管内皮受损,通透性增加,导致出血在显微镜下,猪瘟的组织病理学变化主要表现为血管病变和淋巴组织损伤血管病变包括内皮细胞肿胀、坏死,血管周围炎症细胞浸润,以及血管壁纤维素样变性等这些改变导致血管通透性增加,引起组织水肿和出血淋巴组织的损伤表现为淋巴细胞耗竭和坏死,淋巴滤泡结构破坏在淋巴结、脾脏、扁桃体等淋巴器官中,可见到大量淋巴细胞减少和坏死,巨噬细胞增生,以及微血管血栓形成这些变化反映了猪瘟病毒对免疫系统的严重破坏特征性病变猪瘟的几种特征性病变在诊断中具有重要价值,其中最具代表性的是脾脏边缘梗死、肾脏点状出血(火鸡蛋样改变)和淋巴结的出血性肿大这些病变在急性猪瘟中尤为明显,被视为猪瘟的三大典型病变其他特征性病变还包括膀胱黏膜的出血(特别是三角区)、会厌软骨边缘的出血、大肠黏膜纽扣状溃疡等这些病变的组合出现往往高度提示猪瘟感染,但确诊仍需结合流行病学和实验室检测结果值得注意的是,在慢性感染或病死率低的情况下,这些典型病变可能不明显第七部分诊断确诊病毒分离和核酸检测确认辅助诊断血清学检测和病理学诊断初步诊断临床症状和流行病学调查猪瘟的诊断需要综合考虑流行病学资料、临床症状、病理变化和实验室检测结果由于其临床表现和病理变化与其他猪病(特别是非洲猪瘟)有相似之处,准确诊断尤为重要实验室诊断方法包括病毒分离、病毒抗原检测、核酸检测和血清学检测等其中PCR检测因其敏感性高、特异性好、操作简便而被广泛应用于猪瘟的早期诊断合理选择和综合运用各种诊断方法,是提高猪瘟诊断准确性的关键临床诊断流行病学调查调查疫区情况、免疫史、引进猪只情况、接触史等,评估感染风险仔细记录发病时间、发病数量、死亡情况等流行特点临床检查观察体温变化、精神状态、食欲、皮肤变化等重点检查皮肤紫斑、耳尖发绀、眼结膜充血等特征性表现发病情况分析分析发病率、死亡率、病程进展等参数猪瘟通常表现为高发病率、高死亡率,尤其在幼龄猪中更为明显临床记录详细记录治疗反应、病情进展等信息猪瘟对抗生素治疗反应差,这是与细菌性疾病鉴别的重要依据临床诊断是猪瘟诊断的第一步,也是现场初筛的重要手段典型病例表现为高热、皮肤紫斑、神经症状和高死亡率等特征然而,随着弱毒力毒株的增多和免疫水平的提高,非典型病例增加,临床诊断变得更加困难,需要结合其他诊断方法进行确认实验室诊断方法病毒分离核酸检测使用PK-15细胞分离培养病毒,结合1RT-PCR是最常用的早期诊断方法,敏免疫荧光检测2感性高血清学检测抗原检测检测特异性抗体,适用于流行病学调免疫组织化学和抗原捕获ELISA检测病查毒抗原核酸检测特别是RT-PCR是猪瘟实验室诊断的首选方法,因其敏感性高、特异性好、检测速度快常用样品包括抗凝血、扁桃体、淋巴结、脾脏等实时荧光RT-PCR可在2-3小时内完成检测,为早期诊断提供了可能病毒分离虽然是传统的金标准,但需要专业设备和技术,且耗时较长(通常需要3-5天),主要用于参考实验室确诊和毒株分离抗原检测方法如免疫组织化学和抗原捕获ELISA可直接检测组织中的病毒抗原,是尸检诊断的有效补充血清学检测酶联免疫吸附试验中和试验ELISAELISA是最常用的血清学检测方法,可批量进行抗体水平检中和试验是检测功能性抗体的经典方法,包括测主要有两种类型
1.荧光抗体中和试验FAVN
1.抗体检测ELISA检测血清中对E2或Erns蛋白的抗体
2.微量组织培养中和试验NPLA
2.抗原检测ELISA直接检测样品中的病毒抗原中和试验直接评估血清抗体对活病毒的中和能力,特异性最ELISA操作简便、敏感性高、特异性好,是群体免疫监测的高,是确认诊断和参考实验室的首选方法但操作复杂,需首选方法抗体ELISA可用于区分感染抗体和疫苗抗体,有要活病毒和细胞培养设施,不适合常规筛查助于疫情监测中和试验结果与保护力相关性最好,是评估疫苗效力的重要指标血清学检测在猪瘟的群体免疫监测、疫苗效果评估和流行病学调查中发挥着重要作用然而,由于疫苗接种会干扰血清学检测结果,解释时需结合免疫史和临床表现病理学诊断尸检准备选择典型病例,最好是急性死亡或临死前安乐死的病猪准备好防护装备、消毒设施和取样工具,在隔离区域进行尸检系统检查按照标准程序系统检查各器官系统,重点关注皮肤、淋巴结、脾脏、肾脏、膀胱、消化道等详细记录所有异常发现,拍照存档样品采集采集扁桃体、淋巴结、脾脏、肾脏等器官,分为两份一份放入10%福尔马林中固定,用于组织病理学检查;另一份冷藏或冰冻,用于病毒检测组织病理学检查制作组织切片,通过HE染色和免疫组织化学染色观察微观病变重点观察淋巴组织坏死、血管内皮变性和器官的特征性病变病理学诊断是猪瘟诊断的重要组成部分,特别是在现场条件下典型的病理变化如淋巴结出血性肿大、脾梗死、肾点状出血等具有很高的诊断价值然而,由于病理变化受多种因素影响,单凭病理学检查难以确诊,通常需要结合实验室检测鉴别诊断疾病相似点鉴别要点非洲猪瘟高热、皮肤紫斑、高死亡率非洲猪瘟脾脏显著肿大变黑,淋巴结更似血肿,PCR可明确区分猪繁殖与呼吸综合征生殖障碍、呼吸道症状PRRS很少出现皮肤紫斑,淋巴结病变不典型猪链球菌病发热、神经症状链球菌病对青霉素敏感,无特征性的淋巴结和脾脏病变猪丹毒皮肤红斑、关节炎猪丹毒皮肤呈典型菱形或方形红斑,可分离细菌猪肺疫高热、呼吸困难肺疫以肺部病变为主,无出血性病变鉴别诊断是猪瘟诊断的关键环节,特别是与非洲猪瘟的鉴别这两种疾病在临床症状和病理变化上有诸多相似之处,但病原学完全不同非洲猪瘟由非洲猪瘟病毒(属于阿斯法病毒科)引起,而猪瘟由猪瘟病毒(属于披盖病毒科)引起在实际工作中,应建立完善的实验室诊断网络,配备PCR等分子诊断技术,确保能够准确区分猪瘟和其他相似疾病这对于采取针对性的防控措施至关重要第八部分防控措施疫苗免疫生物安全监测与报告扑杀与净化科学制定免疫程序,提严格执行消毒隔离措建立健全监测网络,及发现疫情及时扑杀,彻高群体免疫水平施,阻断传播途径时发现和处置疫情底消除传染源猪瘟的防控需要综合采取多种措施,形成完整的防控体系疫苗免疫是预防控制的基础,而生物安全措施是阻断传播的关键监测、报告和应急处置机制则确保疫情得到及时有效处理不同国家和地区根据猪瘟流行情况和经济条件,采取不同的防控策略猪瘟清除区通常采取严格的进口限制和监测措施;流行区则以疫苗免疫和生物安全为主要手段无论采取何种策略,都需要政府、行业和养殖者的共同参与疫苗免疫传统活疫苗基因缺失疫苗基于兔化弱毒C株或细胞适应株(如HCLV株)通过基因工程技术,删除毒力相关基因优点免疫效果好,保护期长(可达6-12个优点安全性更高,可区分感染与免疫月)缺点生产成本高,免疫效果可能略低缺点有一定的残余毒力,可能引起免疫抑制亚单位疫苗主要基于E2蛋白或其他抗原表位优点安全性最高,不含活病毒缺点免疫效果较差,需要多次接种目前,中国主要使用的是兔化弱毒苗(C株)和细胞源弱毒苗(HCLV株)这些传统疫苗免疫效果好,但无法区分疫苗抗体和野毒感染抗体,不利于净化工作新型标记疫苗如E2缺失疫苗虽然可以区分,但生产成本高,应用有限疫苗选择应根据疫区情况、养殖规模和经济条件综合考虑在高风险地区,推荐使用传统活疫苗;在低风险地区或净化阶段,可考虑使用标记疫苗正确的疫苗接种是猪瘟防控的基础措施免疫程序仔猪免疫首免30-45日龄,此时母源抗体基本消失二免首免后4周进行加强免疫后备母猪免疫入场隔离期首次接种配种前3-4周加强免疫经产母猪免疫每胎断奶后或配种前2-4周免疫全群每6个月全群强制免疫一次种公猪免疫常规每6个月免疫一次高风险区每4个月免疫一次科学合理的免疫程序是猪瘟防控的关键制定免疫程序时应考虑多种因素,包括母源抗体干扰、生产周期、疫区流行情况等母源抗体对仔猪免疫有明显干扰,因此仔猪首免时间应在母源抗体消失后生物安全措施人员管理选址与规划严格控制外来人员进入场址远离其他猪场、屠宰场和交通要道工作人员洗澡更衣,专人专岗合理规划生产区、生活区和隔离区车辆控制运输车辆严格消毒设立车辆消毒通道和轮胎消毒池消毒措施引种管理定期全面消毒从无疫区引种使用有效消毒剂(碱、含氯制剂等)新猪严格隔离观察21-30天饲养管理科学饲喂提供营养全面、易消化的饲料,严禁使用餐厨垃圾或未经高温处理的动物性饲料定时定量投喂,保持饲槽清洁环境控制根据不同生长阶段调整温度、湿度和通风条件冬季保温防寒,夏季降温防暑,确保适宜的生长环境清洁卫生定期清扫猪舍,及时清除粪便,保持干燥定期进行全面清洗和消毒,减少病原微生物积累密度控制合理控制饲养密度,避免过度拥挤按年龄、体重和生理阶段分群饲养,减少应激和交叉感染科学的饲养管理是提高猪群整体健康水平和抵抗力的基础良好的饲养条件可以减少应激,增强免疫力,降低猪瘟等疾病的发病风险特别是对于仔猪和妊娠母猪,更需要精细管理,避免免疫力下降饲料安全是猪瘟防控的关键环节猪瘟病毒可通过污染的猪肉和猪肉制品传播,因此严禁使用未经高温处理的餐厨垃圾或肉类下脚料饲喂猪只饲料原料应来自安全来源,并进行适当的热处理检疫隔离新猪引进隔离疑似病例隔离新引进的猪只是猪瘟传入的主要风险因素之一严格的隔离及时发现并隔离疑似病例,是控制疫情扩散的关键措施一检疫制度是防止病毒传入的关键措施旦发现可疑症状,应立即采取行动•设立专门的隔离舍,位置应远离主场区•设立病猪隔离区,远离健康猪群•隔离期不少于30天,期间不得与场内猪只接触•疑似病猪立即转移至隔离区单独饲养•进行临床观察和必要的实验室检测•隔离区应有严格的消毒措施和进出管理•安排专人饲养,遵循单向流动原则•专人负责,最后处理,避免交叉感染•隔离期满无异常后才能转入生产区•采集样本送检,确定诊断后采取相应措施•隔离区使用后彻底清洗消毒疫情报告系统养殖场发现养殖者发现可疑症状,立即报告基层单位初筛乡镇兽医站进行初步诊断和样品采集县级实验室检测县级动物疫病预防控制中心进行实验室检测上级确认市级或省级实验室确认诊断结果国家通报重大疫情由国家向OIE通报及时、准确的疫情报告是有效控制猪瘟疫情的基础我国建立了从养殖场到国家级的多级动物疫病报告网络猪瘟作为一类动物疫病,一旦发现疑似病例,必须立即上报,任何单位和个人不得瞒报、谎报、迟报或阻碍他人报告信息化手段的运用极大提高了疫情报告的效率目前,移动终端报告、在线数据分析等技术已广泛应用于疫情监测和报告系统中,实现了疫情信息的实时共享和快速响应扑杀和无害化处理疫情确认实验室确诊猪瘟后,依法宣布疫区,启动应急预案,组织专业队伍进行扑杀和无害化处理范围确定确定扑杀范围,一般包括确诊病例和同群接触猪严重疫情可能需要扑杀疫点所有猪只人道扑杀采用电击、二氧化碳或注射巴比妥类药物等人道方式,减少动物痛苦操作人员需穿戴防护装备无害化处理猪尸体通过深埋、焚烧或化制等方式进行无害化处理,防止病毒扩散埋坑深度不少于2米,距地下水源不少于50米环境消毒对疫点进行彻底清洗和消毒,使用有效的消毒剂如10%氢氧化钠、10%漂白粉等消毒时间不少于21天第九部分治疗对症治疗目前没有特效抗病毒药物,主要采取对症治疗中药治疗传统中医药在猪瘟治疗中有一定效果免疫增强使用免疫增强剂提高机体抵抗力治疗限制法律法规可能限制某些疫区的治疗行为需要特别强调的是,猪瘟作为一类动物疫病,在许多国家和地区的法律规定中,确诊病例必须扑杀,而非治疗治疗措施主要适用于疑似病例、轻症病例或特殊情况治疗过程中必须严格隔离,防止病毒传播虽然一些治疗方法可能对部分猪只有效,但从整体防控策略来看,及时扑杀和无害化处理仍是控制疫情最有效的方法治疗可能导致病毒继续排毒和传播,增加疫情控制难度对症治疗症状治疗方法用药选择高热物理降温与药物退热对乙酰氨基酚、布洛芬脱水补液治疗生理盐水、葡萄糖盐水继发感染抗生素治疗青霉素、头孢类、恩诺沙星出血止血药物维生素K、止血敏心力衰竭强心药物地高辛、多巴胺对症治疗是猪瘟治疗的主要手段,目的是缓解临床症状,支持重要脏器功能,增强机体抵抗力,为免疫系统抵抗病毒争取时间高热是猪瘟最常见的症状,可采用物理降温(冷水淋浴、冰袋敷额)和药物退热相结合的方法继发感染是猪瘟死亡的重要原因,应根据病情选择适当的广谱抗生素重症病例常出现脱水和电解质紊乱,应及时进行静脉或腹腔补液出血倾向明显的病例可使用维生素K和止血药物然而,需要注意的是,对症治疗效果有限,特别是在急性型猪瘟中中医中药治疗清热解毒类方剂活血化瘀类方剂猪瘟属于中医温疫、瘟毒范畴,具有热毒炽盛的特猪瘟后期常见血瘀证表现,表现为皮肤紫斑、黏膜出血等,点,因此清热解毒是基本治则需活血化瘀、凉血止血常用方剂常用方剂•板蓝根复方板蓝根、黄芩、黄连、连翘等•活血化瘀汤丹参、赤芍、川芎、桃仁等•清瘟败毒饮金银花、连翘、黄芩、栀子等•凉血止血方生地、白茅根、侧柏叶、炒蒲黄等•猪瘟清热解毒散黄芩、黄连、黄柏、连翘等•复方三七粉
三七、茜草、白茅根等这类方剂主要用于急性期高热、出血症状明显的病例这类方剂主要用于出血症状明显、皮肤紫斑的病例中医中药治疗猪瘟有一定历史经验,具有整体调节、多靶点作用的特点现代研究表明,某些中药成分具有抗病毒、增强免疫、抗炎和保护脏器的作用然而,中药治疗效果个体差异大,需要根据具体症状辨证施治免疫增强剂使用时机早期感染疫病高发季节前预防性使用疑似病例和接触猪的早期干预康复期易感群体病后恢复阶段增强体质仔猪断奶、转群等应激期使用免疫增强剂在猪瘟的预防和辅助治疗中有一定作用,主要通过增强非特异性免疫功能,提高机体抵抗力常用的免疫增强剂包括细菌多糖类(如β-葡聚糖、脂多糖)、免疫调节剂(如胸腺素、干扰素)、中草药提取物(如黄芪多糖、金银花提取物)等特别是在猪瘟疫苗接种前后使用免疫增强剂,可能提高疫苗免疫效果然而,免疫增强剂不能代替疫苗,只能作为辅助手段此外,过度使用或不当使用免疫增强剂可能导致免疫紊乱,应在专业指导下合理使用第十部分预防疫苗接种环境控制饲料安全科学合理的免疫接种是猪瘟预防的核心优化饲养环境,控制温湿度,减少应激确保饲料来源可靠,避免使用餐厨垃措施,能有效提高群体免疫水平因素,提高猪群整体抵抗力圾,防止通过饲料传入病毒猪瘟的预防需要综合考虑免疫接种、环境控制、饲料安全、生物安全等多方面因素与治疗相比,预防措施更加经济有效科学的预防策略应根据当地猪瘟流行情况、养殖模式和经济条件制定,并随疫情变化及时调整疫苗接种策略保护效力安全性成本饲养环境改善通风系统优化温湿度控制通风系统是猪舍环境控制的核心,影响适宜的温湿度是猪生长和健康的基础,空气质量、温湿度和有害气体浓度不同生长阶段对温度要求不同现代猪舍应采用机械通风系统,夏季可仔猪需要较高温度(28-32℃),生长使用负压通风,冬季可使用正压通风猪适宜温度为18-22℃,母猪为16-20℃通风设计应考虑不同季节和不同生长阶段猪只的需求,避免通风死角相对湿度应控制在50-70%,过高或过低都会增加疾病风险饲养密度控制合理的饲养密度可减少应激和疾病传播风险,提高生产效率不同体重猪的适宜饲养密度30kg以下每平方米不超过3头,30-60kg每平方米不超过
2.5头,60kg以上每平方米不超过2头过度拥挤会导致竞争加剧、应激增加、免疫力下降,增加疾病传播风险良好的饲养环境是猪群健康的基础,也是猪瘟防控的重要环节环境因素如温度、湿度、通风、密度等直接影响猪只的生理功能和免疫状态改善饲养环境,不仅可以提高生产性能,还能增强猪只抵抗力,降低包括猪瘟在内的各种疾病风险饲料安全饲料安全是猪瘟防控的重要环节,尤其是避免使用含有猪肉制品的未经处理的餐厨垃圾猪瘟病毒可在猪肉和猪肉制品中长期存活,特别是在冷冻条件下因此,原料检测和热处理是确保饲料安全的关键措施饲料原料应来自安全可靠的来源,进厂前进行检验检疫含有动物蛋白的原料应进行至少80℃持续30分钟以上的热处理,确保病毒灭活此外,添加适量的抗氧化剂、有机酸等添加剂,可以改善饲料适口性和消化率,增强猪只免疫功能,间接降低猪瘟感染风险国际合作信息共享联合研究技术援助建立全球猪瘟监测网络,及开展跨国科研合作,共同研发达国家向欠发达地区提供时共享疫情信息、毒株特性发新型疫苗、诊断技术和防技术支持和培训,提高全球和防控经验控策略防控能力贸易监管制定科学的国际贸易标准和检疫规程,防止疫病跨境传播猪瘟防控是一个全球性挑战,需要国际社会共同努力世界动物卫生组织OIE、联合国粮农组织FAO等国际组织在协调全球猪瘟防控方面发挥着重要作用这些组织制定国际标准,组织专家会议,协调多国联合行动,促进猪瘟防控知识和技术的全球共享中国作为全球最大的生猪养殖国,在猪瘟防控国际合作中扮演着重要角色近年来,中国不仅积极参与国际防控合作,还向其他发展中国家提供技术援助和培训通过加强国际合作,共同应对猪瘟挑战,是实现全球猪瘟控制甚至消灭的必由之路总结与展望未来目标全球猪瘟清除与消灭技术发展2分子诊断、标记疫苗、抗病毒药物研究进展病毒结构、致病机理、免疫反应更深入理解猪瘟作为一种历史悠久且危害严重的猪传染病,经过科学家们一个多世纪的研究,我们对其病原学特性、流行规律、致病机理和防控措施有了全面深入的认识有效的疫苗和严格的生物安全措施已使许多国家和地区成功控制甚至根除了猪瘟展望未来,随着分子生物学、免疫学和疫苗学的发展,猪瘟防控将迎来新的技术革新新一代标记疫苗、快速诊断技术、特异性抗病毒药物的研发,以及智能化监测预警系统的应用,将进一步提高猪瘟防控的科学性和有效性,为全球猪瘟控制和最终消灭提供有力支持。
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