《生物化学实验室检测技术》课件

《生物化学实验室检测技术》课件PPT欢来验检测术课课为迎到《生物化学实室技》的程！本程旨在学生提供生物验检测术识践过课习将化学实室技的全面知和实技能通本程的学，学生掌检测质临应为握各种生物化学的基本原理、操作方法、量控制以及床用，未来临坚础的科研和床工作打下实的基课程简介与目标课程简介课程目标课绍验检测术验维本程系统介生物化学实室常用技，涵盖仪器设备的•掌握生物化学实室常用仪器设备的使用与护质测临检检测使用、溶液的配制、蛋白定量、酶活性定、床生物化学•熟悉各种生物化学的基本原理和操作方法测术内课论践结检测质临应以及分子生物学技等容程注重理与实相合，通过验问题•了解生物化学的量控制和床用实操作和案例分析，提高学生的实际操作能力和解决的养验维•培学生的实操作技能和科学思能力能力生物化学检测的重要性疾病诊断疗效评估健康管理123检测诊断检测评疗检测生物化学是疾病的重要手生物化学可以用于估治效生物化学可以用于健康管理过检测过检测过检测标段通血液、尿液等生物样果通定期患者的生物化学通定期身体的生物化学指标标疗状本中的各种指，可以帮助医生了指，可以了解治是否有效，并，可以了解自身的健康况，从而状进时调疗应预解患者的身体况，从而行准确及整治方案采取相的健康管理措施，防疾诊断疗的和治病的发生实验室安全规则着装规范进验须验镜时进入实室必穿着实服，佩戴防护眼，必要戴手套禁止穿拖鞋、凉鞋入实验室实验操作规范严验规进验数问时导师格按照实操作程行操作，禁止随意更改实参如有疑，及向指老请教化学品安全质项蚀时须熟悉各种化学品的性和安全注意事使用腐性、毒性化学品，必在通风橱中进废弃须倾行操作化学品必分类收集，不得随意倒仪器设备安全细阅读说书过使用仪器设备前，仔使用明，了解仪器的性能和操作方法使用程中，如导师报有异常情况，立即停止使用，并向指老告常用仪器设备介绍离心机转速温度时间转时验离心机速是衡量离心离心机温度可以控制，离心间根据实需要标转时过效果的重要指速用于保护样品低温离设定间短，分离质时过越高，离心力越大，分心可以防止蛋白变性效果不好；间长，损伤离效果越好可能样品离心机的使用与维护准备1检选择转查离心管是否完好，配平离心管重量合适的头和转速操作2将转转时离心管放入头，盖好离心机盖，设置速和间，启动离心机维护3内转检转损伤定期清洁离心机腔和头，查头是否有如有异时维常，及修常用仪器设备介绍分光光度计原理计质对进质分光光度利用物光的吸收特性行定量分析不同物对选择不同波长的光有性吸收用途计应环领分光光度广泛用于生物化学、医学、境科学等域，用测质浓纯于定物的度、度等类型计为计荧计分光光度分紫外可见分光光度、光分光光度等不计同类型的分光光度适用于不同的分析需求分光光度计的使用与维护准备校准1开计预热选计打分光光度电源，30分钟使用空白溶液校准分光光度，确保仪2择读数合适的波长和比色皿器的准确性维护测量43将定期清洁比色皿和仪器表面，保持仪器样品溶液放入比色皿，放入分光光度时维计读的清洁和干燥如有异常，及修，取吸光度值常用仪器设备介绍计pH电极1计测氢浓pH的核心部件是pH电极，用于量溶液中的离子度校准2计测结标缓进pH需要定期校准，以确保量果的准确性常用准冲溶液行校准读数3计读pH可以直接取溶液的pH值，方便快捷计的使用与维护pH准备1开计预热标缓打pH电源，30分钟准备准冲溶液校准2标缓计读数使用准冲溶液校准pH，确保仪器的准确性测量3将读pH电极插入样品溶液，取pH值常用仪器设备介绍电泳仪压电V电流mA质为压数验进调电泳仪是用于分离和分析生物大分子的仪器根据电泳介的不同，分琼脂糖凝胶电泳仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳仪电和电流是电泳的重要参，需要根据实需要行整较压质则较压DNA电泳通常使用低的电和电流，而蛋白电泳需要高的电和电流电泳仪的使用与维护准备凝胶上样电泳验将缓压根据实需要，配制合适的凝胶琼脂糖样品与上样冲液混合，加入凝胶的样设置合适的电和电流，启动电泳仪电过观进凝胶用于DNA电泳，聚丙烯酰胺凝胶用于品孔中泳程中，察电泳程质蛋白电泳溶液的配制与浓度计算溶液配制浓度计算验础质浓计环节浓单溶液的配制是生物化学实的基常用的溶液配制方法有量溶液的度算是溶液配制的重要常用的度位有摩尔浓积浓验选择浓质浓验选择浓单摩尔度法和体摩尔度法需要根据实需要合适的配度、量百分比度等需要根据实需要合适的度制方法位缓冲溶液的原理与应用原理应用选择123缓缓应验选择缓时虑缓冲溶液是指能够抵抗外界酸碱干冲溶液广泛用于生物化学实冲溶液，需要考冲范维对稳维应稳围对应扰，持溶液pH值相定的溶液中，用于持反体系的pH值定、离子强度、反的影响等因缓轭证验进缓验选择冲溶液由弱酸及其共碱或弱，保实的正常行常用的素需要根据实需要合适的轭组缓缓缓碱及其共酸成冲溶液有磷酸冲液、Tris冲液冲溶液等蛋白质定量方法考马斯亮蓝法原理优点缺点蓝质蓝简单蓝较考马斯亮法是一种常用的蛋白定考马斯亮法操作、灵敏度高、考马斯亮法受干扰因素多，需要蓝质结数质验质显量方法考马斯亮染料与蛋白快速适用于大多蛋白的定量注意实条件不同蛋白的色程产颜过测标线进合后，生色变化，通量吸光度不同，需要使用准曲行定量质度值，可以定量蛋白的含量蛋白质定量方法法Lowry灵敏度时间干扰骤较较Lowry法是一种灵敏度Lowry法操作步多Lowry法受干扰因素较质时较严还剂剂高的蛋白定量方法，耗长需要格多，如原、去污浓质规进验适用于低度蛋白按照操作程行操作等需要注意实条件的定量蛋白质定量方法法BCA原理1质试剂质结BCA法是一种常用的蛋白定量方法BCA与蛋白产颜过测质合后，生色变化，通量吸光度值，可以定量蛋白的含量优点2较较数质BCA法受干扰因素少，灵敏度高适用于大多蛋白的定量缺点3骤较时较标线进BCA法操作步多，耗长需要使用准曲行定量酶活性测定原理原理应测过测酶活性是指酶催化反的能力酶活性定是通量酶催化应来评反的速率估酶的活性的方法影响因素浓浓酶活性受多种因素影响，如温度、pH值、底物度、酶度验证测等需要控制实条件，保酶活性的准确定单位单单酶活性的位通常用国际位（IU）表示1IU是指在一定条转件下，每分钟催化1微摩尔底物化的酶量酶活性测定方法连续监测法优点2连续监测时监测应进法可以实反程，操简单原理作、快速1连续监测应过法是指在酶催化反程中，连续监测应产计反物或物的变化，从而缺点算酶活性的方法连续监测法需要使用特殊仪器，如分光计荧计3光度、光分光光度等适用于反应产显质物或物具有明光学性的酶酶活性测定方法不连续监测法原理连续监测应过时终应测1不法是指在酶催化反程中，在不同间点取样，止反，然后量反应产计物或物的含量，从而算酶活性的方法优点2连续监测不法适用于各种酶，不需要特殊仪器缺点3连续监测骤较时较严验不法操作步多，耗长需要格控制实条证结件，保果的准确性血清酶学检测、ALT ASTALT1转细细损伤ALT是丙氨酸氨基移酶，主要存在于肝胞中ALT升高提示肝胞AST2转细细细AST是天冬氨酸氨基移酶，主要存在于肝胞和心肌胞中AST升高提示肝胞细损伤或心肌胞比值3断脏损伤ALT/AST比值可以帮助判肝的类型比值升高提示酒精性肝病血清酶学检测、ALP GGTALP GGT脏肠积转脏损伤ALP是碱性磷酸酶，主要存在于肝、骨骼和道中ALP升高提示胆汁淤或骨骼疾病GGT是γ-谷氨酰移酶，主要存在于肝中GGT升高提示酒精性肝病或药物性肝检标诊断关肝功能查中ALP、GGT等指可帮助相疾病血糖测定原理与方法血糖仪实验室方法测简单验测血糖仪是一种常用的血糖定仪器操作、快速，适用于家实室血糖定方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法等准确度监测较临诊断庭血糖高，适用于床血糖测定质量控制室内质控室间质评内质验内进质过质进质评验进质评过质室控是指在实室部行的量控制通使用控品室间是指不同实室之间行的量价通参加室间检测评验稳质评验检测检测质质行，估实系统的定性和准确性常用的控方法有活动，了解实室的水平，提高量常用的室间图规则评卫临检验Levey-Jennings、Westgard等机构有生部床中心等血脂检测总胆固醇、甘油三酯总胆固醇甘油三酯12总胆固醇是指血液中所有脂蛋甘油三酯是血液中主要的脂类白所含胆固醇的总和总胆固成分甘油三酯升高是心血管醇升高是心血管疾病的危险因疾病和胰腺炎的危险因素素检测方法3检测检测总胆固醇和甘油三酯的方法有酶法、化学法等常用的仪器有生化分析仪血脂检测高密度脂蛋白、低密度脂蛋白高密度脂蛋白低密度脂蛋白高密度脂蛋白（HDL）是“好”低密度脂蛋白（LDL）是“坏”积胆固醇，可以清除血管壁上的胆胆固醇，容易沉在血管壁上，固醇，降低心血管疾病的风险增加心血管疾病的风险检测方法检测检测HDL和LDL的方法有直接法、间接法等常用的仪器有生化分析仪尿素测定原理与方法酶法指示剂法仪器测剂测检测尿素酶法是一种常用的尿素定方法尿指示法是一种常用的尿素定方法通常用的仪器有生化分析仪为过测来计素在尿素酶的作用下分解氨和二氧化碳量氨的含量算尿素的含量尿素测定结果分析升高1肾损伤饮尿素升高提示功能、脱水、高蛋白食等降低2损伤饮尿素降低提示肝功能、低蛋白食、妊娠等参考范围3围为结临状尿素的正常参考范

2.8-

7.2mmol/L需要合床症进综断行合判肌酐测定原理与方法原理谢产过肾脏肌酐是肌肉代的物，主要通排泄肌酐的含量可以肾脏反映的排泄功能方法测检测肌酐的定方法有Jaffe法、酶法等常用的仪器有生化分析仪肾功能评肾标肌酐是估功能的重要指肌酐测定结果分析降低2缩肌酐降低提示肌肉萎、妊娠等升高1肾损伤损伤肌酐升高提示功能、肌肉、参考范围药物影响等围为肌酐的正常参考范44-133μmol/L结临状进综断3需要合床症行合判尿酸测定原理与方法原理谢产过肾脏谢1尿酸是嘌呤代的物，主要通排泄尿酸的含量可以反映嘌呤代的情况方法2测钨检测尿酸的定方法有尿酸酶法、磷酸法等常用的仪器有生化分析仪高尿酸3高尿酸血症是痛风的主要病因尿酸测定结果分析升高1肾损伤饮尿酸升高提示痛风、功能、高嘌呤食、药物影响等降低2遗传尿酸降低提示性疾病、药物影响等参考范围3围为尿酸的正常参考范男性202-416μmol/L，女性142-340结临状进综断μmol/L需要合床症行合判电解质检测钠、钾、氯钠钾质维细内渗压奋质检测质状检测选择、、氯是人体重要的电解，参与持胞外液的透、酸碱平衡和神经肌肉的兴性电解的可以反映人体的水、电解平衡况常用的方法有离子质测临对质乱进诊断电极法血清电解的定有助于床医生水、电解平衡紊行和处理电解质检测结果分析低钠血症高钾血症钠钠浓肾钾钾浓肾损伤低血症是指血度低于135mmol/L常见于脱水、功能高血症是指血度高于

5.5mmol/L常见于功能、药损伤严钾导、心力衰竭等物影响等重的高血症可致心律失常血气分析原理与应用原理应用过测压压应环谢血气分析是指通量血液中的pH值、氧分、二氧化碳分血气分析广泛用于呼吸系统疾病、循系统疾病、代性疾病标评谢状检测诊断疗疗等指，估人体的呼吸和代况常用的仪器有血气分的和治可以帮助医生了解患者的病情，制定合理的治析仪方案血气分析结果解读值氧分压二氧化碳分压1pH23围压压pH值反映血液的酸碱度正常范氧分反映血液中的氧气含量正二氧化碳分反映血液中的二氧化为为围为压围为

7.35-

7.45pH值低于

7.35酸常范80-100mmHg氧分碳含量正常范35-45mmHg为为压为中毒，高于

7.45碱中毒低于80mmHg低氧血症二氧化碳分高于45mmHg为呼吸性酸中毒，低于35mmHg呼吸性碱中毒肝功能检测指标及意义、、ALT ASTALPGGT细损伤细损伤积积反映肝胞程度升高提示肝胞反映胆汁淤情况升高提示胆汁淤总胆红素白蛋白脏谢脏损反映肝的代功能升高提示黄疸反映肝的合成功能降低提示肝功能受肾功能检测指标及意义尿素肌酐尿蛋白肾脏肾脏肾滤过反映的排泄功能反映的排泄功能反映小球的功能肾损伤肾损伤肾损伤升高提示功能升高提示功能升高提示小球心肌酶谱检测指标及意义CK-MB1损伤标肌酸激酶同工酶MB，是心肌的特异性指升高提示心肌梗死肌红蛋白2红损伤标损伤肌蛋白是心肌的早期指升高提示心肌肌钙蛋白3钙损伤标损伤肌蛋白是心肌的特异性指升高提示心肌免疫球蛋白检测、IgG IgA、IgMIgG免疫球蛋白G，是血清中含量最高的免疫球蛋白参与体液免疫，具有长期的保护作用IgA免疫球蛋白A，主要存在于黏膜表面参与局部免疫，抵抗病原体的入侵IgM应免疫球蛋白M，是初次免疫答的主要抗体升高提示急性感染免疫球蛋白检测结果分析降低2营养免疫球蛋白降低提示免疫缺陷病、不良等升高1免疫球蛋白升高提示感染、自身免疫性参考范围疾病、多发性骨髓瘤等围龄免疫球蛋白的正常参考范因年、性别结临状进3等因素而异需要合床症行综断合判补体检测、C3C4C31应调补体C3，是补体系统的重要成分参与免疫答，具有理、溶菌等作用C42应调补体C4，是补体系统的重要成分参与免疫答，具有理、溶菌等作用补体激活3应补体系统的激活可以增强免疫答，清除病原体补体检测结果分析升高1肿补体升高提示急性炎症、瘤等降低2补体降低提示自身免疫性疾病、免疫缺陷病等参考范围3围检测结临状进补体的正常参考范因方法而异需要合床症行综断合判细胞因子检测、IL-6TNF-α细细调节质细应细检测评状态辅胞因子是免疫胞分泌的具有免疫功能的蛋白IL-6和TNF-α是重要的促炎胞因子，参与炎症反的发生和发展胞因子可以用于估免疫系统的功能，诊断疗助疾病的和治细胞因子检测在疾病诊断中的应用脓毒症类风湿关节炎细脓脓诊断细湿关节湿关节疗胞因子升高提示毒症IL-6和TNF-α是毒症的早期指胞因子升高提示类风炎TNF-α是类风炎的治标靶点提取方法酚氯仿法DNA-原理步骤传细酚-氯仿法是一种统的DNA提取方法利用酚和氯仿的有机溶

1.胞裂解剂将质杂质，蛋白和脂类等分离，从而提取DNA

2.酚-氯仿抽提

3.乙醇沉淀

4.DNA溶解提取方法磁珠法DNA原理优点步骤123简单细磁珠法是一种快速、高效的DNA提磁珠法操作、快速、自动化程

1.胞裂解过取方法利用磁珠吸附DNA，通度高适用于高通量DNA提取

2.磁珠吸附磁力分离，从而提取DNA

3.洗涤

4.洗脱提取方法RNA法柱纯化法Trizol纯Trizol法是一种常用的RNA提取柱化法是一种快速、高效的试剂将方法利用Trizol，RNA RNA提取方法利用RNA吸附柱将分离，从而提取RNA需要注意，RNA分离，从而提取RNARNase污染适用于高通量RNA提取处理DNase进RNA提取后，需要行DNase处理，去除DNA污染原理与应用PCR变性退火延伸将链热将将双DNA加至95℃温度降低至55℃，使温度升高至72℃，使为单链单链结链，使其变性DNA引物与DNA合DNA聚合酶延伸DNA技术Real-time PCR原理1术过监测应过Real-time PCR是一种定量PCR技通PCR反荧时荧程中光信号的变化，实定量DNA的含量常用的光染针料有SYBR Green、TaqMan探等应用2应检测肿Real-time PCR广泛用于基因表达分析、病原体、诊断领瘤等域优点3Real-time PCR具有灵敏度高、特异性强、定量准确等优点凝胶电泳技术原理将质凝胶电泳是根据分子的大小和电荷，DNA、RNA或蛋白分离术的技常用的凝胶有琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶步骤

1.凝胶制备

2.样品上样

3.电泳

4.染色观

5.察应用应质鉴凝胶电泳广泛用于DNA、RNA和蛋白的分析和定蛋白质印迹（）技术Western Blot步骤

1.电泳2转

2.膜原理闭

3.封质1蛋白印迹（Western Blot）是一种

4.一抗孵育检测质过特定蛋白的免疫学方法通电

5.二抗孵育质将质转显泳分离蛋白，然后蛋白移到膜检测质

6.色上，用抗体特定蛋白应用3应质Western Blot广泛用于蛋白的表达鉴分析和定原理与应用ELISA原理试验过结检测1ELISA（酶联免疫吸附）是一种常用的免疫学方法通酶与抗体的合，抗原或抗体的含量类型2夹ELISA有多种类型，如直接ELISA、间接ELISA、心ELISA等需要根据验选择实需要合适的类型应用3应细检测ELISA广泛用于抗原、抗体、胞因子等的流式细胞术原理与应用原理1细术细过测细状荧标细流式胞是一种快速、定量地分析胞的仪器通量胞的大小、形、光强度等指，分析组胞的成和功能应用2细术应肿领流式胞广泛用于免疫学、瘤学、血液学等域指标3细术标细标细内细常用的流式胞指有胞表面志物、胞胞因子、细胞周期等质谱分析技术质谢蛋白代物脂类核酸质谱术术过测质质组结质谱术应质组谢组质组领对分析技是一种高灵敏度、高分辨率的分析技通量离子的荷比，分析物的成和构分析技广泛用于蛋白学、代学、脂学等域根据分析质谱术为质质谱谢质谱质谱质谱质谱术为象的不同，分析技可以分蛋白、代物、脂类和核酸等分析技已成生物化学研究中不可或缺的手段实验室质量控制室内质控图规则Levey-Jennings Westgard图内质过绘质规则质规则过断质结Levey-Jennings是一种常用的室控方法通制控Westgard是一套常用的控通判控果是否结趋势图断验稳规则断验果的，判实系统的定性符合Westgard，判实系统是否失控实验室质量控制室间质评目的过程质评评验检测检测质质评过质评进检测结室间的目的是估不同实室之间的水平，提高室间的程包括接收样品、行、提交果、接过质评验检测评报评报问题进量通参加室间活动，了解实室的水平，与其他实收价告根据价告，分析，制定改措施验进较现问题进室行比，发并改生物化学检测结果的临床意义疾病诊断疗效评估12检测结检测结评生物化学果可以用于疾生物化学果可以用于诊断过检测疗过检测病的通血液、尿估治效果通定期患标标液等生物样本中的各种指，者的生物化学指，可以了解疗时调可以帮助医生了解患者的身体治是否有效，并及整治状进诊断疗况，从而行准确的和方案疗治预后判断3检测结预断过检测标生物化学果可以用于后判通患者的生物化学指预测进转归，可以疾病的展和案例分析糖尿病诊断空腹血糖诊断为空腹血糖≥

7.0mmol/L，可糖尿病餐后小时血糖2时诊断为餐后2小血糖≥

11.1mmol/L，可糖尿病糖化血红蛋白红诊断为糖化血蛋白≥

6.5%，可糖尿病试验OGTT试验时诊断为口服葡萄糖耐量（OGTT）2小血糖≥

11.1mmol/L，可糖尿病案例分析肝脏疾病诊断总胆红素ALT AST细损细损红ALT升高提示肝胞AST升高提示肝胞总胆素升高提示黄疸伤伤细常见于病毒性肝炎常见于病毒性肝炎常见于肝胞性黄疸损伤损伤积、药物性肝、酒精、药物性肝、酒精、胆汁淤性黄疸、溶性肝病等性肝病等AST的升高血性黄疸等损伤程度通常与肝的程关度相。