《临床组织学切片》课件

临床组织学切片探索微观世界的临床之门课程概述课程目标掌握临床组织学切片基本理论与技术内容安排理论学习与实验操作相结合学习要求认真完成实验报告与课后练习组织学切片概述定义历史发展将生物组织制成的薄片标本，从19世纪显微技术发展至现代用于显微镜观察数字病理学临床意义疾病诊断、治疗监测和预后评估的金标准组织学切片的基本原理观察显微镜下观察组织细胞结构切片将组织制成极薄切片保存保持组织原有结构与形态组织固定固定的目的常用固定剂•防止组织自溶•10%福尔马林•保持细胞形态•戊二醛•增强组织硬度•乙醇固定方法•浸泡固定法•灌注固定法•冷冻固定法脱水过程乙醇乙醇乙醇二甲苯70%95%100%初始脱水中度脱水完全脱水透明化处理透明处理透明的目的常用透明剂操作要点脱除乙醇，使组织与石蜡相容•二甲苯浸泡时间适中，避免组织硬化•甲苯增加组织透明度，便于观察及时转入石蜡，防止透明剂挥发•氯仿浸蜡和包埋冷却凝固放入包埋盒形成石蜡块便于切片更换石蜡调整方位确保切面正确转入液体石蜡2-3次更换确保充分渗透60℃石蜡浴渗透组织切片设备介绍轮转切片机冰冻切片机滑动切片机超薄切片机适用于常规石蜡切片快速诊断和特殊染色大面积和硬组织切片电镜样本超薄切片石蜡切片技术固定切片块调整刀片将石蜡块牢固安装到切片机设置角度通常为5-15度控制厚度旋转切片组织学通常为3-5μm均匀转动手轮进行切片冰冻切片技术组织快速冷冻液氮或冷冻喷雾快速冻结冰冻室切片-20℃环境下进行切片染色和观察快速染色法立即诊断切片的收集和展平切片收集用毛笔轻取切片移至水面温水展平40-45℃温水使切片展平载玻片粘附斜插载玻片将切片粘附烘干固定37℃烘箱烘干固定切片染色技术概述显示细胞结构鉴别组织成分使细胞核和胞浆等结构可见区分不同组织和细胞类型显示病原体显示特殊物质特殊染色显示微生物特异性显示某些病理产物染色HE染料染色结构颜色苏木精细胞核蓝紫色伊红胞浆粉红色伊红胶原纤维粉红色伊红红细胞橘红色特殊染色技术

（一）染色染色应用范围PAS Masson检测糖原和粘多糖胶原纤维显蓝色肝糖原检测真菌壁显示红紫色肌肉组织显红色纤维化程度评估特殊染色技术

（二）银染色弹力纤维染色•嗜银纤维呈黑色•弹力纤维呈黑色•肾小球基膜显示清晰•其他组织呈红色•神经纤维可见•血管壁观察清晰临床意义•肾脏疾病诊断•肺气肿评估•血管病变观察免疫组织化学染色抗原修复高温或酶修复暴露抗原一抗孵育特异性抗体识别靶抗原二抗孵育标记二抗结合一抗显色反应底物与酶反应产生有色物质荧光原位杂交（）FISH探针设计荧光标记的特异性核酸探针变性DNA高温使双链DNA分离杂交反应探针与靶序列特异结合荧光检测荧光显微镜观察信号电子显微镜技术

0.05μm50nm分辨率切片厚度可观察细胞超微结构超薄切片的典型厚度10000X放大倍数可观察细胞器细节数字病理技术远程诊断专家远程会诊数据存储数字切片长期保存全切片扫描3高分辨率数字化质量控制切片质量标准常见质量问题改进措施厚度均匀、无气泡、染色清晰皱褶、气泡、染色不均规范操作流程、定期设备维护实验室安全化学品安全生物安全个人防护甲醛、二甲苯等致癌物感染性样本处理防护手套、口罩、防护服穿防护戴临床应用肿瘤诊断良性肿瘤特征恶性肿瘤特征特殊染色辅助边界清晰浸润性生长Ki-67增殖指数分化良好异型性明显特异性标志物核分裂少核分裂多临床应用炎症诊断急性炎症慢性炎症中性粒细胞浸润淋巴细胞浸润组织充血水肿12纤维组织增生特殊类型炎症肉芽肿性炎43坏死性炎症上皮样细胞聚集纤维素性炎症多核巨细胞形成临床应用代谢性疾病脂肪变性淀粉样变性糖原累积•肝细胞内脂滴•刚果红染色•PAS染色阳性•油红O染色阳性•偏振光下呈苹果绿色•淀粉酶消化试验•常见于脂肪肝•见于多器官•常见于肝脏临床应用自身免疫性疾病狼疮性肾炎1免疫复合物沉积I-V型病理分型类风湿关节炎2滑膜增生肥厚炎性细胞浸润干燥综合征3腺体淋巴细胞浸润导管破坏临床应用神经系统疾病阿尔兹海默病病毒性脑炎多发性硬化老年斑和神经纤维缠结淋巴细胞浸润和胶质结髓鞘脱失和轴突损伤节临床应用心血管系统疾病心肌梗死纤维素样坏死和中性粒细胞浸润动脉粥样硬化内膜斑块形成和钙化心肌炎心肌纤维损伤和炎症细胞浸润临床应用肝脏疾病病毒性肝炎肝细胞气球样变和点灶性坏死酒精性肝病脂肪变和Mallory小体肝纤维化纤维间隔形成肝硬化假小叶形成和结节状重建临床应用肾脏疾病膜性肾病基底膜增厚系膜增生性肾炎系膜细胞和基质增多新月体性肾炎新月体形成临床应用皮肤疾病疾病主要组织学特征银屑病表皮增厚，角化不全，Munro微脓肿湿疹海绵样水肿，淋巴细胞浸润天疱疮棘层松解，表皮内水疱基底细胞癌基底样细胞巢，栅栏状排列临床应用骨髓疾病白血病骨髓增生异常综合征多发性骨髓瘤原始细胞增多造血细胞发育异常异常浆细胞浸润正常造血抑制环形铁粒幼红细胞CD138染色阳性临床应用妇科疾病临床应用胃肠道疾病慢性萎缩性胃炎溃疡性结肠炎结直肠癌胃腺体减少，肠上皮化生隐窝脓肿，黏膜层炎症腺体异型，浸润性生长临床应用呼吸系统疾病肺结核间质性肺炎肺腺癌干酪样坏死，郎汉斯巨细胞间质纤维化，蜂窝状改变腺样结构，TTF-1常阳性临床应用内分泌系统疾病甲状腺乳头状癌甲状腺滤泡腺瘤乳头状结构，核溜核空有包膜的滤泡结构甲状腺炎病Graves淋巴细胞浸润，滤泡破坏滤泡上皮增高，胶质减少临床应用泌尿系统疾病膀胱尿路上皮癌前列腺增生•乳头状或浸润性生长•腺体和间质增生•分级为低级别和高级别•无核异型•CK20常呈阳性•基底细胞层完整前列腺癌•小腺管浸润生长•Gleason评分系统•基底细胞缺失临床应用骨骼肌肉系统疾病关节滑膜炎骨肉瘤滑膜增厚，炎症细胞浸润横纹肌肉瘤恶性骨母细胞直接形成骨质骨巨细胞瘤肌管和横纹，肌特异性标记阳多核巨细胞和单核间质细胞性临床应用传染性疾病结核病真菌感染寄生虫病干酪样坏死，郎汉斯巨细胞PAS或六胺银染色显示真菌组织中可见虫体或虫卵临床应用儿科疾病肾母细胞瘤神经母细胞瘤儿童白血病三相分化模式小圆蓝细胞骨髓原始细胞增多原始间叶细胞Homer-Wright花环免疫表型分析临床应用老年病神经退行性变神经元丢失，老年斑形成心血管老化血管弹性下降，内膜增厚骨质疏松骨小梁稀疏变薄临床应用移植病理T BISHLT细胞介导排斥抗体介导排斥心脏移植排斥分级T淋巴细胞浸润管壁C4d沉积血管内皮0R-3R四级评估分子病理技术提取DNA从石蜡组织中获取DNA扩增PCR扩增特定基因靶点基因分型测序或杂交分析结果判读确定突变或多态性人工智能在组织学诊断中的应用三维组织重建技术连续切片采集获取多层序列切片图像获取与配准每个切片拍摄并精确对齐三维重建专业软件堆叠切片构建3D模型立体可视化交互式3D模型显示活体组织成像技术多光子显微镜深层组织高分辨率成像光学相干断层扫描非侵入性微结构成像光声成像组织声光反应显示组织芯片技术区域选择从供体蜡块选择代表性区域组织取样使用打孔器提取组织柱阵列构建将组织柱按序排列于受体蜡块单细胞测序技术单细胞转录组1分析单细胞基因表达谱单细胞基因组2检测单细胞DNA变异组织细胞分离酶消化和单细胞悬液制备组织透明化技术组织工程与再生医学支架材料种子细胞组织学评估生物降解高分子干细胞组织结构形成水凝胶分化细胞功能蛋白表达液体活检技术组织代谢组学质谱成像气相色谱质谱-12原位分析组织代谢物分布挥发性代谢物分析核磁共振液相色谱质谱-代谢物结构鉴定极性代谢物与脂质检测43组织学在药物研发中的应用30%40%药效评估毒性筛查药物靶点结合与功能变化组织损伤和器官毒性评估25%生物分布药物在组织中的分布与代谢组织学在法医学中的应用死亡时间估计损伤分析•组织自溶程度•生前与死后损伤区分•炎症反应特征•创伤时间推断•细胞变性阶段•损伤原因判定中毒检测•特殊染色显示毒物•组织特异性损伤模式•结合毒理学检测组织学在考古学中的应用古代骨骼研究木乃伊研究古分析DNA年龄、疾病和营养状况分析防腐技术与疾病历史探索结合组织学样本提取古代DNA组织学在动物研究中的应用动物模型研究领域组织学特点小鼠基因功能敲除基因表型分析大鼠毒理学组织毒性反应评估猴神经科学脑结构与人类相似斑马鱼发育生物学透明胚胎实时观察组织学教育的新方法虚拟显微镜技术VR/AR数字切片在线交互学习三维立体组织结构体验2游戏化学习远程教学组织学识别与诊断模拟游戏实时共享显微镜图像组织学研究的伦理问题知情同意确保患者充分理解并同意组织用途隐私保护去标识化处理防止身份泄露伦理审查研究方案须经伦理委员会批准生物样本库管理规范存储与使用流程组织学的未来发展趋势智能诊断AI辅助全自动病理诊断多组学融合2组织学与基因组学结合实时病理3术中快速精确诊断总结与展望掌握基础知识切片制备与染色基本技术培养诊断能力常见疾病组织学特征识别拓展前沿视野跟踪组织学新技术发展继续学习实验操作与临床应用相结合。