《硫代硫酸钠法测定还原糖》课件

硫代硫酸钠法测定还原糖课程概述课程目标学习内容重点难点掌握还原糖测定原理还原糖基础知识反应条件控制熟练操作硫代硫酸钠滴定流程实验方案与数据处理什么是还原糖？定义常见还原糖类型化学特性能与氧化剂反应被氧化的糖葡萄糖、果糖、麦芽糖易被氧化具有游离醛基或酮基结构乳糖、半乳糖、木糖还原糖的重要性在食品工业中的应用在生物化学中的作用食品品质控制指标细胞能量代谢关键物质在医学领域的意义还原糖测定方法概览测定方法原理优点缺点斐林法氧化还原反经典可靠终点不明显应硫代硫酸钠间接碘量法终点清晰步骤较多法法比色法快速便捷干扰因素多DNS法色谱分离高灵敏度成本高HPLC硫代硫酸钠法简介方法原理应用范围检测特性还原糖与斐林试剂反各类食品样品灵敏度高应生物发酵液重现性好⁺被还原为⁺Cu²Cu硫代硫酸钠法的优势操作简便适用范围广无需复杂仪器适用多种样品类型准确度高成本低廉测定结果可靠常规试剂即可完成实验器材准备仪器设备试剂材料滴定管、锥形瓶、移液管硫代硫酸钠、碘化钾、斐林试剂试剂配制

（一）准备材料1硫代硫酸钠五水合物无二氧化碳蒸馏水称量计算2精确称取晶体

24.82g溶解过程3溶于少量水中转移至容量瓶1000ml保存条件4避光保存定期标定试剂配制

（二）斐林液A溶解硫酸铜溶液处理稀释至刻度斐林液B溶解酒石酸钾钠氢氧化钠加入氢氧化钠溶液试剂配制

（三）碘化钾溶液称取100g KI溶于水500ml淀粉溶液称取可溶性淀粉1g加少量冷水调成糊状热处理加入沸水100ml持续搅拌溶解冷却保存室温冷却现用现配实验步骤概览数据处理计算还原糖含量滴定操作硫代硫酸钠滴定至终点反应过程斐林试剂与样品反应样品预处理提取净化样品样品预处理

（一）固体样品处理液体样品处理研磨至均质状态直接量取适量样品准确称量稀释至合适浓度水浴提取糖分必要时离心澄清过滤收集滤液收集上清液样品预处理

（二）浓度调节干扰物去除稀释至测定范围内除蛋白、脱色处理最终处理酸碱调节定容待测中和至中性环境反应原理详解第一步反应1还原糖⁺糖酸⁺→+Cu²+Cu第二步反应⁺⁻₂→↓Cu+I CuI+I第三步反应₂₂₃⁻⁻₄₆⁻→I+S O²I+S O²反应条件控制分钟100°C6温度控制时间控制水浴加热精确计时pH10-11值控制pH碱性环境滴定操作要点

（一）滴定装置选择酸式滴定管50ml装置准备滴定管洗涤、润洗滴定速度控制均匀缓慢滴加观察方法白色背景下观察滴定操作要点

（二）终点前接近终点终点判断溶液呈深蓝色颜色逐渐变浅蓝色刚好消失空白试验的意义为什么做空白试验空白试验操作步骤校正试剂本身消耗用蒸馏水代替样品消除背景干扰其他步骤完全相同提高测定准确度记录消耗体积结果计算中扣除标准曲线的制作数据处理方法

（一）计算公式单位换算₀→X=V-V×C×M×F×mg/g%100/mµ→g/mL mg/100g还原糖含量X:%→mol/L g/L₀空白消耗体积V:mL关键参数样品消耗体积V:mL硫代硫酸钠浓度C:mol/L葡萄糖摩尔质量M:g/mol数据处理方法

（二）误差分析结果修正数据有效性判断偶然误差回收率校正相对标准偏差RSD系统误差干物质含量换算变异系数CV人为误差稀释因子修正置信区间结果报告的要求项目要求示例数据表格清晰完整三次平行测定结果结果表达保留三位有效数字

2.56±

0.05g/100g单位统一使用标准单位或g/100g%方法说明注明测定方法硫代硫酸钠滴定法方法的线性范围方法的检出限

0.

050.15检出限定量限mg/mL mg/mL能可靠检测的最低浓度能准确定量的最低浓度倍10信噪比要求定量分析最低信噪比方法的精密度方法的准确度样品类型添加量测得量回收率mg mg%果汁

5.

004.

9298.4果汁

10.

009.

8598.5发酵液

5.

005.

10102.0发酵液

10.

0010.

05100.5干扰因素分析

（一）维生素酚类物质还原性氨基酸C强还原性干扰测定可被⁺氧化干扰程度中等Cu²解决方案去除或校正干扰干扰因素分析

（二）干扰因素分析

（三）方法改进与优化

（一）传统反应条件优化反应条件优化效果水浴精确控温水浴准确度提高100°C8%分钟反应时间优化反应时间至分钟分析时间缩短6430%单一条件分样品类型调整灵敏度提高pH pH15%方法改进与优化

（二）传统终点判断电位法终点判断光度法终点判断淀粉碘蓝色消失监测电位变化监测吸光度变化-方法改进与优化

（三）手动滴定操作员直接控制半自动滴定自动加入试剂全自动滴定系统自动加样、滴定、判断终点智能化系统数据实时分析、云端存储不同类型样品的处理方法

（一）谷物样品研磨至目60乙醇提取80%水果样品匀浆处理热水提取糖分糕点样品粉碎均质加水溶解搅拌提取液处理过滤、除蛋白定容待测不同类型样品的处理方法

（二）果汁样品1稀释、离心澄清碳酸饮料2脱气、稀释、中和乳制品饮料3除蛋白、脱脂、过滤功能饮料4活性炭脱色、过滤不同类型样品的处理方法

（三）发酵产品样品处理关键步骤灭活微生物、离心澄清、稀释至合适浓度实验注意事项

（一）个人防护佩戴实验服、手套必要时戴护目镜试剂安全避免接触碱性试剂小心处理硫酸铜溶液操作安全水浴加热小心烫伤滴定操作避免溅出应急处理皮肤接触立即冲洗试剂溅入眼立即就医实验注意事项

（二）含铜废液一般废液单独收集中和后处理2专门处理避免直接排放环保意识可回收试剂节约用水分类收集减少试剂用量循环使用实验注意事项

（三）常见问题可能原因解决方案滴定终点不明显指示剂老化更换新淀粉溶液平行测定差异大操作不规范严格控制反应条件回收率低提取不完全优化提取条件结果偏高其他还原物干扰添加前处理步骤质量控制措施平行样测定每批样品设三个平行样加标回收实验每批样品进行加标回收验证标准样品对照使用国家标准物质验证方法质控图监控长期跟踪方法稳定性数据分析软件应用数据录入计算处理结果可视化规范化数据输入模板自动计算还原糖含量生成标准曲线图表结果解释与分析结果可靠性判断异常值处理方法离群值检验RSD2%Dixon回收率检验法95%-105%Grubbs检测值在线性范围内可疑值分析与重测方法验证程序验证计划制定确定验证参数验证实验执行2按计划实施各项验证数据统计分析计算各项验证指标与其他方法的比较

（一）与其他方法的比较

（二）硫代硫酸钠法比色法DNS优点准确度高优点快速高通量缺点步骤较多缺点易受色素干扰适用单批量高精度测定适用大批量筛选与其他方法的比较

（三）比较项目硫代硫酸钠法法HPLC精确度高很高特异性中等极高设备要求常规实验设备专业仪器成本低高分析速度中等快速方法在食品行业的应用烘焙食品糖果制品配方优化参考生产工艺监控果汁产品酒类产品品质控制指标发酵过程监测方法在生物发酵中的应用方法在质量控制中的应用产品认证合格证明分析依据产品标准制定糖含量指标设定生产过程控制关键控制点监测成品质量检验出厂指标检测新技术在还原糖测定中的应用生物传感器法酶电极快速检测近红外光谱法无损快速分析微流控芯片技术微量样品高通量分析分子印迹技术高选择性识别分析自动化测定系统硬件组成操作界面数据处理自动加样系统触屏控制系统实时曲线分析数据管理与分析数据采集数据存储自动记录实验数据集中式数据库管理报告生成数据分析自动生成标准化报告自动统计与趋势分析方法标准化与规范化国标国际标准GB/T

5009.7ISO2173食品中还原糖的测定水果和蔬菜制品硫代硫酸钠滴定法可溶性固形物测定行业标准SN/T进出口食品中还原糖测定方法实验室间比对测量不确定度评定

1.2%

0.8%方法重复性不确定度标准溶液不确定度多次平行测定标准偏差标准物配制误差

1.5%扩展不确定度时的置信区间k=2方法确认与验证报告报告引言验证目的与范围实验部分2仪器、试剂、方法描述结果与讨论各验证参数结果分析结论与建议方法适用性评价常见问题解答问题解答滴定终点不清晰更换新鲜淀粉指示剂结果偏高原因可能有其他还原性物质干扰样品预处理重要性确保糖充分提取且无干扰斐林试剂保存期限、液分开保存，使用期个A B6月标准溶液标定频率每周标定一次确保准确实验技能考核要点实验操作技能终点判断能力1滴定操作规范性准确把握滴定终点数据处理能力实验报告质量正确计算最终结果规范、完整、准确课程总结实验技能数据分析操作流程熟练计算方法掌握结果判断准确误差分析理解理论基础实际应用还原糖概念与性质方法应用范围测定原理掌握质量控制重要性2参考文献与延伸阅读•《食品分析》第四版，刘瑞海主编，中国轻工业出版社•《分析化学》第六版，武汉大学，高等教育出版社•《实验室质量控制指南》，国际标准AOAC。