蜂王浆中蜂王浆主蛋白4的测定 酶联免疫吸附法标准文本

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65.140NYCCS B47中华人民共和国农业行业标准NY/T XXXXX—XXXX蜂王浆中蜂王浆主蛋白的测定酶联免疫4吸附法Determination ofmajor royaljelly protein4in royaljelly Enzymelinked一immunosorbent assay（征求意见稿）发布实施XXXX-XX-XX XXXX-XX-XX中华人民共和国农业农村部发布本文件按照《标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则》的规定起草GB

1.1-20201请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由中华人民共和国农业农村部畜牧兽医局提出本文件由全国畜牧业标准化技术委员会归口SAC/TC274本文件起草单位中国农业科学院蜜蜂研究所、辽宁省农业发展服务中心、武汉市葆春蜂王浆有限责任公司、浙江花谷源蜂业有限公司本文件主要起草人XXXXo蜂王浆中蜂王浆主蛋白的测定酶联免疫吸附法4范围1本文件描述了蜂土浆中蜂王浆主蛋白的酶联免疫吸附法4本文件适用于蜂王浆及蜂王浆冻干粉中蜂王浆主蛋白含量的测定4注蜂王浆主蛋白是蜂王浆主蛋白之一，其含量能够反映蜂王浆新鲜度4本文件方法的检出限为定量限为

6.57mg/kg,

62.5mg/kg规范性引用文件2下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682术语和定义3本文件没有需要界定的术语和定义原理4采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定蜂王浆主蛋白的含量蜂王浆主蛋白的一对不同表位的鼠源单克44隆抗体，与蜂王浆主蛋白特异性结合，形成固相抗体-抗原-酶标抗体的免疫复合物，加底物显色后，在4450波长下测定吸光值，根据吸光值计算蜂王浆主蛋白浓度，外标法定量nm4试剂或材料5除非另有说明，仅使用分析纯试剂三级

5.1zk GB/T6682,检测试剂盒及其试剂见附录

5.2Ao按试剂盒说明书配制所需溶液

5.3仪器设备6酶标仪检测波长精度

6.1±2nm分析天平精度为

6.

20.0001g冷冻离心机转速不低于

6.312,00017min涡旋振荡器

6.4恒温培养箱精度团

6.5±1超声波清洗仪

6.6样品

1.2蜂王浆于密闭容器中，回储存不超过个月；蜂王浆冻干粉于密闭容器中，回以下储存200g-182200g4不超过个月2试验步骤8提取

8.1平行做两份试验称取约试样（精确至）于离心管中，加水室温下充分震荡1g

0.001g50mL40mL,20min,或回以下超声转移至容量瓶中离心管用少量水洗涤次，洗液并入容量瓶中，并定容至2010min,50mL350mL,混匀取适量溶液于回、离心上清液备用412,000r/min15min,稀释

8.2蜂王浆

8.

2.1准确移取同上清液（）于容量瓶中，用水稀释定容至混匀，为待测试样溶液

508.110mL10mL,蜂王浆冻干粉

8.

2.2准确移取同上清液（）于容量瓶中，用水稀释定容至混匀，为待测试样溶液

258.110mL10mL,测定

8.3按照检测试剂盒所述操作步骤对待测试样溶液进行测定空白试验

8.4空白试样采用水替代试样，按上述步骤进行测定阳性质控

8.5取任一试样，根据其蜂王浆主蛋白的含量，选择一个合适的浓度进行添加，以确定试验过程的操4作准确性标准曲线绘制

8.6根据对照品质量浓度与吸光度变化关系绘制标准曲线，相关系数不低于试样溶液中蜂王浆主

0.99o蛋白的浓度应在标准曲线的线性范围内如果试样中蜂王浆主蛋白含量超出线性范围，则用样本稀44释液稀释（〃倍），重新测定试验数据处理9蜂王浆中蜂王浆主蛋白的含量以质量分数计，数值以毫克每千克（）表示，按式（）4w mg/kg1计算:CxVxn叱1右------------------mxlOOO式中:从标准工作曲线上得到的试样溶液中蜂王浆主蛋白浓度，单位为纳克每毫升（）；C——4ng/mLV——试样液体积，单位为毫升（）；n——试样液稀释倍数;mL试样质量，单位为克（）m g;测定结果以平行测定的算术平均值表示，表示到小数点后两位精密度10在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过该算术平均值的20%附录A（资料性）蜂王浆主蛋白测定试剂盒4包被好抗体的酶标板A.1蜂王浆主蛋白对照品（纯度＞）A.2480%o样本稀释液A.3生物素标记抗体A.4生物素标记抗体稀释液A.5辣根过氧化物酶标记亲和素A.6辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液A.7浓洗涤液A.8底物溶液A.9终止液A.10板贴A.11。