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中，氧化还原酶的活性显著降低以谷胱甘肽过氧化物酶为例，其活性相较于对照组降低了GPx约而在过表达的胰腺癌细胞中，氧化还原酶的活性则明显升高，40%P
0.01SDF2L1GPx活性相较于对照组升高了约这表明的表达水平对胰腺癌细胞内氧化还原50%P
0.01SDF2L1酶的活性具有重要的调节作用进一步采用荧光探针检测细胞内的水平本身无荧光，进入细胞后DCFH-DA ROS DCFH-DA可被细胞内的氧化为具有强荧光的通过检测的荧光强度即可反映细胞内的ROSDCF,DCF ROS水平实验结果表明，沉默的胰腺癌细胞内水平显著低于对照组，荧光强度降低了SDF2L1ROS约相反，过表达的胰腺癌细胞内水平明显高于对照组，荧光强度60%P
0.01SDF2L1ROS升高了约这说明能够调控胰腺癌细胞内的产生80%P
0.01SDF2L1ROS为了进一步验证与氧化还原酶活性及产生之间的因果关系，进行了一系列的回复SDF2L1ROS实验在沉默的细胞中，通过转染氧化还原酶基因，使其氧化还原酶活性恢复至正常水SDF2L1平，结果发现细胞内水平也随之升高，且细胞对化疗药物的敏感性得到部分恢复同样，在ROS过表达的细胞中，使用氧化还原酶抑制剂抑制氧化还原酶的活性，细胞内水平显著SDF2L1ROS降低，细胞对化疗药物的耐药性增强这些结果进一步证实了通过调节氧化还原酶活性SDF2L1来影响的产生，进而参与胰腺癌化疗耐药的调控过程ROS产生对化疗药物水平及细胞凋亡的影响
4.2ROS为了深入探究产生对化疗药物水平及细胞凋亡的影响，本研究在前期构建的沉默ROS SDF2L1和过表达的胰腺癌细胞模型基础上，进行了一系列实验在沉默导致产生减少的胰腺癌细胞中，使用高效液相色谱-质谱联用仪SDF2L1ROS检测化疗药物吉西他滨和-氟尿喀碇在细胞内的浓度实验结果显示，与对HPLC-MS/MS5照组相比，沉默组细胞内吉西他滨和-氟尿嚏咤的浓度均显著降低吉西他滨在对照组SDF2L15细胞内的浓度为而在沉默组细胞内的浓度仅为
5.6±
0.8pmol/L,SDF2L
12.1±
0.5|jmol/L；-氟尿喀嚏在对照组细胞内的浓度为在沉默组细胞内的浓P
0.
0158.5±
1.0pmol/L,SDF2L1度为这表明产生减少会导致化疗药物在细胞内的积累量降低，
3.2±
0.6pmol/L P
0.01ROS可能是由于水平影响了药物转运蛋白的活性或表达，进而影响了化疗药物的摄取和外排过程ROS进一步研究产生减少对细胞凋亡的影响，采用流式细胞术检测细胞凋亡率将沉默ROS SDF2L1的胰腺癌细胞和对照组细胞分别用吉西他滨处理小时后，收集细胞，用10pmol/L48Annexin V-双染法进行染色，然后通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况结果显示，对照组细胞的凋亡FITC/PI率为而沉默组细胞的凋亡率仅为
25.6%±
3.0%,SDF2L
110.2%±
2.0%这说明产生减少使得胰腺癌细胞对化疗药物诱导的凋亡抵抗能力增强，细胞凋P
0.01ROS亡受阻为了验证产生减少导致细胞凋亡受阻的机制，检测了细胞凋亡相关蛋白的表达水平采用蛋ROS白质免疫印迹法检测、、等蛋白的表达结果显示，在Western blotBel-2Bax Caspase-3SDF2L1沉默组细胞中，抗凋亡蛋白的表达水平显著升高，与对照组相比增加了约倍；Bel-
21.5P
0.01而促凋亡蛋白的表达水平显著降低，与对照组相比降低了约倍凋亡执行蛋白Bax
0.5P
0.01的活性也明显降低，其裂解片段的表达量显著减少这表明产生减少通Caspase-3P
0.01ROS过调节家族蛋白的表达和的活性，抑制了细胞凋亡信号通路的激活，从而导致细Bel-2Caspase-3胞凋亡受阻，使胰腺癌细胞对化疗药物产生耐药性在过表达导致产生增加的胰腺癌细胞中，同样检测化疗药物在细胞内的浓度结SDF2L1ROS果显示，与对照组相比，过表达组细胞内吉西他滨和氟尿喀咤的浓度均显著升高吉SDF2L15-西他滨在过表达组细胞内的浓度为明显高于对照组的SDF2L
18.9±
1.2pmol/L,
5.6±
0.8pmol/L；-氟尿蹴定在过表达组细胞内的浓度为P
0.015SDF2L1也显著高于对照组的这说明产生增加有利
12.3±
1.5pmol/L,
8.5±
1.0pmol/L P
0.01ROS于化疗药物在细胞内的积累，可能是因为促进了药物转运蛋白的活性或表达，提高了化疗药ROS物的摄取效率采用流式细胞术检测过表达组细胞在化疗药物处理后的凋亡率将过表达的胰SDF2L1SDF2L1腺癌细胞和对照组细胞分别用吉西他滨处理小时后，收集细胞进行染色和检测结1pmol/L48果显示，过表达组细胞的凋亡率为显著高于对照组的SDF2L
135.8%±
4.0%,
25.6%±
3.0%这表明产生增加能够增强胰腺癌细胞对化疗药物诱导的凋亡敏感性，促进细胞凋P
0.01ROS亡进一步检测过表达组细胞凋亡相关蛋白的表达水平结果显示，与对照组SDF2L1Western blot相比，过表达组细胞中抗凋亡蛋白的表达水平显著降低，减少了约倍；SDF2L1Bel-
20.6P
0.01促凋亡蛋白的表达水平显著升高，增加了约倍Bax
1.2P
0.01的活性明显增强，其裂解片段的表达量显著增加这表明产生增加通过Caspase-3P
0.01ROS调节家族蛋白的表达和的活性，激活了细胞凋亡信号通路，从而促进细胞凋亡，Bel-2Caspase-3提高了胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性对信号通路的调控作用
4.3SDF2L1NF-KBNF-KB信号通路在细胞的炎症、免疫、增殖、凋亡等多种生物学过程中发挥着至关重要的作用，并且与肿瘤的发生发展、化疗耐药密切相关为了深入探究影响胰腺癌化疗耐药的机制SDF2L1是否与NF-KB信号通路有关，本研究在前期构建的SDF2L1沉默和过表达的胰腺癌细胞模型基础上，对NF-KB信号通路中关键蛋白的表达和活性进行了检测首先，采用蛋白质免疫印迹法Western blot检测NF-KB信号通路中关键蛋白的表达水平，包括、磷酸化的、磷酸化的等实验结果显示，在沉p65p-p65p65IKBCL p-IKBQ kBaSDF2L1默的胰腺癌细胞中，的表达水平显著降低，与对照组相比下降了约；同时，p-p6550%P
0.01的表达水平也明显降低，下降了约而的表达水平则相对升高这表明p-kBa40%P
0.01,iKBa沉默抑制了信号通路的激活，减少了的磷酸化和核转位，同时抑制了SDF2L1NF-KB P65IKBQ的磷酸化和降解在过表达的胰腺癌细胞中，的表达水平显著升高，与对照组相SDF2L1P-P65比增加了约的表达水平也明显升高，增加了约而的表达80%P
0.01;p-kBa60%P
0.01,kBa水平则相对降低这表明SDF2L1过表达促进了NF-KB信号通路的激活，增加了p65的磷酸化和核转位，同时促进了IKBQ的磷酸化和降解为了进一步验证SDF2L1对NF-KB信号通路的调控作用，采用免疫荧光染色法观察P65蛋白在细胞内的定位情况结果显示，在对照组细胞中，主要分布于细胞质中；在沉默的P65SDF2L1细胞中，在细胞质中的分布更加明显，细胞核内的荧光强度较弱；而在过表达p65p65SDF2L1的细胞中，大量转移至细胞核内，细胞核内的荧光强度显著增强这进一步证实了p65p65SDF2L1能够调控NF-KB信号通路中p65的核转位，从而影响其转录活性为了探究调控信号通路的具体机制，通过免疫共沉淀实验检测与SDF2L1NF-KB SDF2L1NF-KB信号通路相关蛋白之间的相互作用结果发现，SDF2L1能够与IKB激酶IKK复合物中的IKKp亚基相互结合进一步的体外结合实验表明，与的结合具有特异性，且这种结合能SDF2L1IKKp够增强的激酶活性在过表达的细胞中，的激酶活性相较于对照组提高了约IKKB SDF2L1IKKB倍；而在沉默的细胞中，的激酶活性则降低了约倍这表L5P
0.01SDF2L1IKKB
0.6P
0.01明可能通过与相互作用，调节复合物的活性，进而影响的磷酸化和SDF2L1IKK0IKK IKBQNF-KB信号通路的激活通过荧光素酶报告基因实验检测信号通路的转录活性将含有结合位点的荧光素NF-KB NF-KB酶报告基因质粒转染至胰腺癌细胞中，同时转染过表达质粒或干扰质粒结果显示，与SDF2L1对照组相比，过表达组细胞的荧光素酶活性显著升高，增加了约倍；而SDF2L
12.5P
0.01沉默组细胞的荧光素酶活性则显著降低，降低了约倍这进一步证明了SDF2L
10.8P
0.01能够调控信号通路的转录活性，从而影响下游靶基因的表达SDF2L1NF-KB信号通路与胰腺癌化疗耐药的关系
4.4NF-KBNF-KB信号通路在胰腺癌化疗耐药过程中扮演着关键角色，其异常激活与胰腺癌化疗耐药的发生发展密切相关许多研究表明，在胰腺癌化疗耐药细胞中，NF-KB信号通路处于持续激活状态，这使得肿瘤细胞能够逃避化疗药物诱导的凋亡，从而产生耐药性在吉西他滨耐药的胰腺癌细胞系中，NF-KB信号通路中的关键蛋白p65呈现高磷酸化状态，其核转位增加，导致下游抗凋亡基因如、等的表达上调，这些抗凋亡蛋白能够抑制细胞凋亡信号通路的激活，使Bcl-2Bel-XL肿瘤细胞对吉西他滨的杀伤作用产生抵抗NF-KB信号通路的激活还可促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力，进一步加重肿瘤的恶性程度和化疗耐药性研究发现，激活NF-KB信号通路可上调细胞周期蛋白的表达，促进胰腺癌细胞的增殖；还可促进基质金属蛋白酶D1CyclinDI MMPs的表达，增强肿瘤细胞的迁移和侵袭能力结合前文研究发现，SDF2L1对NF-KB信号通路具有重要的调控作用，因此推测SDF2L1可能通过调控NF-KB信号通路来影响胰腺癌的化疗耐药性当SDF2L1表达上调时，可通过与IKB激酶复合物中的亚基相互作用，增强的激酶活性，促进的磷酸化和降解，从IKK IKKpIKKp IKBQ而释放NF-KB二聚体，使其发生磷酸化并转位进入细胞核，激活NF-KB信号通路激活的NF-KB信号通路可上调下游抗凋亡基因的表达，抑制细胞凋亡，同时促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，导致胰腺癌细胞对化疗药物的耐药性增强相反，当表达下调时，的激酶活性受到SDF2L1IKK抑制，的磷酸化和降解减少,信号通路的激活受到抑制，从而使肿瘤细胞对化疗药物kBa NF-KB的敏感性增加在SDF2L1过表达的胰腺癌细胞中，给予NF-KB信号通路抑制剂处理后，细胞对化疗药物的耐药性明显降低，细胞凋亡率增加，增殖和迁移能力受到抑制这进一步证实了SDF2L1通过调控信号通路来影响胰腺癌化疗耐药性的机制NF-KB和蛋白在介导的化疗耐药中的作用
4.5Caspase-3PARP SDF2L1和聚-核糖聚合酶蛋白在细胞凋亡过程中扮演着关键角色，它们的功Caspase-3PARP ADP能和活性变化与肿瘤细胞的化疗耐药密切相关为了深入探究介导的胰腺癌化疗耐药机SDF2L1制，本研究对和蛋白在其中的作用进行了详细研究Caspase-3PARP采用蛋白质免疫印迹法检测沉默和过表达的胰腺癌细胞中和Western blotSDF2L1Caspase-3蛋白的表达水平及活化状态实验结果显示，在沉默的胰腺癌细胞中，PARP SDF2L1Caspase-的活化形式表达水平显著升高，与对照组相比增加了约倍；3cleaved Caspase-
31.8P
0.01的裂解产物表达水平也明显升高，增加了约倍这表明PARP cleavedPARP
1.5P
0.01SDF2L1沉默促进了的活化和的裂解，提示细胞凋亡信号通路被激活相反，在Caspase-3PARP SDF2L1过表达的胰腺癌细胞中，的活化形式表达水平显著降低，与对照组相比下降了约Caspase-
30.6倍的裂解产物表达水平也明显降低，下降了约倍这表明P
0.01;PARP
0.5P
0.01SDF2L1过表达抑制了的活化和的裂解，抑制了细胞凋亡信号通路Caspase-3PARP为了进一步验证和蛋白在介导的化疗耐药中的作用，使用Caspase-3PARP SDF2L1Caspase-特异性抑制剂处理沉默的胰腺癌细胞结果发现，加入3Z-DEVD-FMK SDF2L1Z-DEVD-FMK后，细胞凋亡率显著降低，与未处理组相比下降了约同时，细胞对化疗药物的耐50%P
0.01药性增强，在相同化疗药物浓度下，细胞增殖活性明显升高这表明抑制的活性可Caspase-3以逆转沉默导致的细胞凋亡增加和化疗敏感性增强，进一步证明了在SDF2L1Caspase-3介导的化疗耐药中起着关键作用SDF2L1通过干扰技术降低蛋白的表达，观察其对过表达细胞化疗耐药性的影响RNA PARP SDF2L1结果显示，蛋白表达降低后，过表达细胞对化疗药物的敏感性增加，细胞凋亡率PARP SDF2L1显著升高，与对照组相比增加了约这表明抑制蛋白的表达可以部分逆转40%P
0.01PARP过表达导致的化疗耐药性增强，说明蛋白在介导的化疗耐药中也发挥着SDF2L1PARP SDF2L1重要作用综合以上研究结果，和蛋白在介导的胰腺癌化疗耐药中具有重要作Caspase-3PARP SDF2L1用可能通过调节和蛋白的表达和活性，影响细胞凋亡信号通路的SDF2L1Caspase-3PARP激活，从而调控胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性当表达下调时，促进SDF2L1的活化和的裂解，激活细胞凋亡信号通路，使细胞对化疗药物的敏感性增力Caspase-3PARP口；而当表达上调时，抑制的活化和的裂解，抑制细胞凋亡信号通SDF2L1Caspase-3PARP路，导致细胞对化疗药物的耐药性增强
五、案例分析临床病例分析
5.1为了进一步验证在胰腺癌化疗耐药中的作用及机制，本研究收集了例接受化疗的胰SDF2L150腺癌患者的临床资料，并对其进行了详细分析患者男性，岁，确诊为胰腺癌，分期为期，未发生远处转移肿瘤组织免疫组化检A,62TNM HI测显示呈高表达患者接受吉西他滨联合白蛋白紫杉醇化疗方案，化疗过程中，患者的SDF2L1病情逐渐进展，肿瘤体积增大，指标持续上升，提示化疗耐药治疗个周期后，患者因CA19-96疾病进展死亡患者女性，岁，胰腺癌确诊时分期为期，无淋巴结转移肿瘤组织中表达B,58TNM HSDF2L1水平较低患者采用吉西他滨单药化疗，化疗效果显著，肿瘤体积明显缩小，指标下降至CA19-9正常范围患者在化疗期间未出现明显的耐药现象，生存期达到个月，生活质量良好24对例患者的临床资料进行综合分析，结果显示，高表达的患者化疗有效率为50SDF2L130%9/30,而低表达的患者化疗有效率为差异具有统计学意义SDF2L170%14/20,P
0.05SDF2L1高表达患者的中位生存期为个月，明显短于低表达患者10SDF2L1的个月18P
0.05通过对这些临床病例的分析，进一步证实了表达水平与胰腺癌患者化疗耐药及预后密切SDF2L1相关高表达的患者更容易出现化疗耐药，化疗效果较差，生存期较短；而低SDF2L1SDF2L1表达的患者对化疗更为敏感，化疗效果较好，生存期较长这与前文细胞实验和机制研究的结果相互印证，为作为胰腺癌化疗耐药的潜在预测标志物和治疗靶点提供了临床证据SDF2L1细胞实验和动物实验案例
5.2在细胞实验方面，我们选取了和这两种具有代表性的胰腺癌细胞系以PANC-1SW1990PANC-1细胞系为例，在沉默实验中，将构建好的通过脂质体转染的方式导入SDF2L1SDF2L1-siRNA细胞转染小时后，运用实时荧光定量技术检测发现，PANC-148PCR转染组细胞中的表达水平相较于对照组降低了约通过蛋白SDF2L1-siRNA SDF2L1mRNA75%,质免疫印迹法检测蛋白表达水平也显著下降，证实了沉默效果显著随后，将SDF2L1SDF2L1转染后的细胞分别用不同浓度的吉西他滨处理，采用法检测细胞增殖活性结果显示，在CCK-8吉西他滨浓度为时，对照组细胞的增殖抑制率为而转染组5pmol/L
35.6%±
3.2%,SDF2L1-siRNA细胞的增殖抑制率仅为表明沉默后
15.3%±
2.1%,SDF2L1细胞对吉西他滨的耐药性明显增强在过表达实验中，将PANC-1SDF2L1pcDNA
3.1-SDF2L1质粒转染至细胞，转染小时后检测到和蛋白表达水平均显著升高，PANC-148SDF2L1mRNA过表达效果良好当用吉西他滨处理细胞后，对照组细胞的增殖抑制率为10pmol/L
42.5%±
4.1%,而过表达组细胞的增殖抑制率达至表明过表达显著增强了SDF2L1ij
65.8%±
5.3%,SDF2L1细胞对吉西他滨的敏感性PANC-1在动物实验中，我们构建了裸鼠胰腺癌移植瘤模型将细胞接种于裸鼠右侧腋窝皮下，PANC-1待肿瘤体积长至约时，将裸鼠随机分为三组，分别为对照组、沉默组和100mm3SDF2L1SDF2L1过表达组沉默组通过瘤内注射脂质体复合物，过表达组通过SDF2L1SDF2L1-siRNA SDF2L1瘤内注射质粒脂质体复合物，对照组注射等量的阴性对照脂质体复合物每PCDNA
3.1-SDF2L1周测量肿瘤体积两次，绘制肿瘤生长曲线结果显示，沉默组肿瘤体积增长迅速，在第SDF2L13周时肿瘤体积达到明显大于对照组的560±50mm3,而过表达组肿瘤体积增长缓慢，第周时肿瘤体积仅为380±40mm3;SDF2L13250±30mm3在给予吉西他滨腹腔注射治疗后剂量为每周两次，100mg/kg,沉默组肿瘤对吉西他滨治疗反应不佳，肿瘤体积仍持续增大，对照组肿瘤体积增长有所SDF2L1•减缓；过表达组肿瘤体积明显缩小，在治疗第周时肿瘤体积缩小至实SDF2L12150±20mm3验结束后，处死裸鼠，取出肿瘤组织进行免疫组化分析，结果显示沉默组肿瘤组织中SDF2L1Ki-67细胞增殖标志物表达水平显著高于对照组和过表达组，而细胞凋亡标志SDF2L1Caspase-3物表达水平显著低于对照组和过表达组，进一步证实了对胰腺癌细胞化疗耐SDF2L1SDF2L1药性的影响在动物体内同样存在
六、结论与展望研究总结
6.1本研究围绕在胰腺癌化疗耐药中的功能与机制展开，通过一系列实验，取得了以下重要SDF2L1成果在胰腺癌组织和细胞中高表达且与临床病理特征及预后相关在多种胰腺癌细胞系以•SDF2L1及胰腺癌患者的肿瘤组织标本中，的和蛋白表达水平均显著高于正常胰腺导管SDF2L1mRNA上皮细胞系和癌旁正常组织标本临床病理分析表明，的高表达与肿瘤的分期、SDF2L1TNM淋巴结转移以及远处转移密切相关，且高表达的患者化疗有效率较低，中位生存期明SDF2L1显短于低表达患者这表明在胰腺癌的发生发展及化疗耐药过程中可能发挥SDF2L1SDF2L1着重要作用，有望成为胰腺癌预后评估的潜在标志物表达水平影响胰腺癌细胞化疗耐药性利用基因编辑技术构建沉默和过表达•SDF2L1SDF2L1的胰腺癌细胞模型，通过法、法、流式细胞术、克隆形成实验等多种实验方法，MTT CCK-8证实了沉默可显著促进胰腺癌细胞的化疗耐药性，表现为细胞对化疗药物的增殖抑SDF2L1制作用抵抗增强、凋亡率降低、克隆形成能力增强而过表达则可显著提高胰腺癌细SDF2L1胞对化疗药物的敏感性，细胞对化疗药物的增殖抑制作用敏感增强、凋亡率升高、克隆形成能力降低这明确了在胰腺癌化疗耐药中的关键功能，为后续机制研究奠定了基础SDF2L1通过调控氧化还原酶活性、产生及信号通路影响化疗耐药深入机制•SDF2L1ROS NF-KB研究发现，沉默可抑制胰腺癌细胞内氧化还原酶的活性，导致细胞内产生减少，SDF2L1ROS进而降低化疗药物在细胞内的水平产生减少还通过调节家族蛋白的表达和ROS Bel-2的活性，抑制细胞凋亡信号通路，使细胞对化疗药物产生耐药性相反，Caspase-3SDF2L1过表达可增强氧化还原酶活性，增加产生，提高化疗药物在细胞内的浓度，促进细胞凋ROS亡，增强化疗敏感性SDF2L1还能够通过与IKB激酶（IKK）复合物中的IKKB亚基相互作用，调节复合物的活性，进而影响的磷酸化和信号通路的激活过表达IKK kBaNF-KB SDF2L1促进NF-KB信号通路激活，上调下游抗凋亡基因的表达，抑制细胞凋亡，增强化疗耐药性；沉默则抑制信号通路激活，使肿瘤细胞对化疗药物的敏感性增加SDF2L1NF-KB和蛋白在介导的化疗耐药中发挥重要作用通过蛋白质免疫印迹•Caspase-3PARP SDF2L1法检测发现，沉默促进的活化和的裂解，激活细胞凋亡信号通路，SDF2L1Caspase-3PARP使细胞对化疗药物的敏感性增加；而过表达抑制的活化和的裂解，SDF2L1Caspase-3PARP抑制细胞凋亡信号通路，导致细胞对化疗药物的耐药性增强使用特异性抑制剂Caspase-3和干扰技术分别验证了和蛋白在介导的化疗耐药中的关键RNA Caspase-3PARPSDF2L1作用临床病例及细胞、动物实验验证研究结果对例接受化疗的胰腺癌患者临床资料的分析进•50一步证实，高表达的患者更容易出现化疗耐药，化疗效果较差，生存期较短；而SDF2L1SDF2L1低表达的患者对化疗更为敏感，化疗效果较好，生存期较长细胞实验和动物实验也从不同角度验证了对胰腺癌细胞化疗耐药性的影响，结果相互印证，为研究结论提供了有力SDF2L1支持本研究系统地揭示了在胰腺癌化疗耐药中的功能与机制，为深入理解胰腺癌化疗耐药的SDF2L1分子机制提供了新的视角，为胰腺癌的临床治疗提供了潜在的治疗靶点和策略研究不足与展望
6.2尽管本研究在揭示在胰腺癌化疗耐药中的功能与机制方面取得了一定的成果，但仍存在SDF2L1一些不足之处，有待未来进一步深入研究和完善在研究范围上，本研究主要聚焦于在胰腺癌细胞系和动物模型中的作用及机制探究，对SDF2L1于胰腺癌患者体内肿瘤微环境中的动态变化及其与其他细胞成分（如肿瘤相关成纤维细SDF2L1胞、免疫细胞等）之间的相互作用尚未深入研究肿瘤微环境是一个复杂的生态系统，其中各种细胞和分子之间相互影响，共同参与胰腺癌的发生发展和化疗耐药过程未来研究可采用组织芯片技术、单细胞测序技术等，对胰腺癌患者肿瘤组织进行多维度分析，深入探究在肿瘤SDF2L1微环境中的表达模式、细胞来源以及与其他细胞成分的相互作用关系，为全面理解胰腺癌化疗耐药机制提供更丰富的信息在研究方法上，本研究主要运用了细胞生物学、分子生物学和动物实验等常规技术手段虽然这些技术为研究的功能与机制提供了重要依据，但随着科技的不断发展，一些新兴技术如SDF2L1类器官技术、基因编辑动物模型、蛋白质组学和代谢组学等在肿瘤研究领域展现出独特的优势类器官技术能够在体外构建与体内肿瘤组织高度相似的三维模型，保留肿瘤细胞的异质性和微环境特征，为研究胰腺癌化疗耐药提供了更接近生理状态的实验平台未来可利用类器官技术，构建胰腺癌类器官模型，进一步验证在胰腺癌化疗耐药中的功能和机制，并筛选针对SDF2L1的新型治疗药物基因编辑动物模型，如条件性基因敲除小鼠、转基因小鼠等，能够更SDF2L1精准地模拟人类疾病的发生发展过程，深入研究在体内的生物学功能蛋白质组学和代SDF2L1谢组学等高通量技术可全面分析细胞内蛋白质和代谢物的变化，有助于发现与相关的新SDF2L1的分子靶点和信号通路，为胰腺癌化疗耐药的治疗提供新的思路在临床应用方面，本研究虽然初步证实了作为胰腺癌化疗耐药潜在治疗靶点的可能性，SDF2L1但距离临床转化应用仍有较长的路要走目前，针对的靶向治疗药物尚未研发成功，需SDF2L1要进一步开展药物研发工作，筛选和设计特异性高、副作用小的抑制剂或激活剂在药SDF2L1物研发过程中，可结合计算机辅助药物设计、高通量药物筛选等技术，提高药物研发效率还需要开展大规模的临床前研究和临床试验，评估靶向治疗的安全性和有效性，为胰腺癌患SDF2L1者提供更有效的治疗方案未来，随着对研究的不断深入，有望进一步揭示其在胰腺癌化疗耐药中的复杂调控网络，SDF2L1开发出基于靶点的新型治疗策略，为改善胰腺癌患者的预后带来新的希望也需要综合SDF2L1运用多种学科的技术和方法，从多个角度深入研究胰腺癌化疗耐药机制，为攻克这一难题提供更全面、更深入的理论支持致谢在完成这篇关于在胰腺癌化疗耐药中的功能与机制研究的论文过程中，我得到了众多师SDF2L1长、同学和亲友的支持与帮助，在此，我要向他们表达我最诚挚的感激之情我要衷心感谢我的导师［导师姓名］教授，在整个研究和论文撰写过程中，您以渊博的专业知识、严谨的治学态度和精益求精的工作作风，为我指引着前进的方向从课题的选题、实验设计到结果分析，再到论文的修改与完善，每一个环节都倾注了您大量的心血您的悉心指导和严格要求，让我在学术研究的道路上不断成长，学会了如何以审慎和积极的态度面对科研中的各种挑战您不仅是我学术上的导师，更是我人生道路上的引路人，您的言传身教将永远激励着我在医学科研领域不断探索前行我也要感谢我的母校［学校名称］,感谢学校为我提供了良好的学习和科研环境，让我能够在浓厚的学术氛围中潜心研究感谢［学院名称］的各位授课老师，在我的研究生学习生涯中，你们的谆谆教诲拓宽了我的专业知识面，为我的研究奠定了坚实的理论基础在实验过程中，我得到了［实验室名称］各位师兄师姐、师弟师妹的热心帮助［具体姓名］1师兄/师姐在实验技术上给予了我耐心的指导，让我能够顺利掌握各项实验操作技能；［具体姓名］师弟/师妹在实验材料的准备和数据整理方面，为我分担了许多工作，使我能够更加专注于实2验研究感谢你们在实验过程中的陪伴与支持，我们一起度过的那些日夜，将成为我研究生生活中最宝贵的回忆我还要感谢我的家人，你们始终是我最坚强的后盾感谢我的父母，多年来你们含辛茹苦地养育我，默默支持我的学业，给予我无尽的关爱和鼓励，让我能够毫无后顾之忧地追求自己的梦想感谢我的［其他家人称呼］,在我忙碌于实验和论文写作时，给予我理解和包容，在我遇到困难和挫折时，给予我温暖和安慰在论文撰写过程中，［同学姓名］同学与我进行了深入的讨论和交流，为我提供了许多宝贵的建议和思路，帮助我不断完善论文内容在此，我也要向他/她表示诚挚的感谢最后，我要感谢所有为我提供研究资料和数据的科研团队，以及参与论文评审和答辩的老师们，你们的意见和建议对我论文的完善起到了至关重要的作用在未来的学术道路上，我将继续努力，不辜负大家对我的期望，为医学科研事业的发展贡献自己的一份力量关于的研究，国外有研究报道其在多种肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭过程中发挥作用SDF2L1在乳腺癌细胞中，的高表达与肿瘤细胞的增殖和转移能力增强相关，通过干扰SDF2L1SDF2L1的表达可抑制乳腺癌细胞的生长和迁移在肝癌细胞中，参与调控细胞周期和凋亡相关SDF2L1蛋白的表达，影响肝癌细胞的生物学行为然而，在胰腺癌中的研究相对较少，其在胰SDF2L1腺癌化疗耐药中的具体功能和机制尚未见系统性报道国内对在胰腺癌中的研究也处于初步探索阶段孙素芹等人的研究发现，山甲白花汤联SDF2L1合吉西他滨可通过上调抑制从而发挥抗胰腺癌耐药作用，初步揭示了miR-124-3p SDF2L1,与胰腺癌耐药之间的关联，但对于在胰腺癌化疗耐药中的具体调控机制仍缺乏SDF2L1SDF2L1深入研究综上所述，目前国内外关于胰腺癌化疗耐药机制的研究已取得一定进展，但仍存在许多未明确的问题对于在胰腺癌化疗耐药中的功能与机制研究尚处于起步阶段，存在研究空白深SDF2L1入探究在胰腺癌化疗耐药中的作用及机制，有望为胰腺癌化疗耐药的临床治疗提供新的SDF2L1靶点和策略
二、与胰腺癌的相关理论基础SDF2L1胰腺癌概述
2.1胰腺癌是一种起源于胰腺导管上皮及腺泡细胞的恶性肿瘤，在消化系统肿瘤中占据着极为特殊且严峻的地位其解剖位置隐匿，胰腺位于腹腔深部，前方有胃、横结肠等脏器覆盖，后方紧邻大血管和重要神经丛这种特殊的位置使得早期胰腺癌难以通过常规检查手段被及时发现，当肿瘤生长到一定程度并引发明显症状时，往往已进展至中晚期近年来，胰腺癌的发病率在全球范围内呈现出持续上升的趋势根据国际癌症研究机构发IARC布的全球癌症统计数据显示，年全球胰腺癌新发病例数约为万，在所有恶性肿瘤中排
202049.6名第位在我国，胰腺癌的发病率也不容小觑，且呈逐年上升态势，已成为危害人民健康的重13要疾病之一以上海市为例，年期间，胰腺癌发病率从万上升至万，2000-
20164.88/
108.21/10年均增长
2.65%胰腺癌的死亡率同样居高不下，堪称所有恶性肿瘤中的“佼佼者”，因此被冠以“癌中之王”的恶名全球范围内，年胰腺癌死亡病例数约为万，死亡率与发病率之比接近我国胰
202046.61:1腺癌患者的死亡率也一直维持在较高水平，年生存率极低，不足这主要归因于胰腺癌的510%生物学特性，其具有高度的侵袭性和转移性，肿瘤细胞极易侵犯周围组织和血管，早期即可发生远处转移同时，胰腺癌还伴有复杂的肿瘤微环境，富含大量的间质成分，形成致密的纤维结缔组织，阻碍化疗药物的渗透和作用目前，胰腺癌的治疗方法主要包括手术治疗、化疗、放疗、靶向治疗以及免疫治疗等，采取的是综合治疗策略手术切除是唯一可能根治胰腺癌的方法，但由于胰腺癌早期诊断困难，多数患者确诊时已处于中晚期，肿瘤侵犯周围重要血管和脏器，导致手术切除率较低，仅约的患者有20%机会接受手术治疗对于无法手术切除的患者，化疗成为主要的治疗手段吉西他滨（）gemcitabine是目前胰腺癌化疗的一线药物，常与其他药物联合使用，如吉西他滨联合白蛋白紫杉醇、吉西他滨联合替吉奥等方案尽管化疗在一定程度上能够延长患者的生存期，但总体疗效仍不尽人意化疗耐药是胰腺癌治疗过程中面临的最为棘手的难题之一临床研究发现，大部分胰腺癌患者在接受化疗后，短时间内就会出现耐药现象，导致化疗药物无法有效杀伤肿瘤细胞，肿瘤继续生长和扩散化疗耐药的发生机制复杂多样，涉及多个方面从肿瘤细胞自身角度来看，肿瘤细胞可通过上调药物外排泵的表达，如糖蛋白（）、多药耐药相关蛋白（）等，将化疗药物P-P-gp MRP快速排出细胞外，降低细胞内药物浓度，从而产生耐药肿瘤细胞还可通过改变药物靶点、增强损伤修复能力、抑制细胞凋亡等机制来逃避化疗药物的杀伤作用肿瘤微环境中的各种成分，DNA如肿瘤相关成纤维细胞（）、肿瘤浸润免疫细胞、细胞外基质等，与胰腺癌细胞相互作用，CAFs可分泌多种细胞因子和趋化因子，改变肿瘤细胞的生物学行为，促进化疗耐药的发生化疗耐药的存在严重限制了胰腺癌的治疗效果，导致患者预后极差，因此深入探究化疗耐药的机制并寻找有效的克服策略具有迫切的临床需求的生物学特性
2.2SDF2L1基因全称为即基质细胞衍生因子样基因，定位SDF2L1stromal cell-derived factor2-like1,21于人类染色体区域该基因所编码的蛋白质由个氨基酸组成，其分子量约为22q
11.2128130kDa蛋白在细胞内发挥着多种重要的生物学功能，尤其是在细胞迁移和信号传导过程中扮演SDF2L1关键角色在细胞迁移方面，能够通过调节细胞骨架的动态变化，影响细胞的形态和运动能力细SDF2L1胞骨架是细胞内的蛋白质纤维网络结构，包括微丝、微管和中间纤维等，它们在细胞迁移过程中起着支撑和动力作用研究发现，可以与细胞骨架相关蛋白相互作用，如肌动蛋白（）、SDF2L1actin微管蛋白（）等，调控这些蛋白的聚合和解聚过程，从而改变细胞骨架的组装和分布，使tubulin细胞能够产生伪足、收缩和伸展等运动，进而实现细胞迁移在胚胎发育过程中，神经崎细胞的迁移对于神经系统的形成至关重要，在这一过程中高度表达，通过调节神经靖细胞的迁SDF2L1移路径和速度，确保神经系统的正常发育在肿瘤发生发展过程中，肿瘤细胞的迁移和侵袭能力是其转移的关键步骤，在多种肿瘤细胞中的异常表达与肿瘤细胞的迁移和侵袭能力增强SDF2L1密切相关乳腺癌细胞中，高表达的可促进细胞迁移相关蛋白如基质金属蛋白酶（）SDF2L1MMPs的表达，能够降解细胞外基质，为肿瘤细胞的迁移和侵袭提供空间，从而增强乳腺癌细胞MMPs的转移能力还参与细胞内复杂的信号传导通路，在细胞生长、增殖、分化和凋亡等生物学过程中发SDF2L1挥调控作用它可以与多种细胞表面受体结合，激活下游的信号分子，进而引发一系列的细胞内信号级联反应研究表明，能够与蛋白偶联受体（）家族成员相互作用，激活SDF2L1G GPCR蛋白，使蛋白的亚基与丫亚基分离，分别激活不同的下游信号通路，如磷脂酶（）G Ga0C PLC-蛋白激酶（）通路、丝裂原活化蛋白激酶（）通路等在通路中，激活C PKCMAPK PLC-PKC的可水解磷脂酰肌醇-二磷酸（）生成二酰甘油PLC4,5-PIP2（）和三磷酸肌醇（）激活进一步磷酸化下游的靶蛋白，调节细胞的DAG IP3,DAG PKC,PKC生理功能在通路中，激活的蛋白可通过一系列的激酶级联反应，激活细胞外信号调节MAPK G激酶（）、氨基末端激酶（）和等，这些激酶进入细胞核后，磷酸化ERK c-Jun JNKp38MApK转录因子，调节相关基因的表达，影响细胞的增殖、分化和凋亡等过程在肝癌细胞中，SDF2L1通过激活通路，上调细胞周期蛋白（）的表达，促进肝癌细胞的增殖MAPK D1Cyclin D1还可通过与其他信号分子相互作用，形成复杂的信号网络，精细调控细胞的生物学行为SDF2L1在某些细胞中，与信号通路中的关键蛋白连环蛋白（）相互作用，影SDF2L1Wnt B-B-catenin响的稳定性和核转位，从而调节信号通路的活性，影响细胞的增殖和分化B-catenin WntSDF2L1在细胞的生理和病理过程中具有重要的生物学特性，其功能的异常可能与多种疾病的发生发展密切相关化疗耐药机制相关理论
2.3化疗耐药是肿瘤治疗领域面临的重大难题，其机制复杂多样，涉及肿瘤细胞的多个生物学过程和分子层面的改变以下将详细阐述几种常见的化疗耐药机制药物外排增加
2.
3.1肿瘤细胞通过高表达药物外排转运蛋白，将化疗药物主动排出细胞外，从而降低细胞内药物浓度，使其无法达到有效杀伤肿瘤细胞的剂量，这是导致化疗耐药的重要机制之一在胰腺癌中，多种药物外排转运蛋白发挥作用乳腺癌耐药蛋白（）作为结合盒BCRP,ATP（）转运蛋白超家族的成员，在胰腺癌耐药细胞中常常呈现高表达状态能利用ABC BCRPATP水解产生的能量，将化疗药物如米托葱醍、拓扑替康等逆浓度梯度转运出细胞研究发现，在吉西他滨耐药的胰腺癌细胞株中，的表达水平显著升高，通过干扰技术降低的BCRP RNABCRP表达后，细胞内吉西他滨的浓度明显增加，细胞对吉西他滨的敏感性也随之提高多药耐药相关蛋白（）家族同样在胰腺癌化疗耐药中扮演关键角色等多种亚型参与药物外MRP MRP1-MRP9排过程，它们可以识别并转运多种化疗药物，包括顺粕、阿霉素、长春新碱等可通过与MRP1谷胱甘肽（）结合，将与结合的化疗药物排出细胞，从而降低细胞内药物浓度在一GSH GSH项对胰腺癌患者的临床研究中，发现肿瘤组织中的高表达与患者对化疗药物的耐药性密切MRP1相关，高表达的患者化疗效果较差，生存期明显缩短MRP1靶点改变
2.
3.2化疗药物通常通过与肿瘤细胞内的特定靶点结合，发挥其抑制肿瘤细胞生长、诱导凋亡等作用当这些靶点发生改变时，化疗药物与靶点的结合能力下降或丧失，导致药物无法发挥正常的抗肿瘤效应，从而引发化疗耐药在胰腺癌中，一些关键靶点的改变已被证实与化疗耐药相关以吉西他滨为例，其作用靶点之一是核糖核昔酸还原酶（）在合成过程中负责将核RNR RNR DNA糖核甘酸还原为脱氧核糖核甘酸，吉西他滨通过抑制的活性，干扰肿瘤细胞的合成，RNRDNA从而发挥抗癌作用然而，当的亚基和发生突变或表达异常时，吉西他滨与RNR RRM1RRM2的结合能力降低，导致吉西他滨无法有效抑制的活性，肿瘤细胞对吉西他滨产生耐药RNR RNR性研究表明，在吉西他滨耐药的胰腺癌细胞中，和的表达水平显著升高，通过基RRM1RRM2因沉默技术降低和的表达后，肿瘤细胞对吉西他滨的敏感性得到恢复一些化疗药RRM1RRM2物的靶点为微管蛋白，如紫杉醇、长春碱类药物，它们通过与微管蛋白结合，影响微管的动态稳定性，干扰肿瘤细胞的有丝分裂过程当微管蛋白的氨基酸序列发生突变，或者微管相关蛋白的表达和功能改变时，化疗药物与微管蛋白的结合受到影响，导致肿瘤细胞对这类化疗药物产生耐药性在胰腺癌中，已发现某些微管蛋白的突变与紫杉醇耐药相关，这些突变改变了微管的结构和功能，使得紫杉醇无法正常发挥作用细胞凋亡受阻
2.
3.3细胞凋亡是一种程序性细胞死亡过程，对于维持机体的正常生理功能和内环境稳定至关重要在肿瘤化疗中，化疗药物通常通过诱导肿瘤细胞凋亡来发挥抗癌作用然而，当肿瘤细胞的凋亡通路受阻时，它们能够逃避化疗药物的诱导凋亡作用，从而产生化疗耐药在胰腺癌中，多条凋亡相关信号通路的异常与化疗耐药密切相关细胞淋巴瘤蛋白家族在细胞凋亡调控中起B-2Bel-2着核心作用蛋白家族包括抗凋亡蛋白如、等和促凋亡蛋白如、Bel-2Bel-2Bel-XL BaxBak等，它们之间的平衡决定了细胞是否发生凋亡在胰腺癌中，抗凋亡蛋白和的高Bel-2Bel-XL表达较为常见，它们可以与促凋亡蛋白相互作用，抑制线粒体膜电位的改变和细胞色素的释放，C从而阻断凋亡信号的传导，使肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性研究发现，在吉西他滨耐药的胰腺癌细胞中，和的表达水平显著升高，通过使用抑制剂或干扰技术降低Bel-2Bel-XL Bel-2RNA和的表达后，肿瘤细胞对吉西他滨的敏感性明显提高，细胞凋亡率增加半胱天冬Bel-2Bel-XL酶家族是细胞凋亡执行阶段的关键酶，它们通过级联反应切割一系列底物，导致细胞凋Caspase亡的发生在胰腺癌中，、和等关键的活性降低Caspase-3Caspase-8Caspase-9Caspase或表达缺失，可导致细胞凋亡受阻，进而引发化疗耐药一些肿瘤细胞可以通过上调凋亡抑制蛋白家族成员，如、和等，抑制的活性，从而抵抗化疗药物诱导IAP XIAPCIAP1CIAP2Caspase的凋亡在胰腺癌患者的肿瘤组织中，的高表达与患者对化疗药物的耐药性和不良预后相关XIAP化疗耐药机制是一个复杂的网络，药物外排增加、靶点改变和细胞凋亡受阻等多种机制相互交织、协同作用，共同导致了胰腺癌化疗耐药的发生深入研究这些机制，有助于寻找新的治疗靶点和策略，克服胰腺癌化疗耐药，提高患者的治疗效果和生存率
三、在胰腺癌化疗耐药中的功能研究SDF2L1在胰腺癌细胞中的表达情况
3.1SDF2L1为深入探究在胰腺癌化疗耐药中的潜在作用，本研究首先运用实时荧光定量SDF2L1PCR技术，对多种胰腺癌细胞系如、等中RT-qPCR PANC-1SW
1990.BxPC-3的表达水平进行检测同时，选取人正常胰腺导管上皮细胞系作为SDF2L1mRNA HPDE6-C7对照实验结果显示，在所有检测的胰腺癌细胞系中，的表达水平均显著高于正SDF2L1mRNA常胰腺导管上皮细胞系其中，细胞系中的表达水平相对最高，P
0.05PANC-1SDF2L1mRNA约为正常细胞系的倍；细胞系中的表达水平约为正常细胞系的
5.6SW1990SDF2L1mRNA
4.2倍；细胞系中的表达水平约为正常细胞系的倍BxPC-3SDF2L1mRNA
3.8o进一步采用蛋白质免疫印迹法检测上述细胞系中蛋白的表达水平，以Western blotSDF2L1作为内参蛋白进行标准化定量分析结果与检测结果一致，胰腺癌细胞系中B-actin RT-qPCR蛋白的表达水平明显高于正常胰腺导管上皮细胞系在细胞系中，SDF2L1P
0.05PANC-1o蛋白的表达量相对较高，其灰度值与灰度值的比值为细胞SDF2L1B-actin
0.85±
0.06;SW1990系中该比值为细胞系中该比值为
0.68±
0.05;BxPC-3而在正常胰腺导管上皮细胞系中，蛋白表达量较低，其灰度值与
0.59±
0.04HPDE6-C7SDF2L1灰度值的比值仅为B-actin
0.21±
0.03为了分析表达与胰腺癌患者临床特征之间的关系，本研究收集了例胰腺癌患者的肿SDF2L180瘤组织标本以及对应的癌旁正常组织标本，并通过免疫组织化学染色法检测蛋白的表达SDF2L1情况结果显示，在例胰腺癌组织标本中，高表达的标本有例，占比；而在80SDF2L15670%癌旁正常组织标本中，高表达的标本仅有例，占比差异具有统计学意义SDF2L1810%,P
0.01进一步将的表达水平与胰腺癌患者的临床病理参数进行关联分析，发现的表达SDF2L1SDF2L1水平与肿瘤的分期、淋巴结转移以及远处转移密切相关在分期为期的TNM P
0.05TNM HI-IVo患者中，高表达的比例为显著高于口期患者中高表达的比例SDF2L185%34/40,I-SDF2L155%有淋巴结转移的患者中，高表达的比例为明显高于无淋巴结转移22/40SDF2L182%37/45,患者中高表达的比例存在远处转移的患者中，高表达的比例为SDF2L153%19/35SDF2L1远高于无远处转移患者中高表达的比例而的表达水90%18/20,SDF2L163%38/60SDF2L1平与患者的年龄、性别、肿瘤大小以及组织学分级无明显相关性P
0.050沉默对胰腺癌细胞化疗耐药性的影响
3.2SDF2L1为了深入探究在胰腺癌化疗耐药中的具体作用，本研究运用小干扰技术，SDF2L1RNA siRNA构建了沉默的胰腺癌细胞模型首先，针对基因序列设计并合成了条特异性SDF2L1SDF2L13的序列同时设置阴性对照siRNA si-SDF2L1-1si-SDF2L1-2,si-SDF2L1-3,siRNA si-NCx通过脂质体转染法将这些分别转染至和胰腺癌细胞系中转染小时siRNA PANC-1SW199048o后，采用实时荧光定量技术检测细胞中的表达水平，筛选出干PCR RT-qPCR SDF2L1mRNA扰效率最高的序列结果显示，与组相比，转染组细胞中siRNA si-NC si-SDF2L1-2SDF2L1的表达水平显著降低，干扰效率达到以上，因此选择用于后续实验mRNA70%si-SDF2L1-2进一步采用蛋白质免疫印迹法检测蛋白的表达水平，结果与检Western blotSDF2L1RT-qPCR测结果一致，转染组细胞中蛋白的表达水平明显下降，表明沉si-SDF2L1-2SDF2L1SDF2L1默细胞模型构建成功将沉默的胰腺癌细胞组和阴性对照细胞组分别暴露于不同浓度的SDF2L1si-SDF2L1si-NC吉西他滨-氟尿口密咤等临床常用化疗药物中，作用不同gemcitabine.55-fluorouracil,5-FU时间后，采用法检测细胞增殖活性实验结果表明，在相同化疗药物浓度和作用时间下，CCK-8组细胞的增殖活性明显高于组细胞以吉西他滨为例，当吉西他滨浓度为si-SDF2L1si-NC10时，作用小时后，组细胞的增殖抑制率为而组细胞的增pmol/L48si-NC
45.6%±
5.2%,si-SDF2L1殖抑制率仅为随着吉西他滨浓度的增加，两组细胞的增殖抑制率均有所
21.3%±
3.5%P
0.01升高，但组细胞的增殖抑制率始终显著低于组细胞，表明沉默后胰腺si-SDF2L1si-NC SDF2L1癌细胞对吉西他滨的耐药性明显增强同样，在处理实验中，当浓度为时，作用小时后，组细胞的增5-FU5-FU50pmol/L72si-NC殖抑制率为而组细胞的增殖抑制率为
52.8%±
6.1%,si-SDF2L
130.5%±
4.3%也证实了沉默可导致胰腺癌细胞对的耐药性增强P
0.01,SDF2L15-FU为了进一步验证沉默对胰腺癌细胞化疗耐药性的影响，采用流式细胞术检测化疗药物处SDF2L1理后细胞的凋亡率将・组和组细胞分别用吉西他滨处理小时后，si SDF2L1si-NC10pmol/L48收集细胞，用双染法进行染色，然后通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况结Annexin V-FITC/PI果显示，组细胞的凋亡率为而组细胞的凋亡率仅为si-NC
28.5%±
3.2%,si-SDF2L
112.6%±
2.1%表明沉默后胰腺癌细胞对吉西他滨诱导的凋亡抵抗能力增强，进一步证明了P
0.01,SDF2L1沉默可促进胰腺癌细胞的化疗耐药性SDF2L1通过克隆形成实验检测沉默对胰腺癌细胞克隆形成能力的影响将组和SDF2L1si-SDF2L1si-NC组细胞分别以低密度接种于孔板中，培养天后，用结晶紫染色，计数克隆形成数结果610-14显示，组细胞形成的克隆数为个，而组细胞形成的克隆数为si-NC125±15si-SDF2L1210±20个表明沉默后胰腺癌细胞的克隆形成能力显著增强，即细胞的自我更新和增殖P
0.01,SDF2L1能力增强，这也是化疗耐药的重要表现之一过表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响
3.3SDF2L1为进一步探究在胰腺癌化疗耐药中的功能，本研究构建了过表达的胰腺癌细胞SDF2L1SDF2L1模型首先，人工合成含有基因编码序列的质粒，将其命名为同SDF2L1pcDNA
3.1-SDF2L1o时，设置空质粒对照组，即转染不含有基因的质粒采用脂质体转染法,将SDF2L1pcDNA
3.1和分别转染至和胰腺癌细胞系中转染PCDNA
3.1-SDF2L1pcDNA
3.1PANC-1SW199048小时后，运用实时荧光定量技术检测细胞中的表达水平，结果显PCR RT-qPCR SDF2L1mRNA示，与转染空质粒的对照组相比，转染的细胞中的表达水平pcDNA
3.1-SDF2L1SDF2L1mRNA显著升高，约为对照组的倍进一步通过蛋白质免疫印迹法检测
8.5Pv
0.01Western blotSDF2L1o蛋白的表达水平，结果同样表明，转染的细胞中蛋白的表达量明显pcDNA
3.1-SDF2L1SDF2L1增加，其灰度值与内参蛋白灰度值的比值为显著高于对照组的B-actin
1.25±
0.08,
0.42±
0.05这表明过表达细胞模型成功构建P
0.01,SDF2L1将过表达的胰腺癌细胞组和转染空质粒的对照细胞组分别暴露于SDF2L1SDF2L1-0E Vector不同浓度的吉西他滨-氟尿口密碇等化疗药物中，作用不gemcitabine,55-fluorouracil,5-FU同时间后，采用法检测细胞增殖活性实验结果表明，在相同化疗药物浓度和作用时间CCK-8下，组细胞的增殖活性明显低于组细胞以吉西他滨为例，当吉西他滨浓度SDF2L1-0E Vector为时，作用小时后，组细胞的增殖抑制率为而10pmol/L48Vector
32.5%±
4.1%,SDF2L1-OE组细胞的增殖抑制率为随着吉西他滨浓度的增加，两组细胞的增殖抑制
58.6%±
6.3%P
0.01率均有所升高，但组细胞的增殖抑制率始终显著高于组细胞，表明SDF2L1-OE VectorSDF2L1过表达可显著增强胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性同样在处理实验中，当浓度为时，作用小时后组细胞的增殖5-FU5-FU50|jmol/L72Vector抑制率为而组细胞的增殖抑制率为也证实了
38.8%±
5.2%,SDF2L1-OE
65.4%±
7.1%P
0.01,过表达能够提高胰腺癌细胞对的敏感性SDF2L15-FU为了进一步验证过表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响，采用流式细胞术检测化疗药物SDF2L1处理后细胞的凋亡率将组和组细胞分别用吉西他滨处理小SDF2L1-OE Vector10pmol/L48时后，收集细胞，用双染法进行染色，然后通过流式细胞仪检测细胞凋亡情Annexin V-FITC/PI况结果显示，组细胞的凋亡率为而组细胞的凋亡率仅为SDF2L1-OE
35.6%±
4.2%,Vector表明过表达后胰腺癌细胞对吉西他滨诱导的凋亡敏感性增强，进
18.2%±
3.1%P
0.01,SDF2L1一步证明了过表达可提高胰腺癌细胞的化疗敏感性SDF2L1通过克隆形成实验检测过表达对胰腺癌细胞克隆形成能力的影响将组和SDF2L1SDF2L1-OE组细胞分别以低密度接种于孔板中，培养天后，用结晶紫染色，计数克隆形成数Vector610-14结果显示，组细胞形成的克隆数为个，而组细胞形成的克隆数为Vector150±18SDF2L1-OE个表明过表达后胰腺癌细胞的克隆形成能力显著降低，即细胞的自我更85±12P
0.01,SDF2L1新和增殖能力受到抑制，这也是化疗敏感性增强的重要表现之
一、影响胰腺癌化疗耐药的机制探究SDF2L1与氧化还原酶活性及产生的关联
4.1SDF2L1ROS为了深入揭示影响胰腺癌化疗耐药的潜在机制，本研究聚焦于与氧化还原酶活SDF2L1SDF2L1性以及活性氧产生之间的关联氧化还原酶在细胞内的氧化还原平衡维持中发挥着关键作ROS用，而作为细胞代谢过程中产生的一类活性分子，其水平的变化与细胞的增殖、凋亡、衰老ROS等多种生物学过程密切相关在肿瘤细胞中，氧化还原酶活性的改变和水平的异常往往与化ROS疗耐药的发生发展紧密相连本研究首先通过构建沉默和过表达的胰腺癌细胞模型，利用特定的氧化还原酶活性检测SDF2L1试剂盒，检测细胞内氧化还原酶的活性实验结果显示，在沉默的胰腺癌细胞SDF2L1。
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