《微生物实验室安全操作》课件

微生物实验室安全操作主讲人王教授2024年7月目录实验室安全基础安全重要性、法规标准、实验室等级个人防护与操作规范PPE使用、手卫生、操作流程危害控制与废弃物处理微生物危害、气溶胶控制、废弃物管理应急处置与管理制度应急预案、事故分析、监督审计安全实验室的重要性50+32%安全事故人为失误2023年中国实验室安全事故数量源于操作不规范40+感染风险潜在致病微生物种类法规与标准总览国家法规国际标准《病原微生物实验室生物安全管GLP良好实验室规范理条例》GMP良好生产规范《实验室生物安全通用要求》认证体系ISO15189医学实验室认证CNAS认可微生物实验室等级介绍实验室P4埃博拉等特高致病性病原1实验室P3全国60余家，SARS等高危病原实验室P2一般致病菌，如沙门氏菌实验室P1低风险微生物，教学用微生物分级与风险等级风险等级代表微生物危害程度四级埃博拉病毒致命，无有效疫苗三级炭疽杆菌严重疾病，有治疗方法二级沙门氏菌可引起疾病，不易传播一级乳酸菌低风险，健康人群安全安全文化与责任制度实验室主任总体安全责任生物安全员日常管理与检查项目负责人实验过程安全监督实验操作人员严格遵守操作规程实验室设计与布局要点缓冲间设计气流控制设置洁污分区负压设计，由洁到污空气净化排水系统HEPA过滤，定期更换独立处理，防回流安全标识与分区管理标识系统区域划分•生物危害标志•实验区（红区）•进出指示牌•半污染区（黄区）•安全提示标语•清洁区（绿区）•紧急出口标志•辅助区（灰区）进入实验室的流程身份验证刷卡、人脸识别实名登记记录进入目的、时间更换实验服洁净区着装规范手部消毒七步洗手法个人防护装备（）总述PPE防护服手套护目镜面罩/•一次性连体服•乳胶/丁腈材质•防雾设计•A级密闭型•双层佩戴•密封性要求•B级液体防护•每4小时更换•防飞溅功能穿戴与脱卸规范PPE穿戴顺序鞋套防护服口罩眼罩手套→→→→检查确认密封性、舒适度、活动自由度脱卸顺序手套眼罩防护服口罩鞋套→→→→最终消毒全程手部卫生手卫生与消毒七步洗手法掌心、手背、指缝、指尖、拇指消毒剂选择75%酒精、

0.5%含氯消毒液时间要求洗手≥40秒，消毒≥15秒口罩及呼吸防护医用外科口罩口罩聚合物呼吸面具N95•三层结构•过滤效率≥95%•全面型防护•防飞沫传播•气密性好•配套滤毒盒•4小时更换•8小时有效•P3/P4实验室•一般实验操作•高风险操作•高致病性微生物常见的微生物危害传播途径空气传播、接触传播、飞沫传播接触传播风险老案例分析事故经过12019年X大学沙门氏菌泄漏2原因分析实验者操作不规范，未戴手套传播路径3通过接触污染物品，9人感染4处理结果实验室关闭整改，责任人处分仪器设备安全检查设备类型检查周期关键检查项离心机每日转子平衡、盖锁功能高压灭菌器每周压力表、安全阀生物安全柜每月气流流速、HEPA滤网培养箱每季度温控系统、灭菌功能实验耗材安全管理进货验收双人核查，登记入库分类存放按材质和用途，标签明确使用记录批号可追溯，出库登记废弃处理高压灭菌121℃，30分钟样本采集与出入库管理样本编码唯一标识，二维码追溯存储条件温度监控，分级保存双人核查出入库双签字确认记录保存电子+纸质备份，保存3年实验步骤中的安全关键点混合操作加热操作离心操作倒液操作避免气泡，缓慢混匀防干烧，观察沸腾平衡放置，盖紧管盖缓慢倾倒，防飞溅减少气溶胶产生的措施操作技术防护设备•避免剧烈摇晃•生物安全柜操作•离心前检查管盖•气溶胶密闭罩•缓慢打开容器•离心机密封转子•使用电动移液器•防溅面罩使用环境控制•负压房间•HEPA过滤系统•定期空气采样•紫外线消毒工作台与通风柜使用规范开启准备操作区域提前15分钟开启工作区内远离前窗10cm2紫外线消毒使用后清洁30分钟，记录时间75%酒精擦拭，由内到外废弃物分类与处理感染性废物锐器废物一般废物双层黄色医废袋硬质锐器盒黑色塑料袋高压灭菌处理标识清晰无微生物污染121℃，30分钟装满3/4封口日常办公垃圾专业机构回收专门通道运输常规处理生物废液处理锐器安全管理正确使用不回套针头，单手操作技术专用容器硬质防穿刺锐器盒，黄色警示标识扎伤应急挤出血液，流水冲洗，消毒，报告日常环境消杀区域消毒方式频率消毒剂工作台面擦拭每次实验前后75%酒精地面拖洗每日1000mg/L含氯消毒剂空气紫外线每日30分钟紫外灯（30W）设备表面喷洒擦拭每周过氧乙酸科学组织实验流程实验前计划物品准备一条龙操作完整记录详细操作步骤表耗材一次性准备齐全减少中断，连贯进行操作全程留痕冷链和样本运输一级包装二级包装防漏密封容器防震吸收材料标识标签三级包装UN3373标记，生物物质坚固外包装箱可疑暴露与泄漏应急预案现场隔离立即疏散，警示标识穿戴防护应急级别PPE装备泄漏处置吸附剂覆盖，消毒液浸泡废物处理专用容器，双层包装记录上报详细记录，24小时内报告感染报告与医学观察暴露确认记录时间、微生物种类、暴露方式小时内上报72填写《实验室职业暴露报告表》医学观察暴露后专科检查，专人负责跟踪预防处置必要时预防性用药或接种疫苗事故案例分析一事件概述原因分析整改措施2017年上海某高校研究生被感染•安全意识淡薄•全员安全再培训•违规操作流程•操作规程优化操作结核分枝杆菌时未在生物安全柜内进行•防护设备未使用•引入双人监督制•监督管理不到位•责任追究制度导致气溶胶吸入，造成职业感染事故案例分析二1事件背景国外P3实验室SARS病毒泄漏2主要原因生物安全柜维护不当，过滤失效3影响范围实验室9名工作人员感染，社区传播4经验教训设备维护管理至关重要，定期验证必不可少消防和电气安全6740%实验室火灾电气原因2023年全国实验室火灾事故数线路老化、超负荷使用25%可燃气体气体泄漏引发火灾爆炸化学品与消毒剂安全危险品分类标签管理消毒剂使用易燃、易爆、腐蚀品分GHS标识系统，危险性配制记录，浓度准确，区存放分类清晰轮换使用应急响应危化品泄漏处理流程，紧急电话120/119实验室进出管理电子门禁系统访客登记样本出入库身份识别，权限分级身份证登记，目的说明二维码追踪，双人确认实验人员健康管理入职体检定期检查基础健康评估肝肾功能、血常规、抗体滴度职业病监测疫苗接种专科医生评估3根据实验微生物类型培训计划与考核体系应急演练与持续改进演练计划每半年一次，针对性场景设计实施演练全员参与，角色分工明确评估分析问题识别，响应时间测量改进措施流程优化，设备更新信息化与追溯管理样本条码追踪系统，电子记录保存，权限分级访问，数据分析平台大型仪器特殊规范高通量测序仪自动化分析仪超低温冰箱•专人操作授权•日常校准程序•温度监测报警•样本前处理区隔离•质控品监测•备用电源连接•废液特殊处理•管路定期消毒•样本存储分区•定期维护记录•故障应急方案•定期除霜维护合同人员与外来厂家管理安全承诺书签署法律责任明确1安全培训考核2岗前培训不少于4小时临时证件管理专人陪同，定期审核工作监督记录4全程记录，验收确认特殊群体管理实习生孕期员工•强制安全培训•禁止接触高危病原•导师一对一带教•避免放射性物质•禁止单独操作•调整工作岗位•限制进入高风险区•减少长时间站立•每日工作记录审核•定期健康评估审计与自查制度1日常自查2月度检查班前班后检查表，记录存档安全员专项检查，设备维护记录交叉互查外部审计不同实验室间交叉检查，发现盲点年度第三方评估，合规性检查典型安全违规行为生物安全与社会责任科研诚信遵循伦理准则，不谋私利公共卫生实验安全直接关系社会稳定法律责任泄漏事故可追究刑事责任知识传播科学普及，消除公众恐慌前沿技术助力安全智能监控系统24小时实时监测环境参数远程报警装置多级警报，手机APP推送识别技术AI自动识别不规范操作行为未来发展与挑战1实验室发展P4计划2026年新增5家国家级P4实验室2新型病原体气候变化带来病原微生物变异加速3人工智能应用自动化实验系统减少人员暴露风险4国际合作全球生物安全网络建设与信息共享总结与安全宣誓安全宣誓安全第一，责任到人承诺书签署全员参与，个人责任明确安全文化3内化于心，外化于行课后安全答疑常见问题联系方式•微生物溢出如何处理？安全专线800-123-4567•高压灭菌失效怎么办？微信群扫描二维码•防护服破损应急方案？邮箱safety@lab.edu.cn•废物分类不清如何区分？网站lab-safety.edu.cn结束页与致谢授课团队支持单位生物安全专家组全体成员国家卫健委、科技部特别鸣谢后续培训实验室全体工作人员8月高级微生物操作技术实训。