《制作常见培养基》课件

制作常见培养基欢迎来到《制作常见培养基》专题培训本课程将详细介绍微生物培养基的制备技术与应用，帮助您掌握微生物学研究和实验室工作的基础技能培养基作为微生物生长的必要环境，其制备质量直接影响微生物研究的准确性和可靠性通过本课程，您将系统学习各类培养基的特点、配方和制备方法，为微生物学实验打下坚实基础本课程由资深微生物学专家团队精心设计，结合最新研究成果和实验室应用实践，确保内容的专业性与实用性让我们一起探索微生物培养的奥秘，提升实验技能内容概览培养基基础知识了解微生物培养基的定义、历史发展及重要性培养基分类掌握不同类型培养基的特点与适用范围培养基制备原理理解培养基配方设计的基本原则与科学依据常见培养基配方学习多种经典培养基的组成与特性制备技术与步骤掌握培养基制备的标准操作流程与技巧质量控制与储存了解培养基质量管理及正确保存方法什么是培养基？微生物生长的营养基础营养和环境条件的综合培养基是专门为微生物生长设优质培养基不仅提供基本营养计的营养物质混合物，提供微物质，还需考虑pH值、渗透生物生长繁殖所需的全部营养压、氧气供应等关键环境因和适宜的环境条件通过模拟素，以满足不同微生物的特殊微生物自然栖息地的条件，确生长要求，确保实验结果的准保其在实验室环境中能够正常确性和再现性生长微生物研究的基础工具作为微生物学研究中不可或缺的基础工具，培养基广泛应用于细菌、真菌、放线菌、病毒等各类微生物的分离、纯化、鉴定和保存工作，是微生物学实验的重要基石培养基的应用领域微生物学研究与教学在基础微生物学研究和教学领域，培养基是分离纯化微生物、观察其形态特征和生理特性的关键工具通过特定培养基的应用，研究人员能够揭示微生物的生长特性、代谢途径及遗传特征，推动微生物学科发展医学临床检验医学微生物学实验室利用各种选择性和鉴别性培养基分离鉴定病原微生物，为疾病诊断提供依据从血液、尿液、痰液等临床样本中分离培养病原体，是感染性疾病确诊的重要手段食品与环境安全在食品安全和环境监测中，特定培养基用于检测食品、水源和环境样本中的微生物污染通过标准化的培养基和方法，确保检测结果的可靠性，保障公众健康和生态安全生物制药与工业生产生物制药行业利用特殊培养基大规模培养产药微生物，生产抗生素、疫苗等医药产品同时，工业发酵生产中，优化设计的培养基是提高目标产物产量和质量的关键因素培养基的基本成分碳氮源微生物生长的能量与结构物质来源无机盐与矿物质提供细胞结构与代谢必需的元素生长因子维生素、氨基酸等辅助生长物质特殊添加剂指示剂、选择性抑制剂等功能性组分碳源通常采用各种糖类，如葡萄糖、麦芽糖等，为微生物提供能量和碳架构氮源包括蛋白胨、酵母提取物等，提供氨基酸和蛋白质合成所需的氮元素矿物质元素如钾、镁、铁、锰等以离子形式存在，参与酶的活化和细胞结构形成生长因子是微生物自身不能合成但生长必需的有机物质，对于营养需求复杂的微生物尤为重要按化学成分分类天然培养基含有自然提取物，成分不完全确定合成培养基完全由化学纯品组成，成分明确可控半合成培养基结合两者特点，既有明确成分又含自然提取物培养基按化学成分可分为三大类型，各有其独特优势和应用场景合成培养基成分明确，便于研究微生物代谢途径；天然培养基营养丰富，适合生长需求复杂的微生物；半合成培养基则兼具两者优点选择适当的培养基类型取决于实验目的和培养对象对于代谢研究，通常选择合成培养基；对于难培养的微生物，则可能需要天然培养基提供的复杂营养成分合成培养基成分明确可控适用于自养生物代谢研究理想选择合成培养基由纯化学物特别适合培养光能自养在微生物代谢和营养需质组成，如无机盐、维微生物，如蓝藻和某些求研究中，合成培养基生素和氨基酸等，其每光合细菌这些微生物的明确成分使研究人员种成分的化学组成和含能利用简单的无机物质能够精确控制变量，观量都是精确已知的，便和光能进行生长，在合察特定营养元素对微生于调控和标准化成培养基中表现良好物生长的影响天然培养基常见天然提取物主要营养成分适用微生物类型肉汤/肉提取物氨基酸、多肽、B族维大多数细菌生素酵母提取物B族维生素、氨基酸、酵母和营养需求苛刻菌核酸种蛋白胨多种氨基酸、小肽广谱应用血液/血清生长因子、蛋白质苛养型病原菌天然培养基虽然化学成分不完全确定，但具有营养丰富、适用范围广的特点通过使用各种天然提取物，这类培养基能满足包括苛养型微生物在内的多种微生物的营养需求在实际应用中，天然培养基因其良好的培养效果和制备简便性，成为微生物实验室最常用的培养基类型但其缺点是批次间差异可能较大，不利于实验的精确重复按物理状态分类固体培养基半固体培养基液体培养基通过添加1-7%的琼脂或10-20%的明胶含有较低浓度

0.5-

0.7%的琼脂，呈现软不含任何凝固剂的流动状培养基微生使培养基凝固固体培养基表面坚实平凝胶状态微生物可在其中三维空间移物在其中均匀分散生长，通常表现为混滑，微生物能够在其上形成可见的分离动，但移动速度受到一定限制浊或形成沉淀、菌膜等菌落主要用途主要用途主要用途•检测微生物的运动性•大量培养微生物•分离纯化不同菌种•观察厌氧生长情况•发酵和代谢产物研究•观察菌落形态特征•保存某些特殊菌种•富集培养特定微生物•制备斜面和平板培养固体培养基平板培养最常用的固体培养基形式，将液态培养基加入适量琼脂后倒入平板培养皿中凝固平板琼脂表面光滑平整，便于微生物在表面生长形成分离的菌落，是分离纯化微生物的重要工具斜面培养将含琼脂的培养基倒入试管中，使其在倾斜状态下凝固，形成斜面斜面琼脂培养提供了更大的表面积，适合需要大量培养的情况，也便于观察菌落特征和长期保存菌种穿刺培养在试管中竖直凝固的琼脂培养基，用于研究微生物在不同氧气浓度条件下的生长情况通过直接穿刺接种，可以观察微生物在琼脂不同深度的生长特性，判断其氧气需求液体培养基快速生长优势液体培养基中微生物能够均匀分散，充分接触营养物质，代谢废物也容易扩散，因此通常能达到较高的生长速率和细胞密度这使液体培养成为大规模培养微生物的首选方式生长特征观察微生物在液体培养基中的生长表现出多种现象，如均匀混浊、表面菌膜形成、底部沉淀或颗粒状生长等这些生长特征往往成为鉴别不同微生物的重要依据代谢产物收集便利液体培养便于收集微生物产生的代谢产物，如酶、抗生素、色素等通过简单的离心或过滤，可以分离微生物细胞和含有目标产物的上清液，便于后续提取纯化通气与搅拌要求液体培养通常需要适当的通气和搅拌以提供氧气并均匀分布营养物质对于需氧微生物，摇床培养或生物反应器中的机械搅拌和通气系统至关重要按功能分类基础培养基提供微生物生长的基本营养需求选择性培养基促进特定微生物生长同时抑制其他微生物鉴别培养基通过指示剂显示微生物的生化特性运输培养基用于保存和运输临床样本富集培养基促进特定微生物的快速增长和繁殖每种功能类型的培养基都有其特定的应用场景基础培养基如营养肉汤适合培养无特殊营养需求的微生物；选择性培养基如麦康凯琼脂用于肠道菌检测；鉴别培养基如EMB琼脂可区分大肠杆菌和其他肠道菌选择性和差异性培养基选择性培养基原理差异性培养基原理选择性培养基通过添加特定的抑制剂或创造特殊生长条件，有选差异性培养基含有能够反映微生物特定生化反应的指示物质，使择地促进目标微生物生长，同时抑制其他微生物这些抑制剂包不同微生物在培养基上呈现可辨别的特征，如菌落颜色、形态或括抗生素、染料、胆盐、高盐浓度等周围环境变化等常见选择性培养基举例常见差异性培养基举例•麦康凯琼脂含胆盐和晶紫，抑制革兰阳性菌•血琼脂显示溶血反应类型•沙氏琼脂pH值低，适合真菌生长•伊红-亚甲蓝琼脂区分乳糖发酵菌•环丙沙星血琼脂含抗生素，用于特定耐药菌检测•三糖铁琼脂检测硫化氢产生和碳水化合物发酵按制备方法分类脱水合成培养基各别成分制备干燥粉末状，使用前加水配制单独称量各组分进行混合配制•储存时间长•可根据需要调整即用型培养基按需培养基•便于运输•成本较低预先制备完成，可直接使用•使用灵活•适合特殊研究根据特定实验目的定制配方•方便快捷•高度针对性•减少污染风险•满足特殊需求•质量稳定•研究灵活性强1即用型培养基天60-9015-35%

99.5%保质期成本增加质量合格率常温保存的即用型培养基通常有2-3个月的有效与自制培养基相比，即用型培养基价格略高，但商业化即用型培养基通过严格质控，确保高度一期，而冷藏保存可延长至6个月节省了人力和时间成本致性和可靠性即用型培养基主要包括预先装载于培养皿、培养瓶或试管中的固体、半固体或液体培养基这类培养基经过严格的质量控制流程，可直接使用，无需额外制备步骤，大大简化了实验操作虽然价格相对较高，但即用型培养基节省了实验室人力和时间成本，降低了污染风险，适合临床检验等对时效性和标准化要求高的场景对于需要大量重复操作的实验室，即用型培养基是提高工作效率的理想选择商品化脱水合成培养基商品化脱水合成培养基是经过精确配方混合并干燥处理的培养基粉末，使用前只需按照规定比例加水溶解，经过灭菌处理即可使用这类培养基通常由专业生产厂家按照国际标准生产，成分精确，质量稳定脱水培养基的主要优势是储存期长（通常1-2年），运输和保存方便，同时保证了不同批次产品的一致性对于常规微生物检测和研究，脱水培养基提供了兼顾便利性和性价比的理想选择各别成分制备的培养基原料准备根据配方准确称量各项原材料，确保纯度和质量符合要求常用原料包括碳源（如葡萄糖）、氮源（如蛋白胨）、无机盐、维生素和生长因子等混合溶解按照特定顺序将各成分加入适量蒸馏水中，充分搅拌溶解某些难溶组分可能需要加热或调整pH值辅助溶解，避免形成沉淀调整与分装调整培养基的pH值至所需范围，通常使用pH计精确测量调整完成后将培养基分装到适当的容器中，准备进行灭菌处理灭菌与完成根据培养基性质选择适当的灭菌方法，如高压蒸汽灭菌或过滤除菌灭菌后添加热敏感组分（如抗生素），完成培养基制备培养基制备基本原则精确计量原则培养基的各组分必须按照配方精确称量，误差应控制在允许范围内对于微量成分，应使用分析天平确保准确性培养基的总体积应通过标准量筒或量杯精确测量，以确保各组分浓度符合要求无菌操作原则培养基制备的全过程应遵循无菌技术要求，避免外源微生物污染工作台面应预先消毒，使用的器皿需经过适当灭菌，操作人员应穿戴清洁防护装备分装和后处理阶段尤应注意防止污染pH值控制原则培养基的pH值应根据目标微生物的生理需求进行调整，通常在制备完成但灭菌前进行应注意灭菌过程可能导致pH值变化，因此在灭菌后可能需要再次检查和调整适当灭菌原则根据培养基成分选择合适的灭菌方法，避免不必要的成分降解含有热敏感成分的培养基应考虑分步灭菌或过滤除菌灭菌时间和温度应严格控制，以确保既达到灭菌效果又不过度破坏培养基成分培养基制备通用步骤准备与称量准确称量各组分原料并记录使用适当精度的天平，确保称量误差在允许范围内对于微量成分，可先配制母液再按比例添加，以提高准确度溶解与混合将称量好的成分按特定顺序加入适量蒸馏水中，充分搅拌使其完全溶解某些成分如琼脂需加热至沸腾才能完全溶解，但应避免过度加热导致成分变性pH值调整使用pH计测量培养基pH值，并用NaOH或HCl溶液调整至目标范围调整过程中应缓慢添加并不断搅拌，避免局部pH值过高或过低分装与标记将调整好pH的培养基分装到适当容器中，如试管、培养瓶或培养皿分装量应考虑灭菌后可能的蒸发损失每个容器应清晰标记培养基类型、制备日期和批号灭菌处理根据培养基性质选择高压蒸汽灭菌121℃,15-20分钟或过滤除菌含有热敏感成分的培养基应考虑分步灭菌，先灭菌基础部分，冷却后再无菌添加热敏感成分冷却与保存灭菌后的培养基应在适当温度下冷却制备固体平板时，待培养基冷却至约50℃时倒入平板中培养基应在适当条件下保存，通常为4℃避光保存，并注明有效期称量技术天平选择与校准根据称量精度要求选择合适的天平常规培养基成分可使用精度为

0.01g的电子天平，而微量成分则需使用精度为

0.001g或更高的分析天平使用前应进行校准，确保读数准确环境条件控制称量应在恒温、无振动、无气流干扰的环境中进行精密天平特别需要稳定的环境条件，避免温度波动、气流和静电干扰导致读数不稳定称量容器选择根据物质特性选择合适的称量容器，如称量纸、称量舟或小烧杯吸湿性物质应使用预先干燥的容器并迅速完成称量操作，减少水分吸收批量换算技巧小批量培养基制备时，需按比例计算各组分用量公式为所需量=原配方量×实际总体积/原配方总体积计算结果应保留适当小数位，确保准确性灭菌技术1高压蒸汽灭菌法最常用的培养基灭菌方法，在121℃、15-20分钟条件下进行适用于大多数培养基，但可能导致某些成分降解培养基应留有足够空间避免溢出，且容器不宜过满干热灭菌法主要用于玻璃器皿和金属工具灭菌，通常在170-180℃下保持2小时此方法不适用于液体和含水物质，因此不直接用于培养基灭菌，但用于准备无菌容器过滤除菌法使用

0.22μm孔径滤膜过滤液体，物理去除微生物适用于热敏感成分如抗生素、维生素和某些糖类此方法不改变物质成分，但要求待灭菌液体不含颗粒杂质紫外线与辐射灭菌紫外线主要用于表面灭菌和工作环境消毒，不适合培养基本身γ射线灭菌则用于工业化大规模生产的商业培养基，实验室较少使用质量控制外观检查标准合格培养基应具有特定的颜色、透明度和均匀性固体培养基表面应平滑无气泡，厚度均匀；液体培养基应澄清透明，无沉淀和悬浮物变色、浑浊、异味等均为不良迹象，应弃用pH值测定要求培养基最终pH值应符合特定微生物生长需求测定时应使用校准的pH计，温度应控制在25℃对于固体培养基，可取少量液化样品测定灭菌前后均应检查pH值，记录可能的变化无菌性验证方法随机抽取样品置于适当温度通常37℃培养24-48小时，观察是否有微生物生长迹象也可采用特定微生物检测方法，如滤膜法或平板计数法，确认培养基本身未被污染性能测试标准使用标准菌株进行接种测试，验证培养基的生长支持能力选择性培养基还需测试其选择性和抑制效果记录菌落形态、数量、大小和特征反应，与预期结果对比评估培养基储存条件温度管理光照防护湿度与干燥防护大多数配制好的培养基应储存许多培养基成分如色素和指示固体培养基尤其是平板培养基在5°C±3°C的冰箱中温度过剂对光敏感，长期光照会导致容易失水干燥储存时应倒置高会加速培养基成分降解，而分解或变性培养基应存放在并密封，可使用塑料袋或保鲜冷冻则可能破坏培养基结构不透明容器中或使用遮光材料膜包裹储存环境湿度应适配有温度监控系统的专用冰箱包裹，避免阳光直射和强光照中，避免过度干燥导致培养基是理想选择射龟裂保质期管理所有培养基均应标明制备日期和有效期一般而言，液体培养基可保存3-4周，固体平板保存2-4周，琼脂斜面可保存4-6周超过保质期的培养基应弃用以确保实验结果可靠性培养基制备LBLB培养基配方（1升）培养基特性LB培养基Luria-Bertani培养基是细菌培养中最常用的通用性培LB培养基营养丰富，制备简便，是分子生物学和微生物学实验中养基，特别适用于大肠杆菌等肠杆菌科细菌的培养最常用的基础培养基其pH值通常调整为

7.0-

7.2，适合大多数细菌的生长成分用量功能应用范围胰蛋白胨10g氮源•重组DNA技术中的宿主菌培养•蛋白质表达系统酵母提取物5g维生素和生长因子•细菌生长研究•菌种保存氯化钠10g渗透压调节LB培养基可根据需要添加抗生素（如氨苄青霉素、卡那霉素等）蒸馏水填充至1L溶剂用于筛选携带抗性标记的菌株固体LB平板是分离纯化和保存菌种的理想选择琼脂固体用15g凝固剂培养基制备步骤LB材料准备与称量准确称取胰蛋白胨10g、酵母提取物5g和氯化钠10g若制备固体培养基，另外称取琼脂15g使用干净无菌的容器和工具，避免交叉污染溶解混合将称量好的成分加入约800ml蒸馏水中，搅拌至完全溶解溶解过程可使用磁力搅拌器，必要时可轻微加热但不要沸腾，以免蛋白质变性pH值调整使用校准好的pH计测量培养基pH值，用1M NaOH或1M HCl调整至

7.0-

7.2调整过程中应缓慢添加碱或酸，并不断搅拌以确保均匀定容与分装将溶液转移到量筒中，用蒸馏水定容至1000ml充分混匀后分装到适当容器中，如培养瓶、三角烧瓶或试管，每个容器不超过2/3容积5灭菌处理将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中，121℃高压灭菌15-20分钟灭菌过程中应确保压力和温度维持稳定，避免灭菌不充分6冷却与后处理灭菌后培养基冷却至约50℃（可手持感觉温热不烫）时，可添加热敏感物质如抗生素制备平板时在此温度下倒入培养皿中，约15-20ml每个90mm平板培养基制备YPD3配方与材料准备基础培养基溶解基础培养基灭菌YPDYeast ExtractPeptone将酵母提取物和胰蛋白胨加入将配制好的基础培养基分装到合适Dextrose培养基是酵母菌培养的950ml蒸馏水中，使用磁力搅拌器容器中，注意不要超过容器容积的常用培养基准备以下材料酵母充分搅拌溶解若制备固体培养2/3在121°C条件下高压灭菌30提取物10g、胰蛋白胨20g、葡萄基，此时加入琼脂并持续搅拌加热分钟，确保完全灭菌灭菌后视情糖20g、蒸馏水1L如制备固体培至完全溶解透明加热过程应避免况可能需要再次检查pH值是否在养基，另需琼脂15-20g所有材料局部过热导致成分变性适宜范围（

5.5-

6.0）应保持干燥并准确称量葡萄糖溶液制备成分混合与最终处理将20g葡萄糖溶于50ml蒸馏水中，充分搅拌使其完全溶待基础培养基冷却至约50-60°C时，在无菌条件下加入灭解葡萄糖溶液可单独进行高压灭菌（121°C，15分钟）菌或过滤后的葡萄糖溶液，轻轻混合均匀若制备平板，或通过

0.22μm滤膜进行过滤除菌分开处理可避免美拉趁温热将混合好的培养基倒入无菌培养皿中，每个90mm德反应导致培养基变色平板约20ml培养基制备步骤YPD第一步称量与溶解精确称取胰蛋白胨20g和酵母提取物10g，加入950ml蒸馏水中使用磁力搅拌器充分搅拌，必要时轻微加热以促进溶解溶解过程应确保无颗粒残留，溶液呈现均匀透明状态第二步灭菌处理将基础培养基分装到适当容器中，放入高压灭菌器中在121°C条件下灭菌30分钟灭菌时应确保压力和温度保持稳定，灭菌完成后自然冷却至操作温度灭菌过程中培养基可能会变色，这属于正常现象第三步葡萄糖处理另外准备20g葡萄糖溶于50ml蒸馏水中的溶液可以选择高压灭菌或使用

0.22微米孔径的滤膜进行过滤除菌过滤法更为推荐，因为可以避免高温导致的糖类褐变，保持培养基颜色清亮固体培养基制备要点琼脂添加量精确控制固体培养基的硬度取决于琼脂添加浓度常规平板通常添加

1.5-2%的琼脂，而半固体培养基仅添加

0.5-

0.7%琼脂质量直接影响培养基的透明度和硬度，应选择微生物学专用琼脂，避免使用食用琼脂琼脂充分溶解技巧琼脂应先在水中充分浸泡15-30分钟后再加热溶解，这样可以避免局部过热和结块加热时应缓慢并不断搅拌，直至溶液完全透明微波加热时应分多次短时间加热，避免溶液突沸溢出倾倒平板温度控制含琼脂的培养基灭菌后应冷却至约50°C再倒入培养皿，这个温度既能保持琼脂液态又不会损伤热敏感成分温度过高会导致水汽过多在盖内凝结；温度过低则会导致琼脂凝固不均匀，形成条纹平板凝固与储存要点倒好的平板应在洁净工作台上自然凝固，避免晃动凝固后应倒置保存（琼脂面朝上），防止冷凝水滴落到培养基表面储存前可在室温下放置30分钟，让多余水分蒸发，减少污染风险液体培养基制备要点溶解与混合技巧灭菌与冷却注意事项储存与使用前检查液体培养基的均匀性是确保实验结果一液体培养基的灭菌是确保无菌状态的关液体培养基在储存和使用过程中需特别致性的关键所有成分应彻底溶解，无键步骤，但需注意以下事项注意可见颗粒或沉淀对于难溶解的成分，•高压灭菌时容器不应超过2/3容积，•储存时应拧紧盖子，防止污染和蒸发可采取以下措施防止溢出•使用磁力搅拌器长时间低速搅拌•灭菌后应迅速冷却，减少成分降解•长期储存的培养基使用前应检查有无•按特定顺序添加成分，避免沉淀形成浑浊或沉淀•含热敏感成分的培养基应分步灭菌•若观察到异常颜色变化或沉淀，应弃•大容量培养基需延长灭菌时间确保中•必要时轻微加热辅助溶解，但避免过用心部分灭菌充分热•使用前可在室温放置一段时间，使溶•某些成分可预先溶解成浓溶液再按比解的氧气释放例添加特殊添加剂处理添加剂类型处理方法添加时机注意事项抗生素配制浓缩液，过培养基冷却至避免反复冻融降滤除菌50°C以下低活性血液无菌采集，防凝培养基冷却至45-避免温度过高导处理50°C致溶血维生素现用现配，过滤培养基冷却至室避光操作，防止除菌温氧化指示剂配制浓缩液依据稳定性决定某些可在灭菌前添加选择性抑制剂按产品说明配制多数在灭菌后添严格控制浓度避加免过量特殊添加剂的正确处理对培养基质量至关重要抗生素通常需冷藏保存，使用前配制新鲜溶液并过滤除菌；血液需从健康动物无菌采集，添加时温度控制尤为关键；维生素和生长因子多为热敏感物质，应采用过滤除菌并在培养基完全冷却后添加常见问题与解决方案培养基不凝固培养基浑浊或沉淀可能原因琼脂添加量不足、琼脂质量问题、pH值过低或过高导致琼脂不凝固、过可能原因成分间化学反应形成不溶性沉淀；灭菌不充分导致细菌生长；pH值不适度加热破坏琼脂结构导致某些成分析出；储存温度不当解决方案精确称量琼脂粉末（通常为

1.5-2%）；使用微生物学级琼脂；控制pH解决方案调整成分添加顺序；确保彻底灭菌（121℃，15-20分钟）；调整最终值在6-8范围内；避免反复加热或过度加热培养基；必要时可增加琼脂用量pH值至适宜范围；按照要求储存培养基（通常4℃避光）培养基变色异常微生物生长异常可能原因美拉德反应（糖与氨基酸反应）；pH指示剂变色；成分氧化；微生物污可能原因培养基营养不良；pH值不适；抑制剂过量；必需生长因子缺乏；培养基染老化或退化解决方案糖类与氨基酸类成分分开灭菌；避免过度加热；注意某些培养基灭菌后解决方案检查培养基配方完整性；验证pH值是否适合目标微生物；调整选择性成颜色变化属正常现象；存储时避光，减少氧化变色分浓度；添加必要的生长因子；使用新鲜制备的培养基培养基配方营养琼脂营养琼脂配方（升）营养琼脂特性与应用1营养琼脂是一种通用型固体培养基，适用于非苛养型微生物的培成分用量功能养它具有以下特点牛肉提取物3g维生素与生长因•成分简单，制备方便子•适合大多数常见细菌生长蛋白胨5g氨基酸与短肽•透明度好，便于观察菌落特征•无选择性，允许多种微生物生长氯化钠8g渗透压调节主要应用领域琼脂15g凝固剂•微生物菌株纯化与保存蒸馏水至1L溶剂•菌落计数与形态观察•作为其他选择性培养基的基础最终pH值调至

7.2-

7.4（25°C）•教学实验与常规微生物检测培养基配方麦康凯琼脂成分组成选择机制胆盐

1.5g、蛋白胨17g、乳糖10g、中性红胆盐和晶紫抑制革兰阳性菌，允许革兰阴性

0.03g、晶紫

0.001g、氯化钠5g、琼脂肠道菌生长

13.5g，加蒸馏水至1L应用领域鉴别原理4临床标本中肠道病原菌的分离与鉴别，如沙乳糖发酵菌形成粉红至红色菌落，非乳糖发门菌、志贺菌等酵菌形成无色透明菌落麦康凯琼脂是一种既有选择性又有鉴别性的培养基，主要用于肠道菌科细菌的分离与初步鉴定其中胆盐和晶紫作为选择性成分，抑制大多数革兰阳性菌和一些敏感的革兰阴性菌生长；乳糖和中性红则作为鉴别指示系统，可区分乳糖发酵菌和非乳糖发酵菌制备麦康凯琼脂时需注意pH值控制在

7.1±

0.2，灭菌条件为121℃，15分钟培养基呈红紫色至褐红色，略带浑浊适用于粪便、尿液等临床标本的病原菌检测，是医学微生物学实验室的常用培养基血液琼脂培养基制备2基础培养基准备培养基冷却血液添加通常选用营养琼脂或胰蛋白胨大豆将灭菌后的基础培养基在水浴中冷在无菌条件下，向冷却的基础培养琼脂作为基础培养基按照标准配却至45-50°C此温度区间非常关基中加入5-10%的脱纤维血液（通方制备基础琼脂，调整pH值至

7.2-键温度过高会导致血液中红细胞常使用绵羊、马或兔血）添加过

7.4，分装后高压灭菌121℃，15分溶解（热溶血），生成有毒产物；程应在生物安全柜内进行，防止血钟基础培养基质量直接影响最终温度过低则会导致琼脂过早凝固，液样本污染和操作者暴露于潜在病血琼脂的性能，应确保无菌和均血液无法均匀分布应使用温度计原体血液须经过脱纤维处理，避匀精确监控免凝固5混合与倒板凝固与储存添加血液后，轻轻旋转容器使血液与基础培养基充分混合倒好的血琼脂平板应在平整表面静置凝固，避免震动待均匀，避免剧烈摇晃产生气泡混合均匀后，立即将培养培养基完全凝固后约30分钟，将平板倒置琼脂面朝基倒入无菌培养皿中，每个标准培养皿约15-20ml倒板上，减少水分凝结血琼脂平板应密封后在2-8°C避光保时动作要平稳连贯，防止培养基表面形成气泡存，使用期限通常为2-4周培养基值调整pH特殊微生物培养基厌氧菌培养基放线菌培养基真菌培养基厌氧菌对氧气敏感，需要特殊培养环境放线菌生长较慢，需要特殊培养条件常真菌培养基如沙氏葡萄糖琼脂（SDA）特典型的厌氧菌培养基添加还原剂如硫代硫用培养基如高氏一号培养基含有特殊碳源点是pH值较低（

5.6±

0.2），常添加抗生酸钠、半胱氨酸或抗坏血酸，降低氧化还和氮源组合培养基通常pH值较高（

7.2-素如氯霉素抑制细菌生长培养基中糖浓原电位部分培养基含有氧化还原指示剂

7.6），含有抗真菌剂如环己酰胺抑制真菌度较高，多使用复杂碳源如麦芽提取物（如甲基蓝或雷萨唑啉）显示厌氧状态过度生长培养时间较长，通常需7-14天培养温度通常为25-28℃，比细菌培养温度培养时需使用厌氧罐或厌氧培养系统排除观察明显菌落形成低，培养时间要求更长氧气最小培养基M9M9培养基基本配方（1升）制备步骤M9最小培养基是一种合成培养基，仅含微生物生长所需的最基本成分成分用量其制备需要分步进行Na₂HPO₄·7H₂O

12.8g

1.首先配制5×M9盐溶液将Na₂HPO₄·7H₂O、KH₂PO₄、NaCl和NH₄Cl溶于800ml水中，调整至pH

7.4，定容至1L后高压灭菌KH₂PO₄3g

2.单独制备并灭菌以下溶液20%葡萄糖溶液、1M MgSO₄溶液、1MCaCl₂溶液NaCl

0.5g

3.在无菌条件下，将200ml5×M9盐溶液加入700ml无菌水中NH₄Cl1g

4.添加灭菌后的葡萄糖、MgSO₄和CaCl₂溶液葡萄糖20%溶液20ml

5.补充无菌水至1L，混匀即可使用M9培养基广泛用于分子生物学研究，特别适用于筛选营养缺陷型突变株MgSO₄1M溶液2ml和进行生物合成途径研究因其成分简单明确，也是研究微生物最低营养CaCl₂1M溶液

0.1ml需求的理想选择蒸馏水至1L培养基（马铃薯葡萄糖琼脂）PDA天

5.6±

0.23-5最适pH值平均培养时间PDA培养基的酸性环境有利于真菌生长，同时抑大多数真菌在PDA培养基上3-5天可形成明显菌制大多数细菌落25-28°C最适培养温度略低于细菌培养温度，更适合真菌的生长发育马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基是用于真菌培养的经典培养基，其制备方法简便且成本经济标准配方包括马铃薯提取物（通常由200g新鲜马铃薯煮沸提取获得）、20g葡萄糖和15-20g琼脂，加水至1升PDA培养基的特点是营养丰富且简单，葡萄糖提供碳源，马铃薯提取物提供多种维生素和微量元素由于其独特的营养组成，PDA培养基特别适合促进真菌的菌丝生长和产孢，使其成为真菌分类学和食品、环境真菌检测的首选培养基可通过添加抗生素（如氯霉素、链霉素）进一步提高其对细菌的选择性缓冲系统在培养基中的应用缓冲系统原理常用缓冲物质缓冲容量考量缓冲系统能够抵抗pH值变化，磷酸盐是最常用的培养基缓冲缓冲容量取决于缓冲物质浓度由弱酸/弱碱及其盐组成在微系统，有效范围pH

5.8-

8.0；和类型，通常需根据微生物代生物培养过程中，代谢产物会TRIS缓冲适用于pH

7.0-

9.0；谢特性调整发酵型微生物产改变培养基pH值，缓冲系统通HEPES缓冲适用于pH

6.8-酸多，需较强缓冲能力；长期过接受或释放氢离子来维持相

8.2，生物相容性好；柠檬酸盐培养也需增加缓冲容量；但过对稳定的pH环境，确保微生物缓冲适用于低pH环境pH

3.0-高浓度可能影响渗透压，抑制持续生长

6.2，常用于真菌培养基微生物生长灭菌注意事项某些缓冲物质对热不稳定，如HEPES在高压灭菌中可能分解部分缓冲系统在高温下可能形成沉淀，如高浓度磷酸盐与钙镁离子共存时这些情况下应考虑分步灭菌或过滤除菌处理选择性培养基的制作原理选择机制抑制非目标微生物同时允许目标微生物生长微生物差异性利用微生物间的生理生化特性差异选择性因子3抗生素、染料、胆盐、pH值、高盐等特定成分浓度平衡选择性因子浓度需精确控制，确保选择效果选择性培养基通过添加特定成分创造有利于目标微生物而不利于其他微生物的生长环境例如，麦康凯琼脂含有胆盐和晶紫抑制革兰阳性菌，而允许革兰阴性肠道菌生长；沙氏培养基的低pH环境有利于真菌而抑制大多数细菌制作选择性培养基时，关键在于选择适当的选择性因子并控制其浓度浓度过高可能抑制所有微生物生长，浓度过低则选择性不足选择性因子的添加时机也很重要，某些抗生素等热敏感选择因子需在培养基冷却后添加质量控制应使用标准菌株验证培养基的选择效果和生长支持能力差别培养基的制作原理可视化指示系统通过颜色变化直观显示微生物特性生化反应基质提供特定底物检测微生物代谢能力pH指示剂反映微生物代谢产物引起的pH变化特殊营养成分验证微生物特定营养物质利用能力差别培养基的核心原理是通过添加特定指示物质，使不同微生物在培养基上产生可辨别的特征变化这些指示系统通常基于微生物的代谢途径、酶活性或对特定物质的利用能力差异例如，伊红-亚甲蓝EMB琼脂中的染料可显示革兰阴性菌对乳糖的发酵能力；血琼脂则通过溶血反应类型区分不同链球菌设计差别培养基时，需选择能够稳定表达的微生物特性作为鉴别依据，并确保指示系统的灵敏度和特异性指示剂的稳定性也是关键因素，某些指示剂可能受pH值、温度或光照影响而失效制备过程中需严格控制基础培养基的质量和指示剂的添加条件，以确保鉴别结果的准确性和一致性培养基质量评价方法物理性状检查化学特性检测生物学检测对培养基的外观、物理特性进行全面评精确测定培养基的化学参数使用标准菌株验证培养基性能估•pH值使用校准的pH计测定，误差•菌落计数接种已知浓度的标准菌•颜色应符合该类培养基特征，无异不超过±

0.2株，计算恢复率常变色•营养成分含量特定情况下可检测碳•抑制率测定检验选择性培养基对非•透明度液体培养基应清澈透明，无源、氮源含量目标菌的抑制效果浑浊或沉淀•选择性因子浓度如抗生素、抑制剂•生长曲线分析测定微生物在培养基•固化程度固体培养基琼脂浓度适等的含量验证中的生长动力学宜，表面平滑无裂缝•渗透压使用渗透压计测定，确保适•典型反应检测验证鉴别培养基中预•厚度平板培养基厚度均匀通常合目标微生物期的生化反应4±

0.5mm•水分活度影响微生物生长的关键参•微生物形态观察确认培养基对微生•水分表面无过多水分凝结或过度干数物特征的影响燥培养基的灭菌确认物理参数监测化学指示剂应用高压灭菌过程中应监控并记录关键物理参数，包括温度应达到并维持化学指示带或指示卡片含有在特定温度和时间条件下会变色的化学物121°C、压力通常为103kPa或15psi以及时间一般培养基为15-20分质最常用的是灭菌胶带，在达到灭菌条件后显示条纹或变色更复钟现代灭菌器配备自动记录系统，可存储每个灭菌周期的完整数杂的化学指示剂可同时响应温度、时间和蒸汽存在，提供多参数确据，便于追溯和验证认，如Bowie-Dick测试用于验证蒸汽渗透性生物指示剂测试无菌培养试验生物指示剂包含高度耐热的嗜热脂肪芽孢杆菌孢子这些孢子比常见最直接的灭菌确认方法是无菌培养试验从灭菌后的培养基中随机取微生物更难灭活，因此可作为灭菌效果的可靠指标使用时将生物指样，置于适宜温度通常25°C和35°C下培养2-7天，观察是否有微生物示剂与培养基一同灭菌，然后在适宜条件下培养，观察是否有微生物生长迹象此方法虽简单但可靠，是确认培养基无菌状态的金标准生长无生长表明灭菌过程有效常见实验室培养基制备错误培养基制备过程中最常见的错误包括称量不准确导致成分比例失衡、琼脂加热过度导致凝固能力下降、pH值调整不当影响微生物生长、灭菌时间不足引起污染，以及热敏感成分添加温度过高导致失活等这些错误都会直接影响培养结果的准确性和可靠性防止这些错误的关键措施包括:使用校准的天平和测量工具确保计量准确；严格控制加热过程，避免琼脂过度加热；使用校准的pH计并定期监测培养基pH值；遵循标准灭菌流程并使用指示剂确认灭菌效果；严格控制热敏感成分的添加温度，必要时使用温度计监测建立详细的标准操作流程SOP并严格执行，是减少培养基制备错误的最有效方法大批量培养基制备技巧设备选择与准备混合与均质化技术质量控制要点大批量制备需使用容量适当的设备，大批量混合时避免结块是关键挑战大批量制备更需严格的质量控制建如大型搅拌罐、自动分装系统和工业采用分步添加法先溶解少量成分于立关键控制点CCP系统，在每个关键级灭菌器设备应事先进行清洁消部分水中形成母液，再逐步稀释至工步骤进行检查，如成分称量、pH调毒，确保无污染大容量加热设备应作浓度使用机械搅拌器持续搅拌，整、灭菌参数等使用自动记录系统配备温度监控系统，确保均匀加热特别是添加粉末成分时某些情况追踪每批培养基的制备参数从每批接触培养基的所有表面应使用不锈钢下，可先制备浓缩母液再按比例混次中随机抽样进行物理、化学和微生或其他惰性材料，避免对培养基成分合，确保各组分分布均匀物学测试，确保质量一致性的吸附或释放分装与标记系统标准操作流程制定建立高效分装系统，确保分装量准确一致对于固体培养基，大批量制备必须建立详细的标准操作流程SOP，明确每个步控制倒板温度在45-50°C，避免温度过高或过低影响质量每骤的操作方法、参数范围和质量标准培训操作人员严格遵循个容器应有清晰标签，包含培养基名称、批号、制备日期、有SOP，减少人为变异定期审查和更新SOP，根据质量反馈持效期和储存条件等信息采用批次管理系统，便于追溯和质量续改进保持完整的记录系统，包括原材料信息、制备过程和问题分析质量检测结果商业化脱水培养基使用指南产品选择与验收准确配制与处理选择信誉良好的供应商提供的脱水培养基产品，确保来源可靠接脱水培养基配制是确保质量的关键步骤收产品时检查包装完整性、生产日期和有效期理想的脱水培养基

1.精确称量使用校准的天平，按说明书要求的准确比例称量粉应呈现均匀粉末状，无结块、变色或异味存放时应保持密封，置末于干燥、阴凉处，避免阳光直射和潮湿环境

2.选择适当容器容量应为最终体积的2倍以上，预留搅拌和沸使用前应检查产品说明书，确认腾空间•培养基适用范围和特性

3.充分溶解将粉末缓慢加入适量温水中，持续搅拌至完全溶解•需添加的补充成分

4.加热处理某些培养基需加热至沸腾以完全溶解，注意防止局部过热•适宜的pH值范围

5.补充成分添加按说明书要求添加不含于脱水粉末中的特殊成•推荐的灭菌条件分

6.定容调pH使用量筒精确定容，用pH计检查并调整pH值

7.分装与灭菌按标准程序分装和灭菌，严格遵循推荐条件培养基制备安全注意事项个人防护措施制备培养基时应穿着适当的实验室防护装备，包括实验室工作服、乳胶或丁腈手套、安全眼镜或面罩处理粉末状物质时应避免产生和吸入粉尘，必要时使用口罩或在通风橱中操作处理热培养基时应使用隔热手套，防止烫伤所有操作完成后应彻底洗手，避免交叉污染化学品安全处理培养基成分中可能含有有害化学物质，如酸碱调节剂、选择性抑制剂等使用前应查阅安全数据表SDS了解危害信息称量和处理有毒成分时应在通风橱中进行，避免皮肤接触和吸入特别注意某些染料和指示剂可能具有致突变性或致癌性，处理时需格外谨慎设备安全操作高压灭菌器是培养基制备中的高风险设备，使用前应接受专门培训操作时需确保安全阀功能正常，盖子密封良好切勿在高压状态下打开灭菌器，要等压力完全释放热板和加热器使用时应远离易燃物品，防止培养基沸腾溢出导致烫伤或火灾废弃物处理规范含微生物的废弃培养基属于生物危险废弃物，必须经灭菌处理后才能丢弃液体培养基可高压灭菌后倒入指定排水系统；固体培养基应放入生物危险废物袋中灭菌后处理含有特殊化学物质的培养基可能需要按照化学废弃物处理规程单独处理，不可直接排入环境培养基技术创新与发展传统培养基时代标准化配方和手工制备是早期微生物培养的主要特点虽然工艺相对简单，但培养基质量波动较大，制备过程劳动密集，难以满足现代实验室高通量需求商业化标准化阶段脱水培养基和即用型产品的出现大大提高了实验室效率和结果一致性工业化生产确保了批次间的稳定性，质量控制更为严格，但仍以通用型培养基为主导分子生物学融合期培养基与分子生物学技术结合，出现了用于特定基因检测的培养基系统新型指示剂和选择标记使结果判读更为直观，大大缩短了病原体检测时间自动化与定制化未来人工智能辅助配方设计、3D打印培养基、微流控技术应用正引领培养基技术革新环保型可降解培养基和特定微生物群落培养系统开发也成为热点研究方向培养基制备记录与管理标准操作规程SOP文件化每种培养基都应有详细的制备SOP文档，包括原料清单、具体步骤、质量参数和注意事项SOP应定期更新，反映最新的技术改进和质量要求文件应易于获取，并确保所有操作人员熟悉其内容SOP是实验室质量管理体系的核心组成部分批次记录系统建立每批培养基制备都应有完整记录，包括使用的原材料批号、称量数据、pH值、制备日期、操作人员、灭菌参数等关键信息批次编号系统应科学设计，便于追溯记录可采用电子或纸质形式，但必须安全保存，通常保留期不少于两年质量控制数据管理对每批培养基进行的质量检测结果应系统记录，包括物理检查、pH值、无菌测试和性能验证等数据异常结果应及时报告并调查原因建立质量控制趋势分析，识别潜在问题并进行持续改进质量数据是评估培养基可靠性的重要依据库存与有效期管理建立培养基库存管理系统，记录存储位置、数量、制备日期和有效期采用先进先出原则使用培养基，避免过期使用定期检查库存培养基外观状态，及时处理异常产品有效期管理应考虑不同类型培养基的稳定性差异，必要时进行保质期验证总结与实践建议微生物特性理解精确操作原则深入了解目标微生物的生理特性和营养需求，选择或调整最适合的培养基类型考虑微生物的生培养基制备的每一步都需精确控制，从称量、溶长环境、代谢方式和特殊营养要求，制定针对性解到灭菌和保存小小的误差可能导致培养失的培养策略败，影响实验结果的可靠性始终使用校准的设备，严格遵循配方比例无菌操作规范培养基制备的全过程须保持无菌状态，特别是灭菌后的处理环节熟练掌握无菌技术，定期监测环境卫生，防止培养基污染是成功培养的前提持续学习与创新微生物培养技术不断发展，新型培养基和方法层质量控制意识4出不穷保持学习的态度，关注学术进展，灵活建立完善的质量控制体系，从原料验收到成品检调整培养策略以适应不同研究需求验全程监控培养基使用前进行适当的性能验证，确保其支持目标微生物生长的能力。