《临床生物化学检验课件》

临床生物化学检验课件临床生物化学检验是现代医学诊断的重要组成部分，通过对血液、尿液等体液中生化成分的定量分析，为疾病诊断、治疗监测和预后评估提供科学依据本课程旨在系统介绍临床生物化学检验的基本理论、检测方法、质量控制及临床应用临床生物化学检验发展简史经典化学分析时期（世纪末世纪初）19-20以定性和半定量分析为主，采用化学反应和显微镜观察方法，奠定了临床化学基础仪器分析发展期（世纪中期）20光谱分析技术兴起，自动化程度提高，检测精度和效率显著提升自动化与信息化时代（年代至今）1980全自动生化分析仪普及，实验室信息系统建立，向精准医疗方向发展分子诊断融合期（世纪）21生物化学基础蛋白质与酶系统碳水化合物代谢脂类代谢系统蛋白质是生命活动的主要承担者，由氨葡萄糖是机体主要能量来源，其代谢过脂类包括胆固醇、甘油三酯、磷脂等，基酸组成，具有特定的空间结构酶作程包括糖酵解、糖异生、糖原合成与分参与细胞膜构成、激素合成、能量储存为生物催化剂，参与细胞内各种代谢反解等途径胰岛素调节血糖稳态，维持等生理过程脂蛋白负责脂类在血液中应，其活性变化反映组织器官功能状正常生理功能的转运态血糖异常是糖尿病诊断的核心指标，糖血脂异常是动脉粥样硬化的重要危险因临床检验中，血清蛋白、酶活性测定是化血红蛋白反映长期血糖控制水平碳素，低密度脂蛋白胆固醇升高、高密度评估肝肾功能、心肌损伤等重要指标水化合物代谢紊乱与心血管疾病、肾病脂蛋白胆固醇降低与心血管疾病发生率蛋白质代谢异常可导致多种疾病，如蛋等并发症密切相关显著相关白质营养不良、免疫功能障碍等临床生物化学检验范围肝功能检验心血管标志物ALT、AST、总胆红素、白蛋白等肝脏代谢功能评估肌钙蛋白、CK-MB、BNP等心肌损伤和心功能指标肾功能检验肌酐、尿素氮、胱抑素C等肾小球滤过功能指标血脂分析糖代谢检验总胆固醇、甘油三酯、HDL、LDL等心血管风险评估血糖、糖化血红蛋白、胰岛素等糖尿病相关检测样本采集与处理血液样本采集选择合适采血部位，使用标准采血管，注意采血顺序和抗凝剂选择空腹12小时采血，避免溶血和凝血尿液样本收集晨尿或随机尿收集，使用清洁容器，避免污染24小时尿液收集需准确记录时间和总量体液样本处理脑脊液、胸腹水等特殊体液需无菌操作，及时送检，避免细胞破坏和成分变化样本保存运输根据检测项目选择适当温度保存，2-8°C冷藏或-20°C冷冻，确保检测结果准确性检验前变量生理性因素病理性因素年龄、性别、种族、妊娠状态等生理特疾病状态、药物治疗、营养状况等病理征影响检验结果基准值不同人群的正因素直接影响检验结果某些疾病可导常参考范围存在差异，需要建立特定人致多个生化指标同时异常，需要综合分群的参考区间析•新生儿胆红素水平较高•肝病导致转氨酶升高•老年人肌酐清除率下降•肾病影响肌酐水平•妊娠期蛋白质浓度变化•糖尿病引起血糖异常环境与行为因素饮食、运动、情绪、昼夜节律等环境行为因素可引起检验结果波动标准化采样条件对保证检验质量至关重要•餐后血糖显著升高•剧烈运动影响酶活性•应激状态改变激素水平检验质量与准确性精密度控制重复测定结果的一致性评估准确度验证测定值与真实值的接近程度特异性保证避免干扰物质影响检测结果可比性建立不同方法间结果的一致性稳定性维护检测系统长期性能稳定质量控制是确保检验结果可靠性的核心环节通过建立完善的质控体系，包括室内质控、室间质评、方法学比对等措施，持续监控检验过程各个环节，及时发现和纠正偏差，保证检验结果的准确性和可靠性化学比色法原理光源发射钨灯或卤素灯产生连续光谱，提供稳定的测量光源单色器分光光栅或棱镜将复合光分解为单色光，选择特定波长样本反应待测物质与试剂反应产生有色化合物，吸收特定波长光线检测器接收光电管或光电二极管检测透射光强度，转换为电信号比色法基于朗伯-比尔定律，物质对光的吸收程度与浓度成正比通过测定溶液在特定波长下的吸光度，计算待测物质浓度该方法操作简便、成本低廉，广泛应用于临床生化检验中酶法、免疫比浊法酶法检测原理利用酶的特异性催化反应，通过测定反应产物或底物消耗量确定待测物浓度免疫比浊原理抗原与抗体结合形成免疫复合物，产生光散射现象，散射强度与待测物浓度相关检测应用范围酶法适用于糖类、脂类检测；免疫比浊法主要用于蛋白质、激素等大分子物质测定酶法检测具有高特异性和灵敏度优势，反应条件温和，适合自动化操作免疫比浊法结合免疫反应特异性与比浊技术简便性，在蛋白质定量检测中发挥重要作用两种方法互补，扩大了临床检验的应用范围自动化生化分析仪简介样本处理试剂添加1自动进样、稀释、分配，确保样本处理精确控制试剂用量和反应时间，保证检标准化和准确性测条件一致性结果检测反应控制光度计实时监测反应进程，自动计算并恒温反应池维持最适反应温度，监控反输出检测结果应过程现代自动化生化分析仪大幅提升了检验效率和准确性，减少了人为操作误差设备具备高通量处理能力，可同时进行多项目检测，满足临床快速诊断需求智能化操作界面和质控系统确保检验质量稳定可靠血浆葡萄糖测定酶法检测原理葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应，产生过氧化氢，进一步与过氧化物酶作用产生有色物质，通过比色法定量检测该方法特异性高，干扰少，是目前临床最常用的血糖检测方法样本要求与处理要求空腹8-12小时采血，使用含氟化钠的抗凝管防止糖酵解血浆分离后应及时检测或低温保存，避免血糖值下降影响检测结果准确性临床参考值解读空腹血糖正常值

3.9-

6.1mmol/L，糖尿病诊断标准≥

7.0mmol/L，糖耐量异常

6.1-

6.9mmol/L结合临床症状和其他检验指标综合判断糖代谢状态及糖化蛋白HbA1c长期血糖监控糖尿病控制目标检测方法比较HbA1c反映近2-3个月一般糖尿病患者HPLC法精确度高，平均血糖水平，不受HbA1c控制目标免疫法操作简便，酶短期血糖波动影响，7%，老年患者可放法成本较低不同方是糖尿病诊断和疗效宽至8%，年轻患者法间存在系统性差监测的金标准指标建议

6.5%，个体化异，需要标准化校准制定治疗目标确保结果可比性临床应用价值用于糖尿病筛查、诊断确认、治疗效果评估和并发症风险预测，指导临床决策和患者管理策略制定血清蛋白检测35-5060-80白蛋白正常值总蛋白范围克/升，维持血浆胶体渗透压克/升，反映蛋白质营养状态

1.5-

2.5白球比值正常比值范围，肝病时常降低血清蛋白检测包括总蛋白、白蛋白、球蛋白测定，反映机体蛋白质合成和代谢状况白蛋白由肝脏合成，是评估肝功能的重要指标，同时维持血浆胶体渗透压稳定球蛋白主要包括免疫球蛋白，反映机体免疫状态检测方法采用双缩脲法测定总蛋白，溴甲酚绿法测定白蛋白，计算得出球蛋白含量和白球比值临床上用于肝病、肾病、营养不良、免疫性疾病等多种疾病的诊断和监测血脂分析检测项目正常参考值临床意义异常相关疾病总胆固醇心血管风险评动脉粥样硬化

5.2mmol/L估甘油三酯脂肪代谢状态胰腺炎风险

1.7mmol/LLDL胆固醇

3.4mmol/L坏胆固醇水冠心病高危平HDL胆固醇

1.0mmol/L好胆固醇保心血管保护因护子血脂检测是心血管疾病风险评估的核心项目低密度脂蛋白胆固醇升高是动脉粥样硬化的主要危险因素，高密度脂蛋白胆固醇具有抗动脉粥样硬化作用综合血脂谱分析有助于制定个体化的心血管疾病预防和治疗策略肝功能生化检测转氨酶检测碱性磷酸酶（）ALP（）ALT/AST主要来源于肝脏、骨骼、肠ALT主要存在于肝细胞，AST道肝胆疾病时显著升高，特分布于心肌和肝脏肝细胞损别是胆道梗阻性疾病结合γ-伤时酶释放入血，ALT特异性GT检测可提高肝胆疾病诊断更高，AST/ALT比值有助于的特异性鉴别诊断不同类型肝损伤胆红素代谢检测总胆红素、直接胆红素、间接胆红素检测反映胆红素代谢状况肝细胞性黄疸、溶血性黄疸、梗阻性黄疸呈现不同的胆红素代谢模式肾功能检验肌酐检测内源性肌酐清除率反映肾小球滤过功能，不受饮食影响，是评估肾功能的可靠指标尿素氮测定蛋白质代谢终产物，肾功能下降时升高，但受饮食和分解代谢影响较大估算eGFR基于血肌酐、年龄、性别计算估算肾小球滤过率，是慢性肾病分期的重要依据肾功能检验通过测定血液中代谢废物的浓度评估肾脏清除功能肌酐是最常用的内源性标志物，其血浓度与肾小球滤过率呈反比关系当肾功能损失超过50%时，血肌酐才开始显著升高，因此早期肾病检测需要更敏感的指标如胱抑素C电解质分析（、、、）Na KCl Ca酶学检验简介酶学检验通过测定血清中特定酶的活性或浓度，反映相应组织器官的功能状态和损伤程度不同酶具有组织特异性，如CK-MB主要分布于心肌，AST/ALT主要存在于肝脏，通过酶谱分析可以准确定位病变部位急性心肌梗死时，心肌酶按一定时间顺序释放CK-MB最早升高（3-6小时），LDH升高最晚但持续时间最长肝炎时ALT升高比AST更明显且特异性更高酶学检验为疾病早期诊断提供了重要依据血清铁和蛋白铁测定血清铁检测转铁蛋白与铁结合力血清铁蛋白意义反映体内铁的运输状态，正常值12-转铁蛋白是铁在血液中的主要载体蛋铁蛋白是体内铁储存的主要形式，血清30μmol/L血清铁浓度受铁摄入、吸白，总铁结合力（TIBC）反映转铁蛋白铁蛋白浓度与体内铁储存量密切相关收、利用和储存等多因素影响，具有明结合铁的总能力转铁蛋白饱和度=血清男性正常值30-400μg/L，女性13-显的日间变化和个体差异铁/TIBC×100%150μg/L缺铁性贫血时血清铁明显降低，炎症状缺铁时TIBC升高、饱和度降低；慢性病铁蛋白降低提示铁储存不足，是诊断缺态下也可能出现血清铁下降血清铁单贫血时TIBC正常或降低该指标有助于铁性贫血的敏感指标但铁蛋白也是急独检测意义有限，需结合转铁蛋白饱和鉴别不同类型贫血的病因，指导临床治性时相反应蛋白，炎症、感染、肿瘤时度、血清铁蛋白等指标综合评估疗方案选择可升高，影响结果判读尿液生化分析尿蛋白检测尿糖检测尿酮体检测正常人尿蛋白排泄量150mg/24h试纸法可正常人尿糖阴性，当血糖超过肾糖阈（约反映脂肪代谢状况，包括丙酮、乙酰乙酸、β-快速筛查，但对微量蛋白敏感性有限免疫比10mmol/L）时出现糖尿葡萄糖氧化酶法特羟丁酸糖尿病酮症酸中毒时显著升高，饥浊法可精确定量微量白蛋白，是早期肾病筛查异性好，但维生素C可产生假阴性干扰饿、高脂低糖饮食也可能出现酮尿的重要指标•糖尿病性糖尿血糖控制不良•病理性酮尿糖尿病酮症酸中毒•生理性蛋白尿发热、剧烈运动•肾性糖尿肾小管重吸收功能障碍•生理性酮尿饥饿、高脂饮食•病理性蛋白尿肾小球疾病、肾小管病变•应激性糖尿急性感染、创伤•其他原因妊娠、发热、呕吐•肾前性蛋白尿血红蛋白尿、肌红蛋白尿体液及脑脊液生化检测脑脊液蛋白检测正常脑脊液蛋白含量

0.15-

0.45g/L蛋白升高见于脑膜炎、脑出血、肿瘤等疾病，反映血脑屏障通透性改变和炎症反应程度脑脊液糖检测正常为血糖的50-80%，绝对值

2.8-

4.5mmol/L细菌性脑膜炎时显著降低，病毒性脑膜炎时轻度降低或正常，有助于鉴别诊断胸腹水生化分析通过蛋白含量、LDH水平区分漏出液和渗出液漏出液蛋白30g/L，渗出液蛋白30g/L，胸水/血清蛋白比值和LDH比值有助于鉴别心包液检测正常心包腔含少量浆液心包炎、心包积液时成分发生变化，炎症性积液蛋白和细胞数增加，恶性积液可见肿瘤标志物升高有关特殊生化检验肿瘤标志物检测激素水平检验心血管标志物CEA、AFP、PSA、甲状腺激素、性激素、肾NT-proBNP、D-二聚CA125等肿瘤相关抗原检上腺皮质激素等内分泌激体、同型半胱氨酸等新型测，用于肿瘤筛查、诊素检测采用化学发光免心血管疾病标志物为心断、疗效监测和复发预疫法，具有高灵敏度和特力衰竭、血栓栓塞、动脉警不同标志物具有组织异性，是内分泌疾病诊断硬化等疾病提供早期诊断特异性，需要结合临床综的核心检验项目和风险评估依据合判断骨代谢标志物骨特异性碱性磷酸酶、骨钙素、胶原交联产物等反映骨形成和骨吸收状况用于骨质疏松症诊断、治疗监测和骨折风险评估酸碱平衡检测高通量与微量技术微流控芯片技术样本用量极少，检测速度快全自动化检测系统减少人工干预，提高检测效率检验结果数据整合多平台数据统一管理分析大数据质量控制实时监控检验质量稳定性标准化操作流程5确保检验过程规范一致高通量检测技术实现了样本的批量化、自动化处理，显著提升了检验效率和精度微流控技术将传统实验室操作微型化到芯片上，具有样本用量少、反应速度快、成本低廉等优势，特别适用于急诊检验和床旁检测分子生物学新方法与生化检验融合技术应用PCR实时荧光定量PCR用于病原体检测、基因突变分析、拷贝数变异检测与传统生化检验结合，提供分子水平的疾病诊断信息基因芯片检测高密度寡核苷酸芯片可同时检测数千个基因表达，用于肿瘤分型、药物敏感性预测、遗传病筛查等个体化医疗应用液体活检技术通过检测血液中循环肿瘤DNA、循环肿瘤细胞、外泌体等生物标志物，实现肿瘤的无创诊断和动态监测精准医疗整合将基因组学、蛋白质组学、代谢组学数据与传统生化检验结果整合，为患者提供个体化的诊断和治疗方案常用检验试剂与标准化试剂类别主要厂商特点优势标准化要求生化试剂罗氏、贝克曼、雅培稳定性好、精度高溯源性校准物质免疫试剂西门子、奥森多、新产业特异性强、灵敏度高国际标准品校准质控品伯乐、朗道、中生北控批间一致性好赋值准确可靠校准品NIST、中检院认证计量溯源性明确不确定度评估检验试剂标准化是保证检验结果准确性和可比性的基础不同厂商试剂间存在系统性偏差，需要通过参考方法校准建立溯源链质控物质用于监控检验过程稳定性，校准物质确保测量结果的准确性国际标准化组织制定的ISO15189等标准为临床实验室质量管理提供了规范依据质量控制标准国家认证认可国际标准体系中国合格评定国家认可委员会ISO15189医学实验室质量和能力要求，（CNAS）实验室认可，卫生健康委临CLIA美国临床实验室改进法案，为全球床检验中心质量评价，确保检验质量符实验室质量管理提供统一标准合国家标准持续改进机制行业技术规范定期内审外审，纠正预防措施，管理评中华医学会检验医学分会技术规程，各审，建立质量管理体系的持续改进循专业委员会专家共识，为具体检验项目环，确保检验质量稳步提升提供技术指导和操作规范检验过程中的安全管理生物安全防护化学试剂安全按照生物安全等级要求配置防护设备，正确穿戴防护用品，规危险化学品分类储存，易燃易爆试剂远离火源强酸强碱试剂范处理感染性标本建立意外暴露应急预案，及时采取处置措专用储存柜，挥发性试剂通风橱操作建立化学品安全数据表施防止交叉感染（MSDS）档案废物处置规范应急响应体系医疗废物分类收集，感染性废物高温高压灭菌处理化学废液建立火灾、化学品泄漏、生物污染等应急预案定期开展应急中和处理后排放，尖锐器械专用容器收集委托有资质机构处演练，配备应急设备和药品建立事故报告制度，及时调查处置危险废物理安全事件室内、室间质量控制室内质控程序每日检测质控样本，绘制Levey-Jennings质控图，监控检验系统精密度和准确度稳定性室间质量评价参加国家级和省级室间质评计划，与同行实验室比较检验结果，发现系统偏差及时纠正异常结果调查质控失控时停止报告结果，查找失控原因，采取纠正措施后重新质控，确保结果可靠性质量控制是检验医学的生命线，通过室内质控监控日常检验质量，通过室间质评评估检验能力质控失控的常见原因包括试剂失效、仪器故障、操作错误等，需要系统性分析和处理建立质控数据档案，定期分析质控趋势，预防质量问题发生仪器日常维护与故障排查日常维护保养按厂商要求进行日、周、月度维护，清洁光学系统，更换耗材，校准波长准确性常见故障诊断吸样针堵塞、光源老化、温度偏差等故障判断，查阅故障代码手册，初步排除简单故障预防性维护建立设备档案，记录维护历史，制定预防性维护计划，延长仪器使用寿命，减少故障发生技术支持服务与厂商建立服务合同，定期工程师巡检，复杂故障专业维修，软件升级和技术培训自动化与信息化趋势实验室信息系统（）LIS整合样本管理、检验流程、结果报告、质量控制等功能模块，实现检验全过程信息化管理条码技术确保样本追溯性，减少人工录入错误，提高工作效率人工智能辅助诊断机器学习算法分析检验数据模式，辅助异常结果判读和疾病诊断深度学习技术用于图像识别，如血细胞形态学分析、尿沉渣镜检等自动化识别远程医疗检验服务云端数据共享平台，实现检验结果远程传输和专家会诊移动医疗技术支持床旁检测设备联网，即时获取检验结果，加速临床决策过程典型病例糖尿病诊断

112.

59.8%空腹血糖糖化血红蛋白mmol/L，明显超过诊断标准反映长期血糖控制不良

18.2餐后2小时血糖mmol/L，糖耐量严重异常患者男性，45岁，主诉多饮、多尿、体重下降3个月实验室检查显示典型的糖尿病生化改变空腹血糖

12.5mmol/L（正常

6.1），HbA1c

9.8%（目标7%），餐后2小时血糖

18.2mmol/L（正常

7.8）进一步检测C肽水平评估胰岛功能，尿微量白蛋白筛查早期肾病，血脂谱评估心血管风险综合检验结果确诊2型糖尿病，制定个体化治疗方案包括生活方式干预和药物治疗，定期监测血糖控制效果典型病例急性心梗诊疗2。