白细胞分类计数教学课件

白细胞分类计数教学课件第一章白细胞基础知识概述白细胞作为人体免疫系统的重要组成部分，在抵抗感染、维护机体稳态方面发挥着至关重要的作用深入了解白细胞的基础知识，是掌握分类计数技术的前提和基础白细胞的定义与分类颗粒细胞无颗粒细胞细胞质中含有特殊颗粒的白细胞，包括三个亚型细胞质中不含特殊颗粒的白细胞，分为两大类•中性粒细胞最主要的白细胞类型，占总数的50-70%•淋巴细胞免疫应答的核心细胞，占20-40%•嗜酸性粒细胞细胞质含橙红色颗粒，占1-4%•单核细胞体积最大的白细胞，占3-8%•嗜碱性粒细胞颗粒呈深紫色，数量最少，小于1%这种分类基于细胞质中是否含有可见的特殊颗粒结构，是白细胞形态学分类的基础白细胞的来源与发育造血干细胞位于骨髓中的多能干细胞，具有自我更新和多向分化的能力，是所有血细胞的共同祖先髓系祖细胞分化分化为粒-单核系前体细胞，进一步发育为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞整个成熟过程需要10-14天淋巴系祖细胞分化分化为淋巴系前体细胞，在骨髓和胸腺中发育为B细胞、T细胞和自然杀伤NK细胞T细胞需在胸腺中完成最终成熟白细胞的功能简介中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞作为机体第一道防线，具有强大的吞噬专门对抗多细胞寄生虫的特化细胞，颗类似于组织中的肥大细胞，颗粒含有组和杀灭细菌的能力含有丰富的溶酶体粒中含有主要碱性蛋白等细胞毒性物胺、肝素和趋化因子在过敏反应中释酶和抗菌蛋白，能够迅速响应细菌感质同时参与过敏反应的调节，能够调放介质，引起血管通透性增加和平滑肌染，通过吞噬作用清除病原体在急性节肥大细胞和嗜碱性粒细胞的功能，在收缩，是I型过敏反应的重要效应细胞炎症中数量显著增加哮喘等过敏性疾病中发挥重要作用单核细胞淋巴细胞进入组织后分化为巨噬细胞，具有强大的吞噬能力不仅清除病原体和细胞碎片，还参与组织修复和免疫调节能够处理和呈递抗原，启动适应性免疫应答，是连接先天免疫和获得免疫的桥梁白细胞五大类显微镜图示通过显微镜观察，可以清晰地识别各类白细胞的形态特征注意观察细胞核的形态变化中性粒细胞的多叶核、嗜酸性粒细胞的双叶核、嗜碱性粒细胞被颗粒遮盖的核、淋巴细胞的圆形核以及单核细胞的肾形核颗粒的颜色和分布也是重要的鉴别要点第二章白细胞形态学详解白细胞形态学是分类计数的核心技能准确识别各类白细胞的形态特征，是每位检验工作者必须掌握的基本功本章将详细解析五类白细胞的形态特点，为准确分类提供依据中性粒细胞特征形态特征详解中性粒细胞是外周血中数量最多的白细胞，直径约12-15μm最显著的特征是其多分叶的细胞核，通常为2-5叶，叶间有细丝相连随着细胞成熟度增加，核叶数目增多，核染色质更加致密细胞质呈淡粉色，含有大量微细而均匀分布的中性颗粒，这些颗粒含有溶菌酶、过氧化物酶等抗菌物质在瑞氏-姬姆萨染色下呈淡紫色，颗粒密度适中，分布均匀•杆状核细胞未成熟型，核呈杆状或马蹄形•分叶核细胞成熟型，核呈2-5叶分叶状•核左移杆状核增多，提示急性感染正常值范围相对计数50%-70%⁹绝对计数

2.0-

7.0×10/L嗜酸性粒细胞特征嗜酸性粒细胞的独特形态嗜酸性粒细胞的细胞质中充满了大而均匀的橙红色颗粒，这些颗粒在瑞氏-姬姆萨染色下呈鲜艳的橙红色，是其最显著的识别标志颗粒含有主要碱性蛋白、嗜酸性阳离子蛋白等，具有杀灭寄生虫的作用细胞核通常呈双叶状，形似电话听筒，叶间连接较宽，核染色质较疏松细胞直径与中性粒细胞相似，约12-15μm在某些病理情况下，可见颗粒减少或颗粒内出现空泡临床意义嗜酸性粒细胞增多常见于过敏性疾病、寄生虫感染、某些皮肤病和血液系统肿瘤减少则可见于急性感染和应用糖皮质激素后识别要点橙红色大颗粒是最重要的鉴别特征，核呈典型的双叶状，很少超过两叶嗜碱性粒细胞特征形态特征颗粒成分与功能嗜碱性粒细胞是所有白细胞中数量最少嗜碱性颗粒含有组胺、肝素、白三烯等生的，细胞质中含有大量深紫色的粗大颗物活性介质组胺能引起血管扩张和通透粒，颗粒大小不均，常常遮盖住细胞核，性增加；肝素具有抗凝作用；白三烯参与使核的形态难以清晰辨认炎症反应的调节细胞核通常呈双叶或不规则形状，有时呈这些介质的释放使嗜碱性粒细胞在过敏反S形或C形扭曲由于颗粒覆盖，核的轮廓应和炎症过程中发挥重要作用，特别是在I时常模糊不清型过敏反应的即刻相中临床意义正常情况下嗜碱性粒细胞极少，通常不超过白细胞总数的1%增多可见于慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症、某些过敏反应和内分泌疾病在慢性粒细胞白血病中，嗜碱性粒细胞明显增多是重要的诊断指标之一单核细胞特征单核细胞的形态学特点单核细胞是所有白细胞中体积最大的，直径可达12-20μm，细胞质丰富呈灰蓝色最特征性的是其肾形或马蹄形的细胞核，核染色质呈网状结构，较为疏松，有时可见核仁细胞质含有丰富的溶酶体和线粒体，在显微镜下可见细胞质中有细小的嗜天青颗粒，这些颗粒实际上是溶酶体细胞质边缘常有伪足样突起，反映了其活跃的变形运动能力成熟过程单核细胞在外周血中停留1-3天后，迁移到各组织器官分化为巨噬细胞，如肺泡巨噬细胞、肝脏枯否细胞、脾脏巨噬细胞等，执行组织特异性的免疫监视功能功能特点具有强大的吞噬能力，能吞噬细菌、病毒、真菌、细胞碎片等同时作为抗原呈递细胞，处理和呈递抗原给T细胞，启动特异性免疫应答鉴别要点•体积最大•核呈肾形或马蹄形•细胞质丰富，灰蓝色•可见细小颗粒淋巴细胞特征小淋巴细胞直径7-10μm，是最常见的淋巴细胞类型核圆形，占细胞的大部分，染色深，核质比例大细胞质呈浅蓝色，量少，呈环形分布于核周围，通常无颗粒大淋巴细胞直径10-15μm，核相对较大，染色质较疏松，有时可见核仁细胞质较多，呈深蓝色，可含有少量嗜天青颗粒这类细胞主要包括活化的T细胞、B细胞和NK细胞淋巴细胞是获得性免疫的主要效应细胞，根据表面标记和功能可分为多个亚群B细胞（约10-15%）产生抗体的细胞，活化后分化为浆细胞，负责体液免疫T细胞（约75-85%）包括CD4+辅助T细胞、CD8+细胞毒性T细胞、调节性T细胞等NK细胞（约5-10%）自然杀伤细胞，无需预先致敏即可杀伤异常细胞在病理情况下，可出现异常淋巴细胞，如传染性单核细胞增多症中的异型淋巴细胞、白血病中的原始淋巴细胞等，需要仔细鉴别各类白细胞核形态对比图细胞核的形态是白细胞分类的重要依据多叶核（中性粒细胞）与单叶核（淋巴细胞、单核细胞）的区别是初学者需要重点掌握的识别要点核形态的变化反映了细胞的成熟度和功能状态在病理情况下，核形态异常（如核左移、核右移、核异型等）具有重要的诊断价值，是判断感染程度、血液系统疾病等的重要指标第三章白细胞分类计数的染色技术良好的染色技术是准确进行白细胞分类计数的前提本章将详细介绍常用的染色方法、操作要点和质量控制措施，帮助读者掌握标准化的染色技术瑞氏姬姆萨复合染色法-010203甲液配制乙液配制血片制备瑞氏染料3g溶解于甲醇1000ml中，充分搅拌至完全溶解甲液需在室温姬姆萨染料按1:20的比例用磷酸盐缓冲液稀释，pH值调节至

6.8-

7.0现取新鲜血液制备血膜，在室温下自然干燥血膜应薄厚适中，分布均下放置24-48小时使其充分溶解，过滤后保存在棕色瓶中避光配现用，避免放置时间过长影响染色效果匀，体尾交界处清晰避免血膜过厚或过薄影响细胞形态观察0405固定染色冲洗干燥先用甲液覆盖血膜2-3分钟进行固定，然后加入等量乙液混合染色8-10分钟染色时间可根据室温和血膜厚度用缓冲液轻柔冲洗去除多余染料，然后用蒸馏水快速冲洗，立即在滤纸上吸干，自然晾干或用吹风机快速吹适当调整干染色机制与效果瑞氏-姬姆萨染色是一种罗马诺夫斯基型染色，含有亚甲基蓝和伊红两种主要成分亚甲基蓝为碱性染料，与细胞核中的DNA和RNA结合，使核呈现蓝紫色；伊红为酸性染料，与细胞质中的血红蛋白和嗜酸性颗粒结合，呈现粉红色或橙红色这种染色方法能够很好地显示细胞核的结构细节和细胞质中各种颗粒的特征，是血液细胞形态学检查的金标准方法快速染色法快速染色的原理与方法优缺点比较快速染色法使用预配置的染色液，通常包含固定剂、碱性染料和酸性染料的优点混合物操作简便，染色时间短，特别适用于急诊检查和大批量标本处理•操作简单快速操作步骤•适合大批量处理•试剂稳定性好

1.血膜自然干燥后，浸入甲液（固定液）10秒•成本相对较低

2.转入乙液（染色液）停留15-20秒

3.用自来水冲洗并立即干燥整个染色过程仅需1-2分钟即可完成，大大提高了工作效率缺点•细胞形态细节稍逊•颗粒着色不如传统法鲜明•不适合精细形态学分析在选择染色方法时，应根据检查目的和要求决定对于常规筛查和急诊检查，快速染色法已能满足需要；对于疑难病例和精确诊断，仍建议使用传统的瑞氏-姬姆萨染色法血片制备技巧1采血量控制取血量以能制备长度4-5cm的血膜为宜，通常为一小滴血（约2-3μl）血量过多会导致血膜过厚，细胞重叠；血量过少则血膜过薄，细胞分布稀疏2推片角度推片玻片与载玻片的夹角应保持在35°-45°之间角度过小血膜过厚，角度过大血膜过薄推片速度要均匀适中，避免忽快忽慢造成细胞分布不均3血膜质量标准良好的血膜应具备厚薄适宜、分布均匀、边缘清晰、体尾明确血膜长度占载玻片的2/3，尾部呈羽毛状，体尾交界处是观察的最佳区域4常见问题处理血膜有洞血滴有杂质或载玻片不清洁；血膜有条纹推片边缘不平整；血膜太厚血量过多或角度过小；血膜太薄血量过少或角度过大血片质量直接影响细胞形态和计数准确性，必须严格按照标准操作规程执行建议初学者多加练习，熟练掌握血片制备技巧，这是进行准确细胞分类的基础技能血片制备示意图头部体部血膜最厚的区域，细胞密集重叠，一般不用于观察计数血膜中等厚度区域，细胞分布适中，可用于细胞形态观察体尾交界区尾部最理想的观察区域，细胞单层分布，形态清晰，是分类计数的首选区域血膜最薄区域，细胞稀少，可观察大细胞如幼稚细胞、异型细胞等正确识别血膜的不同区域对于准确计数至关重要计数时应主要在体尾交界处进行，避开头部的细胞聚集区和尾部的细胞稀疏区，确保获得具有代表性的计数结果第四章白细胞分类计数操作流程掌握标准化的操作流程是确保计数准确性和重现性的关键本章将详细介绍从显微镜操作到计数方法的完整流程，以及现代自动化技术的应用显微镜观察步骤油镜精观（×油镜）100中倍镜粗观（×物镜）10低倍镜定位（×物镜）加香柏油，使用100×油镜进行精细观察调节光圈和反光4转换到中倍镜，进一步观察选定区域的细胞分布情况初步镜，获得最佳的成像效果在这个倍数下进行细胞形态的详首先用低倍镜扫描整个血膜，选择体尾交界处的合适区域估计白细胞的密度和分布是否合适，调整观察区域检查是细鉴别和分类计数观察血膜的整体质量，确认细胞分布是否均匀，血膜厚度是否有血小板聚集、纤维蛋白析出等干扰因素否适宜识别血膜的头、体、尾各部分，选定计数区域显微镜操作要点正确的显微镜操作是获得清晰图像的前提光源调节使用适宜的光强，避免过亮或过暗影响观察聚光器位置调节聚光器高度，获得均匀的照明效果光圈控制适当收缩光圈，增加对比度和景深焦距调节先用粗调后用细调，获得最清晰的图像油镜使用后需要用二甲苯清洁镜头和载玻片，避免镜头损坏和影响下次观察效果计数方法计数细胞数量计数区域选择计数顺序标准方法要求计数100-200个白细胞对于白在体尾交界处选择3-5个不同的视野进行计采用规律的计数路线，如Z字形或回字形细胞数量正常的标本，通常计数100个即可；数，避免在单一区域集中计数每个视野计数移动，避免重复计数或遗漏每个视野内按照对于白细胞减少的标本，应计数200个或更20-30个细胞，确保获得具有代表性的结果从左到右、从上到下的顺序逐个识别计数多，以提高统计学准确性分类计数表格记录细胞类型中性粒细胞淋巴细胞单核细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞计数符号N LM EB正常百分比50-70%20-40%3-8%

0.5-5%0-1%计数过程中需要特别注意识别破碎的细胞、重叠的细胞和异常形态的细胞遇到难以分类的细胞时，可标记位置请有经验的技师协助鉴别自动化白细胞分类计数简介自动化技术原理现代血液分析仪采用多种先进技术实现自动化白细胞分类电阻抗法基于细胞通过小孔时产生的电阻变化，测定细胞大小和数量适用于白细胞总数计数，但分类能力有限流式细胞术利用激光照射细胞产生的前向散射（细胞大小）、侧向散射（细胞内颗粒）和荧光信号（特殊染料标记）进行细胞分类能够区分5类白细胞图像识别技术通过CCD摄像头获取细胞图像，利用人工智能算法自动识别细胞形态特征，实现精确分类分类法分类法优缺点分析35将白细胞分为淋巴细胞、单个核细胞和粒细胞三大类操作简能够区分中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和优点速度快、标准化程度高、人为误差小缺点无法识别单，成本较低，适用于基层医疗机构的筛查工作嗜碱性粒细胞五类准确性高，是目前的主流技术异常细胞形态，遇到异常情况需人工复检第五章白细胞分类计数正常参考值了解正常参考值是判断检验结果异常与否的基础本章将详细介绍各类白细胞的正常范围，以及影响参考值的各种因素正常白细胞分类百分比范围60%30%5%中性粒细胞淋巴细胞单核细胞正常范围50%-70%正常范围20%-40%正常范围3%-8%成人最主要的白细胞类型，负责急性炎症反应和细菌感染的防御获得性免疫的主要执行者，包括B细胞、T细胞和NK细胞巨噬细胞的前体，参与组织清理和免疫调节2%

0.5%嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞正常范围

0.5%-5%正常范围0%-1%主要对抗寄生虫感染，参与过敏反应调节数量最少的白细胞，参与过敏反应和炎症过程这些参考值是基于健康成人群体统计得出的，在临床应用时需要结合患者的年龄、性别、种族、地理环境和生理状态等因素综合判断值得注意的是，儿童的白细胞分类与成人有显著差异新生儿和婴幼儿的淋巴细胞比例明显高于成人，而中性粒细胞比例相对较低这种差异在2-3岁左右逐渐过渡到成人模式绝对计数正常范围（×）⁹10/L

4.

52.

50.

40.2中性粒细胞淋巴细胞单核细胞嗜酸性粒细胞⁹⁹⁹⁹正常范围

2.0-

7.0×10/L正常范围

0.8-

4.0×10/L正常范围

0.12-

0.8×10/L正常范围

0.05-

0.5×10/L绝对值增高提示细菌感染、组织坏死或急性炎症；减绝对值增高常见于病毒感染、慢性淋巴细胞性白血增多见于单核细胞白血病、结核、亚急性细菌性心内增多见于过敏性疾病、寄生虫感染、某些皮肤病和血少见于病毒感染、药物抑制或造血功能障碍病；减少见于免疫缺陷、放化疗后膜炎等慢性感染液系统肿瘤

0.05嗜碱性粒细胞⁹正常范围0-

0.1×10/L轻度增多可见于过敏反应；明显增多提示慢性粒细胞白血病等血液系统疾病绝对计数比相对百分比更能准确反映各类白细胞的实际数量变化在白细胞总数发生显著变化时，绝对计数的临床意义更为重要例如，当白细胞总数显著增高时，即使某类细胞的百分比正常，其绝对数也可能异常增高影响因素年龄生理状态病理状态中性粒细胞儿童偏低运动、应激↑感染、炎症↑淋巴细胞儿童偏高应激、激素↓病毒感染↑嗜酸性粒细胞变化不大昼夜节律变化过敏、寄生虫↑第六章白细胞分类计数的临床意义白细胞分类计数不仅是一项检验技术，更是疾病诊断和治疗监测的重要工具本章将深入探讨各种异常结果的临床意义和诊断价值白细胞增多与减少的临床指示中性粒细胞异常嗜酸性粒细胞异常淋巴细胞异常单核细胞异常增多原因增多常见于增多原因增多见于•细菌感染化脓性细菌、结核杆菌•过敏性疾病哮喘、湿疹、药物过•病毒感染EB病毒、CMV、肝炎病•慢性感染结核、梅毒、心内膜炎等敏毒•血液疾病单核细胞白血病•组织损伤烧伤、手术、心肌梗死•寄生虫感染蛔虫、钩虫、血吸虫•细菌感染百日咳、结核•恢复期急性感染恢复期•血液疾病慢性粒细胞白血病•皮肤病特应性皮炎、银屑病•血液肿瘤急慢性淋巴细胞白血病•其他结节病、克罗恩病•药物因素皮质激素、锂制剂•血液肿瘤嗜酸性粒细胞白血病•免疫系统疾病甲状腺功能亢进单核细胞增多常提示慢性感染或免疫系减少原因病毒感染、药物抑制、再生嗜酸性粒细胞增多症的诊断标准为绝对减少原因免疫缺陷病、霍奇金病、长统异常激活⁹障碍性贫血、化疗后骨髓抑制计数

0.5×10/L期应用激素白细胞形态异常与疾病关联核形态异常的临床意义核左移外周血中出现较多幼稚中性粒细胞，如杆状核、分叶核前期等提示骨髓造血功能活跃，常见于急性化脓性感染、严重组织损伤等核右移中性粒细胞核分叶过多（5叶），见于巨幼红细胞性贫血、慢性肝肾疾病等中毒颗粒中性粒细胞胞质内出现粗大的深蓝色颗粒，是细胞中毒的表现，见于严重细菌感染、药物中毒等空泡变性细胞质内出现空泡，多见于细菌性脓毒症，是预后不良的指标异常形态识别要点•仔细观察细胞核形态•注意细胞质颗粒变化•识别幼稚细胞出现•发现异常需及时报告免疫缺陷与白细胞功能异常案例分析急性阑尾炎中的中性粒细胞增多病例背景患者因转移性右下腹痛、发热就诊体格检查发现右下腹压痛、反跳痛阳性，McBurney点压痛明显临床怀疑急性阑尾炎，遂进行血常规检查协助诊断实验室检查结果⁹•白细胞总数

15.2×10/L（升高）⁹•中性粒细胞82%（

12.5×10/L）患者信息⁹•杆状核细胞15%（

2.3×10/L）男性，25岁•淋巴细胞12%•单核细胞5%主诉右下腹痛12小时•嗜酸性粒细胞1%体温

38.5°C⁹WBC

15.2×10/L血片显微镜观察发现中性粒细胞显著增多明显的核左移现象中毒性改变123⁹相对计数达82%，绝对计数

12.5×10/L，远超正常范围杆状核细胞明显增多达15%，部分中性粒细胞核呈C形或S部分中性粒细胞胞质内可见粗大的深蓝色颗粒（中毒颗细胞形态以成熟分叶核为主，但可见较多3-4叶核的年轻形，提示骨髓释放了大量幼稚细胞应对急性感染粒），个别细胞出现细小空泡，提示严重的细胞中毒性改细胞变诊断意义白细胞分类计数结果强烈提示急性细菌感染，结合临床症状和体征，支持急性阑尾炎的诊断患者最终行腹腔镜阑尾切除术，术后病理证实为急性化脓性阑尾炎术后3天复查血常规，白细胞数逐渐恢复正常总结与学习目标回顾形态学掌握操作技能熟练识别五类白细胞的形态特征，包括细胞核形掌握血片制备、瑞氏-姬姆萨染色、显微镜操作等基态、细胞质特点、颗粒分布等关键鉴别要点能够本技术熟练进行白细胞分类计数，确保结果的准准确区分正常细胞与异常细胞确性和重现性质量保证临床应用建立完善的质量控制体系，包括标本处理、操作规理解各类白细胞异常的临床意义，能够结合临床信范、结果审核等各个环节，确保检验质量符合临床息正确解释检验结果，为疾病诊断和治疗监测提供要求有价值的信息白细胞分类计数是血液学检验的基础技能，也是连接基础医学与临床实践的重要桥梁通过系统学习和大量实践，不断提高专业技能水平本课程通过理论讲解、形态学分析、操作技能训练和案例分析相结合的方式，为学习者构建了完整的知识体系在今后的工作中，要继续加强实践练习，积累经验，不断提高专业水平，为临床诊断和治疗提供准确可靠的检验结果愿每位学习者都能成为优秀的医学检验专业人才！。