pcr理论试题及答案

pcr理论试题及答案

一、单项选择题（共30题，每题1分）PCR技术的核心原理是模拟体内DNA复制过程，其主要依赖的酶是（）A.DNA连接酶B.逆转录酶C.Taq DNA聚合酶D.限制性内切酶在PCR反应中，决定引物与模板结合特异性的步骤是（）A.变性B.退火C.延伸D.循环以下关于PCR反应体系组成的描述，错误的是（）A.需要模板DNA B.需加入dNTP作为原料C.不需要引物D.需适量Mg²⁺稳定酶活性若PCR反应中退火温度过高，可能导致（）A.引物与模板结合不紧密B.引物二聚体大量产生C.非特异性扩增增加D.DNA聚合酶失活普通PCR反应通常包括的温度循环阶段是（）A.94-95℃→55-60℃→72℃B.72℃→55-60℃→94-95℃C.55-60℃→94-95℃→72℃D.94-95℃→72℃→55-60℃PCR反应中，引物的长度一般为（）A.5-10个核苷酸B.15-30个核苷酸C.50-100个核苷酸D.100-200个核苷酸以下哪种因素不会影响PCR反应的特异性（）A.引物序列的互补性B.退火温度C.dNTP浓度D.模板DNA的纯度实时荧光定量PCR与普通PCR的主要区别在于（）A.不需要DNA聚合酶B.可通过荧光信号实时监测产物量C.退火温度更低D.引物长度更短第1页共9页PCR产物中出现非特异性条带的主要原因是（）A.引物二聚体形成B.退火温度过高C.模板DNA降解D.Mg²⁺浓度过低在巢式PCR中，使用的引物数量和退火温度特点是（）A.1对引物，退火温度较低B.2对引物，第一轮退火温度低，第二轮高C.2对引物，退火温度均低D.1对引物，退火温度高PCR技术最早由哪位科学家提出（）A.Kary MullisB.Watson-Crick C.Mendel D.Sanger以下哪种不是PCR的主要应用领域（）A.基因扩增B.疾病诊断C.蛋白质分离D.基因突变检测关于PCR引物设计，以下说法错误的是（）A.引物自身不能形成二级结构B.引物3端与模板互补性要高C.引物序列与非目的片段无同源性D.引物G+C含量应控制在50%-70%PCR反应中，延伸温度通常选择（）A.72℃B.55℃C.94℃D.60℃若模板DNA浓度过高，可能导致PCR反应（）A.特异性降低B.产物量过少C.退火温度升高D.酶失活以下关于逆转录PCR（RT-PCR）的描述，正确的是（）A.以RNA为模板合成cDNA B.无需逆转录酶C.产物为RNA D.退火温度与普通PCR相同PCR循环中，变性的目的是（）A.使DNA聚合酶活性最高B.使引物与模板结合C.使DNA双链解开为单链D.使产物链延伸多重PCR的特点是（）第2页共9页A.一次反应扩增多个靶序列B.需要多种DNA聚合酶C.退火温度更低D.产物长度均相同影响PCR反应效率的关键因素不包括（）A.模板DNA的量B.引物浓度C.琼脂糖凝胶浓度D.反应体积在普通PCR中，若退火温度过低，可能出现（）A.引物与模板结合特异性高B.非特异性条带增加C.产物链延伸受阻D.DNA聚合酶活性升高PCR产物的长度主要由（）决定A.引物的长度B.退火温度C.循环次数D.dNTP浓度以下哪种不是PCR产物的常见检测方法（）A.琼脂糖凝胶电泳B.荧光定量检测C.放射性同位素标记D.原子吸收光谱关于Touch-down PCR，以下说法正确的是（）A.退火温度随循环数逐渐降低B.退火温度随循环数逐渐升高C.延伸时间逐渐延长D.变性温度更高PCR反应中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.作为模板C.作为原料合成DNA链D.稳定pH值以下关于引物二聚体的描述，错误的是（）A.由引物自身互补序列结合形成B.会影响PCR特异性C.可通过提高退火温度减少D.只在普通PCR中出现实时荧光定量PCR中，SYBR GreenI的作用是（）A.特异性结合引物B.特异性结合探针C.非特异性结合dsDNA D.催化DNA延伸普通PCR的循环数一般为（）A.10-20次B.25-35次C.40-50次D.50-60次第3页共9页PCR反应中，若Mg²⁺浓度过高，可能导致（）A.引物与模板结合特异性提高B.非特异性扩增增加C.产物长度增加D.酶活性降低巢式PCR的主要优势是（）A.提高扩增效率B.降低非特异性扩增C.缩短反应时间D.减少引物用量以下哪种技术可用于检测单核苷酸多态性（SNP）（）A.普通PCR B.实时荧光定量PCR C.等位基因特异性PCR D.逆转录PCR

二、多项选择题（共20题，每题2分）PCR反应体系的基本组成包括（）A.模板DNA B.上下游引物C.dNTP混合物D.DNA聚合酶E.缓冲液影响PCR反应特异性的因素有（）A.引物序列的互补性B.退火温度C.引物浓度D.Mg²⁺浓度E.模板DNA的纯度以下属于PCR主要应用领域的是（）A.基因克隆B.疾病诊断（如新冠病毒检测）C.古DNA分析D.蛋白质表达E.基因突变检测关于PCR引物设计的原则，正确的有（）A.引物长度一般15-30bp B.G+C含量40%-60%C.引物3端与模板互补性强D.引物自身不能形成二级结构E.引物之间不能有互补序列实时荧光定量PCR的优势包括（）第4页共9页A.定量准确B.避免产物污染C.可实现多重检测D.操作更简单E.结果可直接读出以下关于普通PCR循环步骤的描述，正确的有（）A.变性94-95℃，使DNA双链解开B.退火55-65℃，引物与模板结合C.延伸72℃，DNA聚合酶催化链延伸D.循环次数一般25-35次E.退火温度越高，产物特异性越好PCR产物中可能出现的问题包括（）A.非特异性条带B.引物二聚体C.无扩增产物D.产物长度异常E.条带亮度过高巢式PCR的特点有（）A.使用两对引物B.第一轮扩增非特异性产物C.第二轮用内侧引物扩增D.可提高产物特异性E.适用于低浓度模板检测以下属于PCR衍生技术的有（）A.RT-PCR B.多重PCR C.Touch-down PCRD.原位PCR E.反向PCR逆转录PCR（RT-PCR）的应用包括（）A.检测RNA病毒B.分析基因表达水平C.合成cDNA探针D.扩增DNA片段E.检测基因突变影响PCR反应效率的因素有（）A.模板DNA的质量和浓度B.引物的质量和浓度C.dNTP浓度D.Mg²⁺浓度E.反应体积关于引物二聚体的描述，正确的有（）A.由两条引物的3端互补结合形成B.会消耗引物和dNTP C.可通过提高退火温度减少D.可通过PAGE胶分离去除E.是PCR中常见的非特异性产物第5页共9页实时荧光定量PCR的定量方法包括（）A.标准曲线法B.相对定量法C.终点定量法D.熔解曲线分析E.内参基因法PCR反应中，退火温度的选择需考虑（）A.引物的解链温度（Tm值）B.引物的G+C含量C.引物的长度D.模板的复杂度E.反应体积以下关于Taq DNA聚合酶的描述，正确的有（）A.来源于水生嗜热菌（Thermus aquaticus）B.具有5→3聚合酶活性C.具有3→5外切酶活性D.耐高温，在72℃活性最高E.可用于普通PCR和实时荧光定量PCR多重PCR的关键是（）A.设计多对引物B.控制引物浓度C.优化退火温度D.控制循环次数E.提高模板浓度普通PCR失败的可能原因包括（）A.引物设计不合理B.退火温度过高或过低C.模板DNA降解或浓度过低D.dNTP耗尽E.酶失活关于实时荧光定量PCR中的荧光探针，常用的类型有（）A.SYBR GreenI B.TaqMan探针C.分子信标D.双标记引物E.荧光淬灭剂以下关于PCR产物克隆的描述，正确的有（）A.可将PCR产物连接到载体上B.常用T-A克隆方法C.需使用限制性内切酶切割产物D.可用于基因测序E.产物需先纯化再连接PCR技术的发展方向包括（）A.更高特异性和灵敏度B.多重和复合检测C.自动化和高通量D.便携式快速检测E.与其他技术联用（如芯片技术）第6页共9页

三、判断题（共20题，每题1分，对的打√，错的打×）PCR技术的本质是模拟体内DNA复制过程（）普通PCR反应中，退火温度必须等于引物的Tm值（）dNTP浓度过高会导致PCR反应非特异性增加（）实时荧光定量PCR可实现对起始模板量的绝对定量（）引物二聚体的产生是由于引物浓度过高（）PCR反应中，延伸时间越长，产物长度越长（）RT-PCR是以RNA为模板合成cDNA的过程（）巢式PCR的特异性通常高于普通PCR（）Taq DNA聚合酶具有5→3外切酶活性（）退火温度过低会导致引物与模板结合的特异性提高（）多重PCR可扩增多个不同的靶序列（）Mg²⁺浓度是影响PCR反应特异性的关键因素之一（）实时荧光定量PCR的结果可通过标准曲线计算起始模板量（）PCR产物中出现非特异性条带可能是因为引物设计不合理（）Touch-down PCR通过逐渐降低退火温度提高产物特异性（）dNTP是PCR反应的能量来源（）实时荧光定量PCR的荧光信号在每个循环中都可被检测（）引物的G+C含量应尽量接近50%，以保证结合稳定性（）普通PCR的产物可以直接用于基因测序（）巢式PCR适用于低丰度模板的检测（）

四、简答题（共2题，每题5分）简述PCR（聚合酶链式反应）的基本原理及主要步骤简述实时荧光定量PCR的工作原理及主要应用参考答案第7页共9页

一、单项选择题C

2.B

3.C

4.A

5.A

6.B

7.C

8.B

9.A

10.BA

12.C

13.D

14.A

15.A

16.A

17.C

18.A

19.C

20.BA

22.D

23.A

24.C

25.D

26.C

27.B

28.B

29.B

30.C

二、多项选择题ABCDE

2.ABCDE

3.ABCE

4.ABCDE

5.ABC

6.ABCD

7.ABCD

8.ABCDE

9.ABCDE

10.ABCABCD

12.ABCDE

13.ABDE

14.ABCD

15.ABDE

16.ABC

17.ABCDE

18.ABC

19.ABDE

20.ABCDE

三、判断题√

2.×（退火温度通常比Tm值低3-5℃）

3.√

4.√

5.√

6.×（延伸时间取决于产物长度，一般1min/kb）

7.√

8.√

9.×（Taq酶无外切酶活性）

10.×（退火温度过低特异性降低）√

12.√

13.√

14.√

15.×（Touch-down PCR是逐渐降低退火温度）

16.×（dNTP是原料，能量来自dATP等水解）

17.√

18.√

19.√

20.√

四、简答题PCR基本原理及主要步骤原理通过模拟体内DNA半保留复制，在体外快速扩增特定DNA片段，使靶序列以指数形式增长主要步骤

（1）变性94-95℃，DNA双链解开为单链；

（2）退火55-65℃，引物与模板特定序列互补结合；第8页共9页

（3）延伸72℃，DNA聚合酶从引物3端延伸合成新链重复循环25-35次，最终获得大量靶序列实时荧光定量PCR工作原理及应用原理在PCR反应体系中加入荧光物质（如SYBR GreenI或荧光探针），通过监测每个循环中荧光信号的强度变化，实时反映产物生成量，结合标准曲线实现对起始模板的定量主要应用基因表达分析、病原体定量检测（如病毒载量）、基因突变检测、药物疗效评估等第9页共9页。